乙肝病毒感染產婦IL-12、IL-18表達與胎兒宮內感染的相關性分析

孫久江,吳新紅

（山東省鄆城縣楊莊集鎮中心衛生院,山東 菏澤 274717）

嬰幼兒是乙肝肝炎病毒（HBV）高危人群，母嬰傳播是重要途徑，通過母體垂直傳播感染胎兒，乙肝宮內感染是乙肝高發區嚴峻的公共衛生問題。研究表明[1]，垂直傳播嬰兒幾乎都會發展為慢性HBV攜帶者，其中約有20%患者會進展為肝硬化和肝癌。所以，控制母嬰傳播是控制HBV最重要內容。而HBV在體內持續感染是由病毒和機體免疫狀態兩方面組成的，目前眾多的報道均主張機體能否清除病毒和體內免疫反應是以Th1型還是以Th2型為主。Th1型可增強宿主抵抗微生物感染力，而Th2型則能反應感染的進展和慢性化有關。本次研究就通過對HBV宮內感染中的IL-12、IL-18、IL-4和IFN-γ水平特點和相關性，以期尋找最佳的治療方案。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2014年2月～2017年2月93例血清乙肝表面抗原（HBsAg）陽性患者為研究對象，納入標準均符合血清甲、丙、丁等肝炎系列檢查陰性，無先天性免疫缺陷，無潛在的炎癥相關因素，無內科、產科合并癥和合并癥，肝腎功能均正常。檢測新生兒臍帶血分成宮內感染和宮內未感染，然后選取同時期HBsAg陰性的45例正常孕婦為對照組。3組的臨床資料，年齡、孕產次、孕周、體質量等方面比較差異無統計學意義，具有可比性，見表1。

表1 3組產婦臨床資料情況比較（x±s）Table 1 Comparison of clinical data of 3 groups of parturients(x±s)

1.2 方法

1.2.1 產婦產前血清IL-12、IL-18檢測方法 所有產婦均在分娩前采用流式細胞儀檢測血清IL-12、IL-18，采用酶聯免疫吸附法測定乙肝5項指標和細胞因子IL-4和IFN-γ水平。酶聯免疫法測定步驟為：①樣品準備。采集空腹血液于無菌離心管中，于室溫下讓血液自然凝固10～20 min，在旋轉離心器中旋轉（轉速：2 000～3 000 r/min）離心20 min左右取上層血清作為檢測樣品，標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗；②樣品保存。處理后的樣品若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融；③檢測。以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。

1.2.2 新生兒乙肝五項檢測方法 新生兒出生后，在聯合免疫前測定臍血乙肝5項指標和脫氧核糖核酸（HBV-DNA）水平。乙肝五項采用酶聯免疫法進行檢測，具體步驟為：采集新生兒空腹血液，自然凝集30 min，取上層血清，將酶復合物用稀釋液稀釋后，加血清及陰性、陽性對照，及質控品，上水浴孵育60 min，然后洗板，加底物，半個小時避光反應后加終止液完成反應部分，讀數，根據數值來判斷結果的陰性或陽性。宮內感染的標準為新生兒免疫接種前臍血清HBsAg、HBV的HBV-DNA為陽性者。

1.3 統計學方法 采用SPSS 13.0軟件進行分析，將調查統計的內容作為變量，計量資料采用t檢驗和Pearson相關性檢測，計數資料采用“x±s”進行單因素分析，以P＜0.05為有統計學意義。

2 結果

2.1 3組外周血清IL-12、IL-18、IL-4和IFN-γ情況比較對3組外周血清IL-12、IL-18、IL-4和IFN-γ情況比較得出，宮內感染組和宮內未感染組、對照組在IL-12、IL-18、IL-4和IFN-γ上比較差異有統計學意義（P＜0.05）；而宮內未感染組和對照組比較差異無統計學意義，見表2。

