積水D-二聚體試劑在STA-R型全自動血凝分析儀上的性能評價

黃穎 石亞玲 劉艷霞 譚明凱

（廣州市第八人民醫院 廣州 白云 510440）

近年來，D-二聚體（DD）作為體內交聯纖維蛋白特異性降解產物，其定量檢測對血栓相關疾病的診斷、療效判斷及評價預后有重要的價值。目前DD檢測多使用乳膠增強免疫比濁法，但由于不同廠家使用不同的抗DD抗體，不同試劑測定的結果缺乏可比性[1]。鑒于當下檢測DD的儀器和方法多種多樣，本實驗主要針對積水D-二聚體試劑盒在STA-R型全自動血凝分析儀上的性能進行評價，評價內容包括：批內精密度、日間精密度、準確度、檢測低限和線性檢測范圍。

1.材料與方法

1.1 儀器與試劑

STA-R型全自動血凝分析儀；D-二聚體檢測試劑（批號836RHL）、定標液（批號804REL）及高、低值質控品（批號805RFL），購自積水醫療株式公社。

1.2 方法

1.2.1 批內精密度 取低值質控、高值質控和混合血漿各一支，分別重復檢測10次，計算批內精密度的CV和SD。判斷標準按照廠家要求，批內精密度CV＜10%。

1.2.2 日間精密度 參照CLSI EP15-A2文件，使用高、低值室內質控物各1瓶，每瓶平均分5份，每天測4次，連續測5天，計算日間精密度的CV和SD。可接受范圍按照廠家要求，日間精密度CV＜15%。

1.2.3 準確度驗證 對衛生部檢驗中心2017年發放的D-二聚體檢測（DDU）兩次共4個不同批號的室間控制品進行檢測，與允許范圍進行比對，計算絕對偏倚和相對偏倚（%）。

1.2.4 檢測低限的確認 測定空白樣本（生理鹽水）20次，計算均值和標準差。按照99.7%可能性定義檢測低限（lower limit of detection，LLD），LLD=x空白±3s空白。

1.2.5 線性測定范圍確認 參考NCCLS EP6A文件，采用廠家專用高值試劑（H）與生理鹽水（L），按照10L、1H+9L,2H+8L、3H+7L……9H+1L、10H比例配置10個濃度梯度，每個濃度梯度測定2次，求均值，將實測均值與理論值作比較.計算SE%，回歸方程y=bX+a，r2，結果要求SE%≤10%，b值在1±0.03范圍內，r2≥0.975。

2.結果

2.1 積水D-二聚體檢測試劑的批內精密度CV＜10%，符合廠家要求。結果見表1。

表1 批內精密度測定結果

2.2 積水D-二聚體檢測試劑的日間精密度CV＜15%，符合廠家要求。結果見表2。

表2 日間精密度測定結果

2.3 準確度驗證結果

對衛生部檢驗中心2017年發放的D-二聚體檢測（DDU）兩次共4個不同批號的室間控制品進行檢測，結果均在允許范圍內，可接受，檢測值與靶值的絕對偏倚為0.09～0.53，相對偏倚為10.11%～18.75%。結果見表3。

表3 室間質評控制品驗證結果

2.4 檢測低限驗證結果

連續測定空白樣本（生理鹽水）20次，均值為-0.12，標準差為0.19，按照99.7%的可信限，LLD=x空白±3s空白=-0.12+0.19*3=0.45μg/mL。

2.5 積水D-二聚體檢測試劑的線性檢測范圍為0～61.66μg/mL。回歸方程為y=0.9886x+0.0578，r2=0.9992，線性結果可接受。結果見表4。

3.討論

檢測系統或方法的分析性能評價是臨床檢驗質量管理的重要內容。由于D-二聚體高度的敏感性和陰性預示能力，其定量結果在深靜脈血栓（DVT）和肺栓塞（PE）的排除、彌散性血管內凝血（DIC）的診斷及溶栓治療效果檢測等方面的臨床應用價值已得到普遍認可。考慮到D-二聚體檢測在定標品、試劑等方面暫無統一標準，本實驗除了參照CLSI相關文件，也將廠家提供的相關標準納入其中，對積水D-二聚體試劑檢測結果的精密度、準確度、檢測低限和線性檢測范圍進行了評價。

表4 線性區域測定值和理論值

通過精密度驗證可以看出，積水D-二聚體檢測試劑批內精密度CV＜10%，日間精密度CV＜15%，符合廠家提供的標準，精密度驗證通過。

準確度也是檢測系統重要的分析性能之一。本科參考CLSIEP15A文件，對2017年衛生部檢驗中心發放的室間控制品進行檢測，檢測結果與“靶值”進行比對。結果表明，4份控制品的結果均在室間質評要求的范圍內，檢測結果可靠。

檢測低限（LLD）為樣品單次檢測可以達到的檢測響應量對應的分析物量。檢測系統或方法對小于或等于檢測低限的分析物量只能報告為“無分析物檢出”。通常以x空白±2s空白和x空白±3s空白分別估計95.0%和99.7%兩種可能性。積水D-二聚體檢測試劑在STA-R型全自動血凝分析儀上最低檢測限，按照99.7%的可信限為0.45μg/mL，低于積水廠家的產品說明書檢測范圍的低限（0.5μg/mL）。

根據實驗結果分析，D-二聚體的線性檢測范圍為0～61.66μg/mL，說明書提供的線性范圍為0.5～60μg/mL。結合檢測低限和線性檢測范圍結果，廠家提供的檢測范圍0.5～60μg/mL可接受，超出60μg/mL的，直接報告濃度大于60μg/mL。

通過對積水醫療株式公社D-二聚體檢測試劑在STA-R型全自動血凝分析儀上進行的性能評價可以發現，其精密度、檢測低限和線性測量范圍都達到廠家聲明的性能要求，其準確度也通過室間質評得以驗證，可應用于臨床檢測。