化學發光檢測系統測定總甲狀腺素的正確度研究

石 佳， 盧興兵， 李 勤， 楊舒羽， 王俊卿， 劉冠財， 孫可其， 曾素根

（1. 四川大學華西醫院實驗醫學科，四川 成都 610041；2. 四川邁克生物股份有限公司參考系統部，四川 成都 611731）

血清甲狀腺素（thyroxine，T4）水平的準確測定對甲狀腺中毒、T4型甲狀腺功能亢進等疾病的診斷和治療具有重要意義。臨床常用的T4測定方法主要有放射免疫分析法和化學發光免疫分析法，目前應用最廣泛的是化學發光免疫分析法。由于各廠家的檢測系統不完全相同，因此可能會導致檢測結果出現不一致。為此，本研究以同位素稀釋液相色譜串聯質譜法（isotope dilution liquid chromatography tandemmass spectrometry，ID-LC-MS/MS）作為血清T4測定的參考方法，將臨床常用的3種化學發光檢測系統與參考方法進行方法學比對，評價3種化學發光檢測系統的正確度。

1 材料和方法

1.1 樣本

收集四川大學華西醫院臨床新鮮血液樣本40例，每例5 mL，濃度范圍為29.7～237.8 nmol/L。樣本要求無溶血、黃疸及脂血，無任何抗凝劑及分離膠，試管（紅頭）由美國BD公司提供。T4標準物質（IRMM-468）由歐洲標準物質與測量研究所（the Institute for Reference Materials and Measurements，IRMM）提供。

1.2 儀器與試劑

Xevo TQS超高效液相色譜串聯三重四級桿質譜儀由美國Waters公司提供。cobas e601全自動電化學發光免疫分析儀及配套試劑（電化學發光法）由瑞士羅氏公司提供，簡稱e601；ARCHTECT i2000SR化學發光免疫分析儀及配套試劑（吖啶酯化學發光法）由美國雅培公司提供，簡稱i2000SR；IS1200全自動化學發光測定儀及配套試劑（化學發光法）由四川邁克生物股份有限公司提供，簡稱IS1200。

1.3 方法

1.3.1 參考方法正確度驗證 嚴格按照檢驗醫學溯源性聯合委員會（the Joint Committee for Traceability in Laboratory Medicine，JCTLM）推薦的T4參考方法制備標準液和內標溶液，篩選色譜和質譜條件，建立檢測T4的ID-LC/MS/MS方法，并對其正確度進行驗證[1-5]。

1.3.2 方法學比對 參考方法以正確度質控物進行質量控制，要求測定結果與靶值的相對偏移＜2%。3種化學發光檢測系統（e601、i2000SR、IS1200）分別按照實驗室校準和質控規則進行校準和室內質控。參考方法和3種化學發光檢測系統滿足要求后同時測定40例新鮮臨床血清樣本，參照美國臨床實驗室標準化協會（the Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）EP9-A3文件及WS/T 407—2012《醫療機構內定量檢驗結果的可比性驗證指南》對結果進行線性回歸和偏移分析。

1.4 統計學方法

參照YY/T 1223—2014《總甲狀腺素定量標記免疫分析試劑盒》和美國臨床實驗室改進修正法規（the Clinical Laboratory Improvement Amendments of 1988，CLIA'88）制定各檢測系統測定T4的評價標準，數據采用Excel 2013軟件進行統計分析。（1）線性回歸分析：以參考方法測定結果為X值，化學發光檢測系統的測定結果為Y值，作最小平方和線性回歸分析，線性相關系數（r）應≥0.975；（2）偏移分析：以參考方法的測定結果為X值，以化學發光檢測系統測定結果與參考方法的相對偏移為Y值，作散點圖，以±15%為相對偏移的控制限，95%以上樣本的測定結果應滿足要求。計算40例樣本的測定結果與參考方法測定結果的平均相對偏移并以此評價3種化學發光檢測系統的系統偏移。

2 結果

2.1 參考方法的正確度

建立的參考方法（ID-LC-MS/MS）連續3年參加由國際臨床化學與檢驗醫學聯合會（the International Federation of Clinical Chemistry and Laboratory Medicine，IFCC）組織的參考實驗室外部質量控制（the International Federation of Clinical Chemistry and Laboratory Medicine External Quality Assessment Scheme for Reference Laboratories in Laboratory Medicine，RELA）評價，結果顯示該法與主導實驗室（德國波恩大學臨床生物化學研究所）的測定結果十分接近，相對偏移均＜2%。該法還通過了中國合格評定國家認可委員會（China National Accreditation Service for Conformity Assessment，CNAS）ISO15195的認可，并進入了JCTLM的醫學參考測量服務實驗室列表，由此表明建立的參考方法是正確、可靠的[6-8]。

2.2 方法學比對

2.2.1 e601與參考方法的比對結果 e601與參考方法的線性回歸方程為Y=0.958 2X+3.76，r2=0.963 9，結果為可接受，見圖1。偏移分析結果顯示單個樣本的相對偏移僅有1例超出限值，平均相對偏移為-0.83%，結果為可接受，見圖2。

