高脂誘導(dǎo)肥胖大鼠血清及內(nèi)臟脂肪內(nèi)脂素水平及與肥胖的相關(guān)性

孫 陽 陳樹春

(山東省泰山醫(yī)院內(nèi)分泌科，山東 泰安 271000)

隨著人們飲食結(jié)構(gòu)與生活方式的變化，肥胖癥的發(fā)病率逐年增加。在肥胖患者中，高血壓、冠心病、動脈粥樣硬化、2型糖尿病等發(fā)病率均升高，常并發(fā)睡眠呼吸暫停綜合征，肥胖給很多疾病的預(yù)防及治療增添負(fù)擔(dān)。脂肪組織是一個內(nèi)分泌器官，它能分泌多種脂肪因子〔1〕。內(nèi)脂素是近年來新發(fā)現(xiàn)的脂肪因子，它有多種生物學(xué)作用，與肥胖、胰島素抵抗(IR)的發(fā)生密切相關(guān)〔2，3〕。目前肥胖患者內(nèi)脂素水平尚未完全明確，本研究旨在探討高脂飲食誘導(dǎo)的營養(yǎng)性肥胖大鼠血清內(nèi)脂素水平及內(nèi)臟脂肪內(nèi)脂素蛋白表達(dá)的變化及內(nèi)脂素與肥胖的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1建立肥胖大鼠模型 雄性Wistar大鼠22只，適應(yīng)性喂養(yǎng)1 w后，隨機(jī)分為對照組(NC組)11只，高脂喂養(yǎng)組(HF組)11只。NC組予基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)(熱量組成：碳水化合物65.5%，蛋白質(zhì)24.2%脂肪10.3%)，總熱量348 kcal/100 g；HF組以高脂飼料喂養(yǎng)(熱量組成：碳水化合物20%，蛋白質(zhì)20%，脂肪60%)，總熱量502 kcal/100 g。高脂飼料由美國research diets公司提供。16 w后，測定兩組Lee指數(shù)、體重，判斷造模是否成功。Lee指數(shù)=BW(g)1/3×1 000/體長(cm)。

1.2血清學(xué)指標(biāo)檢測 采用葡萄糖氧化酶法，用Roche公司羅康全快速血糖測定儀檢測空腹血糖；血脂的測定：用酶法檢測膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)，采用美國產(chǎn)Beckman X20自動生化分析儀；血清空腹胰島素，內(nèi)脂素的測定采用酶聯(lián)免疫法。

1.3內(nèi)臟脂肪組織內(nèi)脂素蛋白表達(dá) 提取內(nèi)臟脂肪的組織蛋白，檢測總蛋白含量。分別配制10%分離膠與5%濃縮膠。灌膠在1.5 mm厚的電泳板內(nèi)。每孔上樣60 μg蛋白，其中一上樣孔加入預(yù)染蛋白10 μl。90 V穩(wěn)壓電泳，等溴酚藍(lán)進(jìn)入分離膠后，換用120 V穩(wěn)壓電泳，溴酚藍(lán)前緣移動到凝膠底部時，取出凝膠。轉(zhuǎn)移電流250 mA，轉(zhuǎn)膜60 min。轉(zhuǎn)膜結(jié)束后用5%脫脂奶粉封閉2 h。兔抗大鼠內(nèi)脂素多抗一抗封閉，在4℃冰箱過夜。后用山羊抗兔IgG二抗封閉2 h，用化學(xué)發(fā)光法顯色。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量數(shù)據(jù)正態(tài)方差齊資料組間比較用t檢驗(yàn)，正態(tài)方差不齊資料采用秩和檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Pearson分析。

2 結(jié) 果

2.1兩組各指標(biāo)對比 HF組Lee指數(shù)、體重、內(nèi)臟脂肪含量、血清內(nèi)脂素、空腹血糖、空腹胰島素、穩(wěn)態(tài)模型(HOMA)-IR、TC、TG均顯著高于對照組(P<0.05)。見表1。HF組內(nèi)臟脂肪內(nèi)脂素蛋白表達(dá)水平(0.93±0.16)顯著高于NC組(0.51±0.03)(P<0.05)。

表1 兩組各指標(biāo)數(shù)據(jù)

與NC組比較：1)P<0.05，2)P<0.01

2.2相關(guān)性分析 血清內(nèi)脂素與HOMA-IR、Lee指數(shù)、內(nèi)臟脂肪含量呈正相關(guān)(r=0.877，P<0.01;r=0.608，P<0.01;r=0.716，P<0.01)。內(nèi)臟脂肪內(nèi)脂素與HOMA-IR、Lee指數(shù)、內(nèi)臟脂肪含量呈正相關(guān)(r=0.571，P<0.01;r=0.579，P<0.01;r=0.603，P<0.01)。

