血清顆粒溶素對鼻咽癌的診斷價值研究

高娟 彭裕萍 張昌明 柳林整 申江江

我國南部地區鼻咽癌（nasopharyngeal,NPC）發病率相對較高，且由于早期NPC缺乏特異性臨床表現，與鼻咽炎（nasopharyngitis，NPT）表現相似，常常誤診[1]。目前臨床診斷NPC主要依靠病理學和CT檢查，但是病理學檢查需要有創的組織活檢，CT檢查在NPC早期無明顯特異性[2]。因此，NPC的早期診斷難度較大。NPC的發病與EB病毒感染有關，因此檢測血清抗EB病毒衣殼免疫球蛋白A（EBV-VCA-IgA）[3]和EB病毒核糖核酸（EBV DNA）[4]等生物標志物可用于疑似NPC患者的早期初步篩查。顆粒溶素（Granulysin，GNLY）是一種促細胞溶解顆粒蛋白，主要由細胞毒性T淋巴細胞和NK細胞分泌[5]。GNLY主要發揮細胞毒性（促進細胞溶解）和促炎作用，可參與機體的排異反應，具有抗菌性和抗腫瘤性[6]。有研究認為GNLY可作為病毒感染的生物標志物[7]，也有研究指出腫瘤（乳腺癌[8]和胃癌[9]）患者存在GNLY異常表達的情況。基于此，本研究綜合分析NPC患者血清GNLY水平的變化，探討GNLY對NPC的診斷價值，現報道如下。

1 對象和方法

1.1 對象 連續納入2016年1月至2017年3月榆林市第一醫院收治住院的NPC患者109例（NPC組），均經病理學檢查確診，納入標準：（1）年齡18～80 歲；（2）無合并其它惡性腫瘤；（3）非孕產婦；（4）無嚴重肝腎功能不全；（5）無合并其他部位感染。另擇同期收治的NPT患者68例設為NPT組，包括扁桃體炎26例、急慢性咽炎25例、鼻前庭囊腫17例；非NPC、非NPT的體檢者60例作為對照組。3組受檢者一般資料比較差異均無統計學意義（均P＞0.05），見表1。本研究經醫院倫理委員會批準，患者均簽署知情同意書。

表1 3組患者一般資料比較

1.2 血清NPC標志物、GNLY水平檢測 3組患者均空腹抽取肘靜脈血約12ml，于4℃下離心20min（3 000r/min），留取上清液置于-80℃冰箱中凍存。選擇血清EBV DNA和EBV-VCA-IgA作為NPC標志物，其中EBV DNA采用熒光定量PCR法檢測，EBV-VCA-IgA、GNLY采用酶聯免疫吸附試驗檢測。EBV-VCA-IgA滴度超過1∶40為陽性，EBV DNA滴度超過1×103拷貝/ml為陽性。

1.3 觀察指標 觀察并比較3組受檢者血清NPC標志物（EBV DNA、EBV-VCA-IgA）陽性率及GNLY水平；比較不同臨床特征NPC患者血清GNLY水平；比較血清GNLY、EBV-VCA-IgA對鼻咽部病變患者NPC的診斷價值。

1.4 統計學處理 應用SPSS 22.0統計軟件；計量資料以表示，多組比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗；計數資料以頻數和構成比表示，組間比較采用χ2檢驗；采用ROC曲線分析血清GNLY、VCAIgA對鼻咽部病變患者NPC的診斷價值；P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 3組受檢者血清NPC標志物陽性率、GNLY水平比較 見表2。

由表2可見，3組受檢者血清NPC標志物陽性率、GNLY水平比較均有統計學差異（均P＜0.05）。NPC組患者血清EBV DNA陽性率、EBV-VCA-IgA陽性率均高于NPT組與對照組（均P＜0.05），血清GNLY水平低于NPT組與對照組（P＜0.05）。NPT組患者血清EBVVCA-IgA陽性率、血清GNLY水平均高于對照組（均P＜0.05）。