圖1 e601與參考方法的線性回歸分析

圖2 e601的相對偏移

2.2.2 i2000SR與參考方法比對結果 i2000SR與參考方法的線性回歸方程為Y=0.747 7X+11.21，r2=0.967 1，結果為可接受，見圖3。偏移分析結果顯示單個樣本的相對偏移有27例超出限值，平均相對偏移為-15.24%，結果為不可接受，見圖4。

2.2.3 IS1200與參考方法的比對結果 IS1200與參考方法的線性回歸方程為Y=0.992 5X+10.59，r2=0.969 0，結果為可接受，見圖5。偏移分析結果顯示單個樣本的相對偏移有2例超出限值，平均相對偏移為5.83%，結果為可接受，見圖6。

圖3 i2000SR與參考方法的線性回歸分析

圖4 i2000SR的相對偏移

圖5 IS1200與參考方法的線性回歸分析

圖6 IS1200的相對偏移

3 討論

近年來，隨著社會的不斷發展，人們生活及工作的壓力越來越大，導致甲狀腺疾病的發病率持續上升。另外，隨著國家二胎政策的放開，孕婦人群數量陡增，甲狀腺功能也成為了孕檢必查的項目。因此，總T4、促甲狀腺素和游離甲狀腺激素等5項甲狀腺功能指標對基層保健醫生和內分泌科醫生尤為重要。目前，臨床實驗室已經認識到甲狀腺功能檢測標準化的重要性。為此，IFCC在2015年開展了甲狀腺功能檢查標準化的合作組項目，旨在解決甲狀腺功能檢查的標準化和一致性。

本研究采用方法學比對的方式對3種臨床實驗室常用的化學發光檢測系統（e601、i2000SR、IS1200）測定T4的正確度進行了初步評價。評價結果顯示e601和IS1200的正確度良好，而i2000SR雖然與參考方法相關性較好，但是出現較明顯的系統偏移，需對檢測系統進行偏移校正。雖然本研究參考了CLSI EP9-A3等文件的評價方法，但由于實驗條件的限制，考慮到采用的參考方法和3種化學發光檢測系統分別來自2個不同的實驗室、參考方法樣本測定時間較長、臨床實驗室很難收集到高濃度樣本等因素，因此本研究并未嚴格按照CLSI EP9-A3文件的要求，對40例樣本分5 d進行雙份重復測定，而是對CLSI EP9-A3文件規定的評價方式進行了一定的簡化。這樣雖然在一定程度上影響了本研究評價結果的精確度，但由于采用了線性回歸分析和偏移分析這2種直觀、簡便的分析方法，還是具有一定的客觀性和合理性。

建立檢驗結果的量值溯源是保證各實驗室檢測結果準確、可比的有效手段，也是促進行業技術交流的基礎，更是評價體外診斷產品質量和臨床實驗室檢測質量的重要指標。開展量值溯源工作的基礎是建立檢驗醫學參考系統，包括參考方法、參考物質、參考實驗室。2005年，在國家衛生計生委臨床檢驗中心的倡導和組織下，國內開始建立臨床酶學參考方法，經過10余年的發展，現已從最初的臨床酶學、小分子代謝物等采用紫外分光光度法測定原理的二級參考方法擴展到甾體激素、25-羥基維生素D、糖化血紅蛋白等采用液相色譜串聯質譜（liquid chromatography tandem-mass spectrometry，LC-MS/MS）測定原理的一級參考方法。目前，國內已經有7家醫學參考實驗室進入了JCTLM的參考測量服務實驗室列表，意味著國內完全有條件將部分檢測項目進行標準化，但是檢測標準化通常應具有完整的溯源鏈，而處在溯源鏈中間層次的生產廠商是關鍵的一環，起到承上啟下、量值傳遞的作用。檢驗醫學的檢測系統包括儀器、試劑、校準品等，通常都是由生產廠商提供，也就是說檢驗醫學產品的提供者能在很大程度上左右最終檢驗結果的準確性，這就需要生產廠商建立檢測系統的溯源性，保證其提供的儀器和/或試劑所給出的檢測結果的準確性。本研究評價的e601和IS1200的T4項目均具有量值溯源性描述，分別溯源至同位素稀釋氣相質譜和ID-LC-MS/MS參考方法，而i2000SR的T4項目無溯源性描述。本研究結果顯示，具有溯源性的檢測系統的正確度明顯好于未溯源的檢測系統。由此可見，量值溯源是保證檢測系統正確度的重要前提，也是保證患者樣本檢測結果準確性的重要條件[9-10]。

綜上所述，檢測系統是否具有量值溯源是臨床實驗室選擇檢驗產品和服務的重要依據，臨床實驗室需了解檢測系統的測量不確定度是否能夠滿足實驗室質量控制的預期要求。據統計，醫生診斷結論80%的信息來自于臨床檢驗結果，如果檢驗結果的偏差降低10%，假陰性率將降低10%～50%[11]。通過量值溯源可大幅提高檢驗結果的正確度，也勢必能大幅提高臨床診斷的可靠性。