表2 3組外周血清IL-12、IL-18、IL-4和IFN-γ情況比較（x±s）Table 2 Comparison of IL-12,IL-18,IL-4 and IFN-4 in peripheral blood of 3 groups(x±s)

2.2 3組外周血清IL-12、IL-2、IL-4和IFN-γ之間相關性情況比較 對3組外周血清IL-12、IL-2、IL-4、IFN-γ之間相關性情況比較得出，IL-12、IL-2和IL-4均呈顯著負相關，見表3。

表3 3組在IL-12、IL-4和IFN-γ相關性情況比較Table 3 The correlations between the three groups in IL-12,IL-4 and IFN-comparisons were compared

2.3 3組外周血清IL-18、IL-8、IL-4、IFN-γ之間相關性情況比較 3組外周血清IL-18、IL-8和IFN-γ均為顯著正相關，而IL-8和IL-4兩者之間均為顯著負相關，見表4。

表4 3組在IL-18、IL-8和IFN-γ相關性情況比較Table 4 The correlations of the three groups in IL-18,IL-8 and IFN-comparisons were compared

2.4 3組外周血清IL-12、IL-18相關性情況比較 3組產婦外周血清IL-18、IL-12為顯著負相關，見表5。

表5 3組在IL-12、IL-18相關性情況比較Table 5 The correlation of IL-12 and IL-18 between the 3 groups was compared

3 討論

乙肝病毒屬于一種非致細胞病變的DNA病毒，其臨床多樣化取決于宿主免疫反應，如急性、自限性肝炎結果取決于強的CD4+、CD8+細胞反應，以Th1型反應為主。研究[2]指出，HBsAg清除后恢復階段有很強病毒T細胞反應，而慢性者則僅有較弱甚至不能檢測的HBV，故T細胞反應弱是HBV持續存在并高水平復制的原因。

IL-12由活化的單核細胞、巨噬細胞、樹突細胞等組成，是臨床上常見的促炎癥細胞因子，報道[3]通過對動物試驗指出，使用IL-12后小鼠的IFN-γ分泌可徹底抑制HBV在肝臟內復制，可恢復T細胞病毒抗原的低反應性。而結合本次研究結果看出，宮內感染者的IL-12水平和宮內未感染組、對照組水平比較差異有統計學意義，而宮內未感染組、對照組之間IL-12水平比較差異無統計學意義，這可能是宮內感染者體內的Th1受體等不足從而激活機體免疫功能缺陷，抗感染功能下降，不能有效的防御和清除HBV感染，促進機體處于免疫耐受狀態[4]。而從相關性情況看，IL-12和IFN-γ為正相關，而和其他的為負相關。

IL-18的生物學活性和IL-12類似，但是在誘導IFN-γ上較IL-12好。其結構是又IL-1類巨噬細胞分泌[5]，能增加培養T細胞中IL-12的產量，通過依賴IL-12促進T細胞增殖。從本次研究結果看出，宮內感染者的IL-18明顯低于未感染者和對照組患者，且兩者IL-18和IFN-γ、IL-4水平為正相關，這說明了IL-18可使Th1/Th2細胞免疫失衡擴大，機體抗病毒能力減弱，HBV復制活躍，且IL-18低水平復制可能參與了HBV宮內感染的擴散[6]。

本組資料顯示，宮內感染組和宮內未感染組、對照組在IL-12、IL-18、IL-4和IFN-γ上比較差異有統計學意義（P＜0.05），而宮內未感染組和對照組比較差異無統計學意義；另外IL-12、IL-18和IL-4均呈顯著負相關，和IFN-γ均為顯著正相關，而IL-12、IL-18兩者IL-4和IFN-γ之間均為顯著負相關。而IL-12、IL-18之間則為顯著的正相關。

綜上所述，做好乙肝病毒感染孕婦的IL-12、IL-18指標水平檢測，并根據檢測結果給予產婦進行適當治療，指導孕婦及家屬做出合理的選擇，以降低新生兒的宮內感染風險，對提高新生兒質量，具有重要意義。