澤漆水煎劑體外抑菌的療效作用研究※

● 郁 利 吳昆侖 都樂亦 葉 璐▲

中藥澤漆是指大戟科二年生草本植物澤漆(Euphorbia helioscopia L.)的全草，別名桼莖、貓兒眼睛草、綠葉綠花草等，全國大部分地區均有分布，尤以江浙一帶產量較多。出于《本經》，其性味苦，微寒，功效除能利水、化痰、散結外，還能殺蟲[1]。

筆者與上海市浦東新區公利醫院中醫科的吳昆侖主任合作，對澤漆單味藥物進行深入的研究，前期應用其水煎劑治療慢性牙周炎、復發性口瘡、護理臥床住院病人口腔，均取得良好的療效[2,3]，為了進一步明確澤漆水煎劑的治療作用是否是通過對口腔常見細菌的抑制，進行了如下體外試驗。

1 材料與方法

1.1一般材料選擇口腔常見菌種15種：金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、乙型溶血性鏈球菌(β hemolytic streptococcus)、銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、白色念珠菌(Candida albicans)、粘性放線菌(Actinomyces viscosus)、肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumonia)、大腸埃希菌(E.coli)、鮑氏不動桿菌(Acinetobacter baumannii)、弗氏檸檬酸桿菌(Citrobacter freundii)、沙雷菌(Shewanella oneidensis)、雙歧桿菌(Bifidobacterium)、嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)、卟啉單胞菌(Porphyromonsginglivlis)、梭形桿菌(Fusiform bacillus)和中間普雷沃菌(Prevotella intermedia)

實驗藥物為澤漆水煎液，單味澤漆(產地安徽，上海萬仕誠國藥制品有限公司，批號20170326-1)，制備工藝為：10倍量的蒸餾水，浸泡60min，煮沸后煎煮15min，過濾藥液。于設定溫度為4℃的冰箱內冷藏備用，存放時間小于14天。根據前期預實驗結果，我們將澤漆水煎原液分別稀釋1倍和4倍，制備成低、中、高三個濃度梯度。陽性對照藥物為復方氯己定含漱液(國藥準字H10920104，深圳南粵藥業有限公司生產)，陰性對照為生理鹽水。

1.2方法

1.2.1 細菌菌液的配置 將供試菌種移接入相對應的試管斜面培養基[胰蛋白胨10g，酵母提取物(Yeast extract)5g，氯化鈉(NaCl)10g，瓊脂20g，蒸餾水1000mL，pH7.4～7.6]上，置于37℃恒溫培養箱內培養24h，菌液濃度為2×108CFU/ml，4°C冷藏備用。

1.2.2 真菌菌液的配置 將真菌接種在培養基(蛋白胨5g，酵母浸出粉2g，葡萄糖20g，磷酸氫二鉀1g，硫酸鎂0.5g，蒸餾水1000mL，pH6.2～6.6)上，28°C培養1～4天，菌液濃度為2×108CFU/ml，4°C冷藏備用。

1.2.3 檢測方法 采用紙片擴散法(K-B法)進行檢測。將菌液均勻涂在直徑為9cm的哥倫比亞血瓊脂培養基上，把直徑為6mm的濾紙片(吸液量20μl)貼于該培養基上，中央1個，周圍4個，濾紙片分別用澤漆水煎液(低、中、高三個濃度梯度)、復方氯己定含漱液和生理鹽水浸透，在微需氧環境培養3天后觀察結果。所有體外抑菌實驗重復3次。

1.2.4 判定標準 以抑菌直徑>10mm為高度敏感，7mm<抑菌直徑≤10mm為中度敏感，2mm<抑菌直徑≤7mm為低度敏感，抑菌直徑≤2mm為不敏感。

1.2.5 統計學方法 采用SPSS20.0統計學軟件對數據進行統計學分析處理，計量資料用均數±標準差，兩組間比較采用t檢驗，多組間比較采用one-way ANOVA檢驗。P<0.05則表示具有統計學差異。

2 結果

2.1澤漆水煎劑與復方氯己定含漱液的體外抑菌效果二者均具有低度敏感的抑菌作用。在同一細菌培養基中，觀察了三個濃度梯度的澤漆水煎劑和復方氯己定含漱液(陽性對照)的抑菌效果，結果顯示澤漆水煎劑與復方氯己定含漱液均具有低度敏感的抑菌作用。見圖1。

圖1 澤漆水煎劑和復方氯己定含漱液的體外抑菌效果典型圖

注：5個濾紙片，中央1個，周圍4個。中央1個為生理鹽水陰性對照，無藥物擴散而顏色最淺的為陽性藥對照(9點)。澤漆水煎劑濃度梯度依次為低濃度(0點)，中濃度(3點)，高濃度(6點)。

表1 濃度梯度澤漆水煎劑對15種口腔常見菌種的抑菌作用

注：與復方氯己定含漱液(陽性對照組)相比較，aP<0.05；與中、高濃度澤漆水煎劑相比較，bP<0.05；與低、高濃度澤漆水煎劑相比較，cP<0.05；與低、中濃度澤漆水煎劑相比較，dP<0.05

