黃芩酒炙工藝優化研究

王學軍

（商洛學院 生物醫藥與食品工程學院，陜西商洛 726000）

黃芩[Scutellaria baicalensis Georgi]是唇形科植物黃芩的干燥根，于春秋二季采挖，曬后除去粗皮，曬干[1-2]。具有清熱燥濕、瀉火解毒、止血安胎等功效[3-4]，是中醫臨床常用中藥之一。中藥炮制是我國中醫藥的特色之一，也是我國最具知識產權的學科之一，中藥炮制直接關系著中藥的臨床療效[5-6]。作為一項傳統的中藥制藥技術，長期以來，中藥炮制存在著機制不清，工藝粗糙，炮制工藝主要依靠主觀感覺來控制的諸多弊端，難以保證中藥飲片的質量，因此，利用現代科技手段揭示中藥炮制過程中的科學內涵，規范炮制工藝，為臨床合理用藥奠定良好基礎就顯得尤為必要。

黃芩的炮制品主要有黃芩片、黃芩炭、酒黃芩等，其中以酒黃芩的應用最為普遍[7-8]，目前 2015年版《中國藥典》[9]收載的炮制品有酒黃芩和黃芩片兩個品種。然而藥典中所收載的黃芩酒炙工藝仍然缺乏如炒制溫度、炒制時間等具體的工藝參數,因此，有必要利用現代科技手段來規范黃芩的炮制工藝，而且，黃芩為商洛五大商藥之一，通過研究黃芩的炮制工藝，有助于商洛地區中藥產業向規范化、現代化方向邁進，有助于商洛地區大量黃芩資源的開發利用，這對于農民增產增收，促進商洛地區經濟的發展都具有十分重要的意義。

1 儀器與材料

HH-6型電熱恒溫水浴鍋（北京科偉永興儀器有限公司），DHG-9123A型電熱恒溫鼓風干燥箱（上海齊欣科學儀器有限公司），LC-20A型反相高效液相色譜儀（四元泵，自動進樣器，DAD檢測器），島津企業管理（中國）有限公司。

黃芩苷對照品（批號：110715-200815，含質量分數95.2%），中國藥品生物制品鑒定研究院，黃芩藥材購于商洛市白楊店村中藥材收購站，黃酒為河南濮陽亞光牌炮制用黃酒，乙腈與甲醇均為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 實驗方法

2.1 色譜條件

Agilent ODS-C18 色譜柱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)；流動相：乙腈-水(60：40)進行洗脫；檢測波長：280 nm；流速：1.0 mL·min-1；柱溫 28 ℃；進樣量 10 μL。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取在60℃減壓干燥4 h的黃芩苷對照品6.0 mg，加甲醇定溶于100 mL的容量瓶，即得。

2.3 供試品溶液的制備

取經過炮制的黃芩飲片，粉碎，稱取黃芩中粉約 0.3 g，精密稱定，加入 70%乙醇 40 mL，加熱回流提取3 h，濾過，濾液置于100 mL的量瓶中，用少量70%乙醇洗滌殘渣，洗滌液合并濾入同一溶量瓶中，用70%乙醇定溶至刻度，搖勻，精密量取1 mL，置于10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，即得[9]。

2.4 線性關系考察

精密吸取黃芩苷對照品溶液 1、2、3、4、5 mL，分別置于10 mL容量瓶中，并用甲醇稀釋至刻度線，即得系列對照品溶液。并按照“2.1”項下所示色譜條件進樣量10 μL，測定黃芩苷峰面積并考察其線性關系。

2.5 精密度試驗

精密吸取同一份供試品溶液，重復進樣5次，記錄黃芩苷峰面積，考察該方法的精密度。

2.6 穩定性試驗

取同一份供試品溶液， 分別在 0、2、5、10、16、24 h進樣，測得黃芩苷峰面積，考察方法在24 h內的穩定性。

2.7 回收率試驗

精密稱取已知含量的酒黃芩粉末9份，每份約0.3 g，精密稱定，按照樣品中黃芩苷含量的80%、100%、120%精密加入黃芩苷對照品適量，按照“2.3”項下方法制成3種質量濃度的供試品溶液各3份，按照“2.1”項下色譜條件進樣分析并考察該方法的回收率。

