芩枳丸多指標成分含量測定研究△

白雪潔，于淼，劉秀華

(1.長春醫學高等專科學校，吉林 長春 130031；2.長春三德天晟科技有限公司，吉林 長春 130012；3.吉林省吉測檢測技術有限公司，吉林 長春 130117)

1 儀器與試劑

Agilent 1220型高效液相色譜儀(美國安捷倫)；KQ-250型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；ME204E電子天平(梅特勒-托利多)。

純凈水(娃哈哈)，甲醇(色譜純)，其他試劑均為分析純。橙皮苷、黃芩苷、黃芩素、大黃素、大黃酚對照品(含量均大于99%，批號分別為110721-201014、110715-201016、111595-200905、110756-200110、110796-201017，中國食品藥品檢定研究院)。芩枳丸(規格為：5.4 g/袋；批號分別為S1：V01020，S2：V01021，S3：V01022，S4：V01023，S5：V01024，S6：T01005，S7：T01006，S8：T01007，S9：T01008，S10：T01009)。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

Agilent 1220型高效液相色譜儀，Agilent C18(4.6 mm×250 mm，5m)色譜柱；進樣量：10 μL；柱溫：25 ℃；檢測波長：260 nm；流動相：甲醇(A)-0.1%磷酸溶液(B)；流速：1.0 mL·min-1。

表1 梯度洗脫程序

2.2 溶液的制備

2.2.1 供試品溶液的制備 取芩枳丸1袋，研細，取約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率250 W，頻率40 kHz)30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.2.2 對照品溶液制備 分別精密稱取橙皮苷、黃芩苷、黃芩素、大黃素、大黃酚對照品適量，精密稱定，置于同一10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，再精密吸取1.0 mL置于同一10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成質量濃度分別為0.060、0.098、0.008、0.012、0.025 mg·mL-1的混合對照品溶液。

2.3 多指標含量測定方法學

2.3.1 線性關系考察 分別吸取2.2.2混合對照品溶液2、4、8、12、16、20 μL，按2.1項下色譜條件進行測定，以各對照品的進樣量為橫坐標、峰面積為縱坐標，計算得線性方程。結果表明各對照品在相應進樣量范圍內線性關系良好。

表2 回歸方程與線性范圍

2.3.2 穩定性試驗 取同一供試品(S3)溶液，分別于0、4、8、12、24、48 h按2.1項下色譜條件進行測定，結果橙皮苷、黃芩苷、黃芩素、大黃素、大黃酚含量的RSD分別為1.2%、0.7%、1.6%、1.4%、1.3%。

2.3.3 精密度試驗 取同一供試品(S3)溶液，按2.1項下色譜條件下連續進樣6次，結果橙皮苷、黃芩苷、黃芩素、大黃素、大黃酚含量的RSD分別為1.1%、0.6%、1.1%、1.2%、1.2%。

2.3.4 重復性試驗 取同一供試品(S3)按2.2.1項下方法制備6份供試品溶液，按2.1項下色譜條件進行測定，結果橙皮苷、黃芩苷、黃芩素、大黃素、大黃酚含量的RSD分別為1.7%、0.9%、1.4%、1.2%、1.4%。

2.3.5 加樣回收率試驗 分別精密稱取橙皮苷對照品17.54 mg、黃芩苷對照品32.02 mg、黃芩素對照品2.82 mg、大黃素對照品3.14 mg、大黃酚對照品7.52 mg于同一10 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻。取已知含量的同一批芩枳丸(S3)6份各約0.25 g，精密稱定，分別加入上述橙皮苷、黃芩苷、黃芩素、大黃素、大黃酚混合對照品1 mL，按2.2.1項下方法制備供試品溶液，按2.1項下色譜條件進行測定，進行加樣回收率考察，橙皮苷、黃芩苷、黃芩素、大黃素、大黃酚的平均回收率結果見表3。

2.3.6 樣品含量測定 精密稱取10批芩枳丸樣品，分別按2.2.1項下方法制備供試品溶液，按2.1項下色譜條件進行測定，計算橙皮苷、黃芩苷、黃芩素、大黃素、大黃酚的含量，結果見表4。

表3 芩枳丸中5種成分加樣回收率試驗( n=6)

表4 10批芩枳丸中5種成分含量測定結果

注：A.混合對照品溶液；B.供試品溶液；1.橙皮苷；2.黃芩苷；3.黃芩素；4.大黃素；5.大黃酚。圖1 芩枳丸及對照品高效液相色譜圖

3 討論

本實驗分別對乙腈-磷酸溶液及甲醇-磷酸溶液作為流動相進行了考察[5-9]，甲醇-0.1%磷酸溶液為流動相的梯度洗脫系統，洗脫能力強，色譜信息量大，分離度較好，因此選擇甲醇-0.1%磷酸溶作為流動相系統。考察了不同廠家及型號的色譜柱，Diamonsil(鉆石)C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)、ACE C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)、Agilent C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)，選定了Agilent C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)，該色譜柱對芩枳丸的分離效果較好。采用二極管陣列檢測器進行全波長檢測，在260 nm時，各峰比例適中，故選擇以 260 nm作為檢測波長。

本方法操作簡便，結果準確，可用于同時測定芩枳丸中橙皮苷、黃芩苷、黃芩素、大黃素、大黃酚的含量。