高效液相色譜法測定鹽酸黃酮哌酯原料和制劑中有關(guān)物質(zhì)探討

鄭朝武

（海南皇隆制藥股份有限公司 海南 海口 570311）

就我國現(xiàn)行的鹽酸黃酮哌酯質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢測手段來說，主要是依照《中國藥典(二部)》的相關(guān)內(nèi)容，針對鹽酸黃酮哌酯原料和制劑中有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行檢定，主要運(yùn)用TLC法。但是隨著我國藥物技術(shù)的不斷發(fā)展，通過高效液相色譜的手段也能夠詳細(xì)的針對鹽酸黃酮哌酯的質(zhì)量以及物質(zhì)含量進(jìn)行分析，并且結(jié)合我國相關(guān)的藥物檢測標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行對照，檢測出鹽酸黃酮哌酯的含量。客觀來說，傳統(tǒng)TLC相比HPLC檢測手段來說，更加繁瑣，其靈活度也相對較低。據(jù)筆者的親身統(tǒng)計(jì)與觀察總結(jié)出，傳統(tǒng)TLC檢測手段，僅控制雜質(zhì)3－甲基黃酮－8－羧酸，對其他雜質(zhì)不能進(jìn)行有效的檢測。本文將針對高效液相色譜法測定鹽酸黃酮哌酯原料和制劑中有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行詳細(xì)的探討。

1.鹽酸黃酮哌酯試藥

鹽酸黃酮哌酯主要用于尿頻、尿急、尿痛、排尿困難及尿失禁等泌尿疾病的治療中。作為一中國產(chǎn)的口服藥物，我國不同制藥廠針對鹽酸黃酮哌酯的大多檢查項(xiàng)目與原研藥品的差異并不大，但是藥物的溶解與溶出的情況，不同制藥廠會(huì)存在一定程度上的差異，但是此類差異對鹽酸黃酮哌酯的療效并沒有產(chǎn)生直接的影響[1]。107批樣品按照現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)，僅有30批樣品檢出已知雜質(zhì)，很難針對鹽酸黃酮哌酯中出現(xiàn)的其他雜質(zhì)與未知物質(zhì)進(jìn)行檢測，說明現(xiàn)行藥典有關(guān)物質(zhì)測定方法專屬性和靈敏度均較差，檢查結(jié)果不能反映藥品中雜質(zhì)的真實(shí)含量。

2.高效液相色譜法測定鹽酸黃酮哌酯的策略

2.1 合理的選擇色譜條件

針對鹽酸黃酮哌酯來說，其極性相對較強(qiáng)，很容易被洗脫。所以在色譜條件的選擇上，必須積極的結(jié)合鹽酸黃酮哌酯的實(shí)際特性進(jìn)行選擇。嚴(yán)格的按照英國以及美國的藥典針對鹽酸黃酮哌酯的原料測定色譜的條件[2]。與此同時(shí)，還需要積極的針對藥典和實(shí)際鹽酸黃酮哌酯檢測的內(nèi)容進(jìn)行有機(jī)的結(jié)合。由于美國針對鹽酸黃酮哌酯增加檢測的雜質(zhì)并未進(jìn)行明確的規(guī)定，使得在高效液相色譜法測定鹽酸黃酮哌酯的過程中，很可能出現(xiàn)雜質(zhì)并不明確的現(xiàn)象。所以為了保障高效液相色譜法測定鹽酸黃酮哌酯的質(zhì)量，就必須針美國藥典的片劑色譜進(jìn)行不斷的優(yōu)化和創(chuàng)新[3]。積極的采用了相等梯度洗鹽酸黃酮哌酯，并且針對乙腈比例的手段，針對極性相對較弱的雜質(zhì)進(jìn)行洗脫，這樣不僅能夠有效的縮短雜質(zhì)分離的時(shí)間，而且達(dá)到了分離的效果。USP39原料和片劑分別采用240nm及293nm作為檢測波長，并且針對片劑中不同雜質(zhì)的個(gè)數(shù)進(jìn)行了詳細(xì)的分析。與此同時(shí)，為了保基線更加的穩(wěn)定所以積極的利用了293nm作為鹽酸黃酮哌酯的檢測波長，并對市場上不同企業(yè)所生產(chǎn)的鹽酸黃酮哌酯的進(jìn)行檢測。由于不同鹽酸黃酮哌酯所運(yùn)用的輔料也存在不同，所選流動(dòng)相可避免輔料干擾，切實(shí)的滿足雜質(zhì)分離的相關(guān)要求。