3 討 論

肥胖可引起多種代謝紊亂，還可導(dǎo)致多種脂肪因子分泌異常〔4～7〕。內(nèi)脂素有多種生物學(xué)作用和胰島素樣作用，還有促進(jìn)脂肪的合成與聚集的作用。研究表明〔8～12〕，肥胖患者血清內(nèi)脂素水平升高。內(nèi)臟脂肪含量越高，表明內(nèi)臟脂肪的堆積越多。研究發(fā)現(xiàn)〔13〕血漿內(nèi)脂素作為一項(xiàng)獨(dú)立變量與體質(zhì)量指數(shù)呈正相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)動物模型結(jié)果與以往研究相一致。這均提示內(nèi)脂素與肥胖密切相關(guān)，尤其是與內(nèi)臟脂肪的異常堆積相關(guān)。但是肥胖大鼠內(nèi)脂素升高的原因還不明確。分析肥胖大鼠內(nèi)脂素血清水平及蛋白表達(dá)水平的升高可能原因：(1)內(nèi)脂素是由脂肪細(xì)胞分泌的，肥胖大鼠內(nèi)臟脂肪含量增多，內(nèi)脂素的分泌水平升高。(2)有研究發(fā)現(xiàn)，從前脂肪細(xì)胞分化成為脂肪細(xì)胞，內(nèi)脂素表達(dá)升高，內(nèi)脂素重組蛋白可以上調(diào)豬脂肪細(xì)胞過氧化物酶體增殖物激活受體(PPAR)γ mRNA 表達(dá)并促進(jìn)脂質(zhì)積累〔14〕。這提示內(nèi)脂素參與脂肪細(xì)胞周期的調(diào)節(jié)，在脂肪細(xì)胞分化、脂質(zhì)積累中發(fā)揮一定的作用，如此循環(huán)，加重內(nèi)臟性肥胖。(3)脂肪組織甘油水解酶(ATGL)、激素敏感性脂肪酶(HSL)是脂肪分解的限速酶。脂肪組織甘油水解酶是TG水解形成二酰甘油和游離脂肪酸的限速酶，而是甘油二酯水解的限速酶。二者都是 PPARα 的靶基因。在內(nèi)脂素基因表達(dá)抑制的脂肪細(xì)胞中，HSL、ATGL mRNA 的表達(dá)降低，表明 內(nèi)脂素對脂肪分解有調(diào)控作用〔15～17〕。本實(shí)驗(yàn)中肥胖大鼠中內(nèi)脂素水平升高可能使ATGL、HSL表達(dá)水平升高，脂肪分解增強(qiáng)。這可能是肥胖大鼠發(fā)生的代償性機(jī)制。本研究結(jié)果提示內(nèi)脂素與IR密切相關(guān)。但是目前內(nèi)脂素是IR的因還是果，觀點(diǎn)還不統(tǒng)一。有研究〔18〕發(fā)現(xiàn)，網(wǎng)膜脂肪組織比腸系膜脂肪組織有較高的內(nèi)脂素蛋白濃度。此外，內(nèi)脂素蛋白濃度和網(wǎng)膜脂肪組織基因表達(dá)水平與HOMA-IR呈正相關(guān)。糖尿病患者比非糖尿病和糖尿病前期組有顯著較高的內(nèi)脂素蛋白濃度。可能原因是內(nèi)脂素有類胰島素樣作用。由于糖尿病患者的糖耐量受損，從而誘發(fā)網(wǎng)膜脂肪組織分泌內(nèi)脂素，彌補(bǔ)IR。總的來說，這些結(jié)果提示內(nèi)脂素網(wǎng)膜脂肪組織可能在IR中發(fā)揮重要作用。也有研究〔19〕表明，肥胖可使M1型巨噬細(xì)胞遷移到脂肪組織，導(dǎo)致慢性炎癥。并使脂肪組織分泌炎性細(xì)胞因子和趨化因子，如白細(xì)胞介素(IL)-1、IL-6、腫瘤壞死因子(TNF)-α、趨化因子CX3C、CCL2、CCL5、CCL26等，使脂肪因子分泌異常，如脂聯(lián)素、內(nèi)脂素等。在多種細(xì)胞因子的作用下，機(jī)體出現(xiàn)IR。肥胖大鼠組內(nèi)脂素水平與HOMA-IR 呈正相關(guān)，但是內(nèi)脂素與IR的具體因果關(guān)系還需要深入研究。