2.8 黃芩酒炙的正交試驗

本文在參考文獻的基礎上[10-11]，以黃芩苷的溶出率為考察指標，采用L9(34)正交試驗設計，實驗因素水平，見表1。取黃芩飲片200 g，按照因素水平表中酒用量、悶潤時間、炙炒時間進行炮制后，迅速倒入晾盤內攤開放涼。按照2.1項下制成供試品后，進行含量測定。對黃芩酒炙過程中酒用量、悶潤時間、炙炒時間這三個工藝參數進行篩選。

表1 正交試驗設計因素與水平

3 結果與分析

3.1 方法學考察

3.1.1 線性關系考察

按照“2.1”項下所示色譜條件進行檢測，進樣量10 μL，測定峰面積。以濃度為橫坐標，對應的峰面積為縱坐標，進行線性回歸，得到黃芩苷回歸方程為 y=1 026.8x-2 923.1,R=0.999 3。

3.1.2 精密度試驗

精密吸取同一份供試品溶液，重復進樣5次，每次10 μL，測定黃芩苷峰面積，實驗結果見表2，從表2可以看出，黃芩苷峰面積的RSD為0.2%,表明儀器的精密度良好。

表2 黃芩苷精密度試驗

3.1.3穩定性試驗

由表3可知，黃芩苷24 h內峰面積的RSD值為1.2%，表明供試品溶液在室溫放置24 h內穩定。

表3 黃芩苷穩定性試驗

3.1.4 回收率試驗

回收率實驗結果見表4，由表4可以看出，測得黃芩苷平均回收率為99.5%，9次實驗結果RSD值的平均值為1.7%。

3.2 黃芩酒炙的正交試驗

本文以黃芩苷的溶出率為考察指標，采用L9(34)正交試驗設計，對黃芩酒炙過程中酒的用量、悶潤時間、炙炒時間這三個工藝參數進行篩選，實驗結果見表5和表6，方差分析見表7。

表4 黃芩苷回收率試驗

表5 黃芩酒炙的正交試驗結果

表6 黃芩酒炙的極差分析

由表5、表6和表7可以看出，各因素對黃芩苷溶出量的影響大小順序依次為：A>B>C，即加酒量對黃芩苷溶出率的影響最為顯著，其次為悶潤時間，最后為炙炒時間，其中加酒量對黃芩苷的溶出率具有顯著性意義，結合極差分析，確定黃芩的最佳炮制工藝條件為A2B3C3，即酒用量為15%，悶潤時間為15 min，炙炒時間40 min，在此工藝條件下，黃芩苷的溶出量最大。

3.3 驗證性試驗

分別取凈黃芩飲片500 g三批次，按本研究確定的最佳炮制工藝條件炒炙，然后進行黃芩苷溶出率的檢測。結果發現，三批次黃芩苷的溶出率RSD值小于3，表明本研究確定的炮制工藝是穩定的。

4 結論與討論

本研究以黃芩苷的溶出量為考核指標，采用正交實驗法優選了黃芩的炮制工藝，結果表明，黃芩的最佳酒炙工藝為：酒用量10%，悶潤時間15 min，炙炒時間40 min，在此最佳工藝條件下對黃芩炮制后，黃芩苷的溶出率最高，為16.72%。這與楊中林等[10]的研究結果基本一致，但楊中林等對黃芩酒炙的悶潤時間沒有考察，本研究發現，悶潤是中藥炮制的一個很重要的因素，悶潤時間不充分，炮制效果不理想，所以，中國藥典規定黃芩酒炙炒干之前，要加黃酒悶透。

然而中藥及其制劑產生的療效不是某單一成分作用的結果，也不是某些成分簡單作用的加和，是各成分之間的協同作用，因此，用黃芩苷一種成分作為檢測指標確定的最佳炮制工藝還需要采用其他的方法更進一步的驗證。另外，黃芩苷分子結構式中有鄰二酚羥基，遇光、熱易分解變化，是一種相對不穩定的黃酮類化合物[12]，因此，在炮制時溫度不能過高，盡量縮短受熱時間,以免分解破壞黃芩苷。