2.2 嚴(yán)格的進(jìn)行破壞實(shí)驗(yàn)

我國針對鹽酸黃酮哌酯的合成工藝主要是利用3－甲基黃酮－8－羧酸。針對此項(xiàng)合成工藝來說，其中主要的雜質(zhì)主要有3－甲基黃酮－8－羧酸。由于3－甲基黃酮－8－羧酸是最初的合成工藝材料，使得3－甲基黃酮－8－羧酸是可以降解的物質(zhì)，更是降解的主要物質(zhì)。與此同時(shí)，在開展破壞實(shí)驗(yàn)的過程中，很有可能在原料精制工序與精制溶劑發(fā)生反映，還有可能與溶質(zhì)產(chǎn)生反應(yīng)。由于鹽酸黃酮哌酯具有強(qiáng)大的穩(wěn)定性，在光照、氧化、酸性環(huán)境下，對于鹽酸黃酮哌酯的影響并不明顯[4]。但是需要注意的是在堿性環(huán)境對鹽酸黃酮哌酯的影響。

2.3 高效的確定雜質(zhì)譜及雜質(zhì)限度

在開展鹽酸黃酮哌酯檢定的過程中，必須嚴(yán)格的按照我國和國外的藥典進(jìn)行對照，并針對高效液相色譜－質(zhì)譜的各個(gè)環(huán)節(jié)進(jìn)行明確把握。筆者針對6（A、B、C、D、E、F）個(gè)廠家所生產(chǎn)的鹽酸黃酮哌酯的有關(guān)物質(zhì)，利用高校色相普法進(jìn)行有效的檢定，其結(jié)果見表。在確認(rèn)出鹽酸黃酮哌酯的主要雜質(zhì)為3－甲基黃酮－8－羧酸（雜質(zhì)A）、3－甲基黃酮－8－羧酸甲酯（雜質(zhì)B）、3－甲基黃酮－8－羧酸乙酯（雜質(zhì)C），應(yīng)該積極的保障檢驗(yàn)過程與推論出的雜質(zhì)一致。嚴(yán)格的結(jié)合我國相關(guān)的藥典以及檢測的要求，總結(jié)出產(chǎn)生雜質(zhì)的原因。就我國當(dāng)前制藥工作來看，導(dǎo)致出現(xiàn)雜質(zhì)的原因，主要便是在制藥的工序中，各個(gè)制藥環(huán)節(jié)原料和生產(chǎn)工藝而導(dǎo)致的雜質(zhì)。筆者結(jié)合我國藥典規(guī)定和樣品檢驗(yàn)結(jié)果，總結(jié)出鹽酸黃酮哌酯中3－甲基黃酮－8－羧酸雜質(zhì)不應(yīng)該超出總的0.5%；3－甲基黃酮－8－羧酸甲酯不應(yīng)該超過總和的0.1%；3－甲基黃酮－8－羧酸乙酯不應(yīng)該超過總和的0.1%。

表 各廠家樣品有關(guān)物質(zhì)測定結(jié)果

3.結(jié)語

總而言之，在鹽酸黃酮哌酯檢測的過程中，高效液相色譜法測定比傳統(tǒng)TLC檢測手段更加具有高效性。在高效液相色譜法測定的過程中，必須要合理的選擇色譜條件，結(jié)合檢驗(yàn)的實(shí)際情況，嚴(yán)格的進(jìn)行破壞實(shí)驗(yàn)，并確定雜質(zhì)譜及雜質(zhì)限度，切實(shí)的檢測出鹽酸黃酮哌酯中的含量以及雜質(zhì)，保障鹽酸黃酮哌酯的質(zhì)量。

[1]沈丹丹，曾杰，梁涵雁，等.高效液相色譜法測定鹽酸黃酮哌酯原料和制劑中有關(guān)物質(zhì)[J].中國藥業(yè)，2018(5).

[2]謝沐風(fēng).高效液相色譜法測定含量時(shí)關(guān)于確立色譜條件與溶液濃度的討論[J].中國藥品標(biāo)準(zhǔn)，2008，9(4):288-289.

[3]曾杰.鹽酸黃酮哌酯片有關(guān)物質(zhì)考察[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2017，36(s1):104-105.

[4]許潔，周長朋，鄭文鳳，等.高效液相色譜-四極桿/線性離子阱質(zhì)譜儀測定鹽酸黃酮哌酯中的1-(2-羥乙基)哌啶殘留[J].分析測試學(xué)報(bào)，2017(7):906-910.