2.2三種濃度澤漆水煎劑抑菌效果比較不同濃度梯度澤漆水煎劑對不同的菌種抑菌效果不同。低濃度對需氧菌種的金色黃葡萄球菌(P<0.05)和白色念珠菌(P<0.05)具有較好的抑菌作用，中濃度對銅綠假單胞菌(P<0.05)和兩歧雙歧桿菌(P<0.05)抑制效果較好，而高濃度對需氧菌種的乙型溶血性鏈球菌(P<0.05)和大腸埃希菌(P<0.05)的抑制效果較好。見表1。

2.3與復方氯己定含漱液的抑菌效果比較與復方氯己定含漱液相比較，低濃度的澤漆水煎劑對金色黃葡萄球菌(P<0.05)和白色念珠菌(P<0.05)、中濃度的澤漆水煎劑對兩歧雙歧桿菌(P<0.05)以及高濃度的澤漆水煎劑對乙型溶血性鏈球菌(P<0.05)和大腸埃希菌(P<0.05)的抑菌效果均優于復方氯己定含漱液。對銅綠假單胞菌和中間普雷沃菌的抑菌效果與復方氯己定含漱液相比較沒有統計學差異(P>0.05)。見表1。

3 討論

慢性口腔感染如慢性牙周炎等是常見病多發病，在我國的患病率占到70%以上[4]，當前的主要治療方案是通過潔治術清除菌斑和牙石，但是對于炎癥較重的患者仍需要局部的藥物治療，如復方氯己定含漱液，甚至有些患者需要全身抗生素的使用[5]。無論全身還是局部，長時間使用抗生素易產生細菌耐藥。因此筆者積極探尋中醫藥療法。

吳昆侖主任的導師善用澤漆內服治療咳喘病。在對澤漆進行深入研究后，吳主任發現《本草綱目》中提到：“牙痛。用澤漆研為末，開水泡汁漱口?！盵6]繼而嘗試將之應用于治療慢性牙周炎、復發性口瘡，護理住院臥床病人口腔等領域，均取得了較好的療效。

慢性牙周炎的使動因子是牙菌斑的堆積，復發性口瘡存在口腔感染的因素[7]，臥床住院病人也需要保持口腔清潔，預防感染?，F代藥理研究亦顯示澤漆有抑菌作用。因而筆者與吳昆侖主任一同對澤漆水煎劑體外抑制口腔細菌的種類進行了探索。

本研究選取15種口腔內常見的細菌進行試驗，結果顯示不同濃度澤漆水煎劑對金黃色葡萄球菌、白色念珠菌、兩歧雙歧桿菌、乙型溶血性鏈球菌、大腸埃希菌具有良好的抑菌作用，其效果優于傳統藥物復方氯已定。在免疫力低下以及糖尿病、腫瘤和類風濕關節炎的患者中更易發生金黃色葡萄球菌和白色念珠菌導致的口腔和齒齦感染[8-11]?，F代研究發現雙歧桿菌和正畸白斑的發生有一定因果關系[12]。此外，乙型溶血性鏈球菌是感染性心內膜炎的致病菌，長期的口腔鏈球菌感染是感染性心內膜炎復發的危險因素[13]。中間普雷沃菌亦被認為是慢性牙周炎相關的致病微生物[14]。

從本研究結果可以看出，澤漆水煎劑對口腔常見細菌，具有廣譜的抑菌效果，并確有可能通過抑制口腔常見感染菌群的生長來達到治療效果。

澤漆水煎劑的抑菌機制目前尚不完全清楚，已有的研究發現大戟科藥物尤其是澤漆中有效成分假白欖烷類具有抑菌作用[15]，也有研究報道1-ethoxypentacosane， heptacosan-1-ol 和β-谷甾醇可能是抑菌的主要成分[16]。澤漆抑菌的確切藥理作用有待進一步深入研究。

筆者在臨床應用澤漆水煎劑治療口腔疾病，的確取得了較好的療效，但本實驗中澤漆對細菌的敏感性不高，可能有以下原因：①本研究采用的紙片擴散法(K-B法)是體外抑菌試驗中最常用的方法。澤漆水煎劑為懸濁液，成分較為復雜，其中的抑菌活性成分可能存在具揮發性、對熱敏感，導致藥物揮發等因素很可能影響到結果的準確性。②口腔微生物極為豐富，有研究者發現涵蓋了22個細菌門的318個細菌屬[17]，本研究僅選取了常見的15種常見口腔致病菌進行研究，可能與澤漆水煎劑實際的抑菌譜尚存在一定差異。下一步，筆者將對澤漆水煎劑進行稀釋法定量測定，進一步闡明澤漆水煎劑的藥效學數據，評估其抑菌性能，并深入探究澤漆的抑菌機制研究。