表2 3組受檢者血清NPC標志物陽性率、GNLY水平比較

2.2 不同臨床特征NPC患者血清GNLY水平比較 見表3。

由表3可見，血清GNLY水平與NPC患者性別、年齡和有無遠處轉移均無明顯關系（均P＞0.05）。TNM分期Ⅳ期患者血清GNLY水平明顯高于Ⅰ期、Ⅱ期患者（均 P＜0.05），T3～T4期患者高于 T1～T2期患者 （P＜0.05），N3期患者高于 N0期患者（P＜0.05）。

2.3 血清GNLY、EBV-VCA-IgA對鼻咽部病變患者NPC的診斷價值比較 見表4。

由表4可見，血清GNLY水平對鼻咽部病變患者NPC的診斷價值高于EBV-VCA-IgA。以血清GNLY水平≤9.64ng/ml為界時，血清GNLY水平對鼻咽部病變患者NPC的診斷靈敏度為0.852，特異度為0.797。

表3 不同臨床特征NPC患者血清GNLY水平比較（n=109）

表4 血清GNLY、EBV-VCA-IgA對鼻咽部病變患者NPC的診斷價值比較（n=177）

3 討論

GNLY是一種重要的腫瘤免疫細胞因子，其水平可反映腫瘤患者的免疫應答狀態。GNLY參與細胞毒性T淋巴細胞和NK細胞對于腫瘤細胞的免疫應答反應[10]。有研究發現，腫瘤患者血清GNLY水平明顯下降，NK細胞功能抑制和數量減少，提示患者處于免疫抑制狀態[11]。本研究選擇NPC患者為研究對象，結果發現NPC組患者血清GNLY水平明顯低于NPT組與對照組。

本研究結果亦發現，血清GNLY水平對鼻咽部病變患者NPC的診斷價值高于EBV-VCA-IgA。以血清GNLY水平≤9.64ng/ml為界時，血清GNLY水平對鼻咽部病變患者NPC的診斷靈敏度為0.852，特異度為0.797。這提示，對于鼻咽部病變患者，血清GNLY水平檢測有助于區別良惡性病變。GNLY作為細胞毒性T淋巴細胞和NK細胞細胞質顆粒中的天然抗菌肽，早期研究多集中于GNLY的殺菌作用，如結合桿菌等[12]，而后逐步發現GNLY具有抗腫瘤作用。如Alwasaby等[13]學者發現重組GNLY可以促進體外實驗中的肝癌細胞凋亡，而體內實驗發現重組GNLY可以明顯提高腫瘤組織中浸潤的NK細胞數量，激活一系列凋亡通路，抑制腫瘤細胞過度增殖。本研究結果提示，NPC患者血清GNLY水平下降，腫瘤免疫應答能力減弱。

本研究還發現，雖然NPC組患者血清GNLY水平低于對照組，而隨著TMN分期的不斷加重，NPC組患者的血清GNLY水平也是不斷升高的。通過對TMN分期單項指標分析發現，T3～T4期患者高于 T1～T2期患者（P＜0.05），N3期患者高于 N0期患者（P＜0.05）。這提示 NPC患者血清GNLY水平與腫瘤浸潤程度和淋巴結轉移存在一定關系。進展期的NPC患者相對較高水平的血清GNLY可能與腫瘤后期補體途徑的不斷激活NK細胞有關，這提示患者體內保護性的抗腫瘤免疫反應程度逐步提高。在NPC的病理生理過程中，體內EBV相關細胞毒性T淋巴細胞和腫瘤相關細胞毒性T淋巴細胞水平被抑制，但是NK細胞被補體途徑激活[14]。因此可以猜測NPC患者體內隨著病情進展逐步升高的血清GNLY水平主要來源于NK細胞，但尚需進一步實驗研究證實。

綜上所述，NPC患者血清GNLY水平異常降低，血清GNLY水平檢測有助于判斷鼻咽部的良惡性病變。