頭孢克肟脂質體的制備工藝研究

陳淑云 邱禮臻 龐國棉 李曉玲 朱岳鑫

（1廣東省中醫院廣州中醫藥大學第二附屬醫院大學城藥劑科 廣東 廣州 510006）（2廣東藥科大學藥學院 廣東 廣州 510006）

頭孢克肟（cefixime）是由日本藤澤藥品工業株式會社于上世紀80年代初合成開發的β-內酰胺類第三代頭孢類廣譜抗生素[1-3]，其對淋球菌、鏈球菌、大腸桿菌、變形桿菌等多種菌屬均有較強的殺菌能力，臨床上廣泛應用于敏感菌引起的多種疾病。目前，頭孢克肟的劑型主要有膠囊劑、散劑、顆粒劑、片劑等形式，而頭孢克肟易受外界環境（光、水、熱等）影響，使其功能官能團發生降解，從而減小其抗菌活性和增加過敏風險，為能使頭孢克肟藥物劑型能減毒增效，擴大其臨床應用范圍，本文將對頭孢克肟制成脂質體[4-6]，提高其穩定性和生物利用度，以期開發出一種適用于臨床的新劑型。

1.試驗和設備

1.1 實驗試劑

頭孢克肟原料藥（湖北康寶泰精細化工有限公司提供）；頭孢克肟對照品（中國藥品生物制品鑒定所）；葡聚糖凝膠G-50(上海伯奧生物科技有限公司)；卵磷脂(國藥集團化學試劑有限公司)；膽固醇(國藥集團化學試劑有限公司)；膽酸鈉(國藥集團化學試劑有限公司)；其余試劑均為分析純，水為雙蒸水。

1.2 儀器設備

實驗中主要的設備高效液相色譜儀HPLC（1260型，美國Agilent公司）；精密電子天平（JJ224BC型，江蘇雙杰測試儀器廠）；真空干燥箱（ZK-82A型，上海實驗儀器總廠）；電熱恒溫水浴鍋（HH-8A型，北京科偉儀器公司）；PH 計（PHS-3C型，上海儀電科學儀器公司）。WH-2微型漩渦混合儀(上海滬西分析儀器廠)；超聲破碎乳化儀；SHZ-Ⅲ型循環水真空泵(上海亞榮生化儀器廠)；HP-01抽濾儀；恒溫磁力攪拌器(TH2-82A上海)；PH值測定儀(PB-10)；600三用水箱。

2.實驗方法與結果

2.1 頭孢克肟含量測定

2.1.1 色譜條件 在全波長下對頭孢克肟溶液進行掃描，其在254nm條件下具有最高吸收峰，HPLC所用色譜柱為Kromsail-C18柱（250*4.6mm，5um），流動相選用乙腈-0.2%磷酸二氫鈉溶液(20∶80)（稀磷酸調節至4.0），柱溫為35℃，進樣量為20μL，流速為1.0mL/min。

2.1.2 標準曲線繪制 準確稱取頭孢克肟對照品10.00mg于20ml容量瓶，用20%乙腈定容至刻度線，搖勻即得濃度為0.5mg/ml的對照品溶液。分別量取對照品溶液母液1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml、6.0ml、7.0ml置于10ml容量瓶中，并用20%乙腈稀釋至刻度線，搖勻備用。按照‘2.1.1’項下色譜條件進樣，記錄頭孢克肟濃度（X）相應的峰面積（Y），確定標準曲線：Y=2580.6X+202.14(R2=1.0000)，頭孢克肟在濃度為50-350mg/L之間線性關系良好。

2.2 頭孢克肟脂質體制備工藝

2.2.1 頭孢克肟微囊評價指標 頭孢克肟脂質體評價指標采用脂質體包封率（EE%）和載藥量(LD%)進行綜合評價。包封率測定方法采用葡聚糖凝膠層析法分離游離藥物和脂質體，通過預實驗確定收集含藥脂質體洗脫液部位，精密量取4ml于10ml容量瓶中，用乙醇破乳后用20%乙腈定容，搖勻，按“2.1.1項下”進樣測定峰面積，按“2.1.2項下”計算相應濃度C1：(ug/mL)。另取制備好的頭孢克肟脂質體5.0ml直接用20%乙腈定容至200ml，精密量取4ml于10ml容量中，用乙醇溶液破乳后定容。搖勻，同樣測定峰面積A，并計算藥物濃度C2：(ug/mL)。包封率EE%=C1/C2：×100%。載藥量取樣本適量，按上述方法測藥物濃度，載藥量DL%=WD/WP×100%，其中WD為脂質體包裹的藥物量，WP為載體用量。

2.2.2 頭孢克肟脂質體制備工藝 定量稱取膽固醇、卵磷脂、頭孢克肟于圓底燒瓶中，加入l0.0ml氯仿-甲醇(1：1)復合溶劑于混合儀上充分溶解后，于35℃恒溫水浴中旋轉減壓蒸發除去有機溶劑，形成類脂薄膜，繼續用氮氣吹干殘余溶劑。再加入含有定量膽酸鈉的水和介質溶液l0.0ml至燒瓶中，旋轉繼續洗膜l小時，使得脂質膜充分溶脹水化，得到脂質體混懸液。將混懸液分別置于冰水浴中探針式間斷超聲一段時間后，室溫靜置后用0.2um微孔濾膜濾過除去雜質即得頭孢克肟脂質體。

2.2.3 優選頭孢克肟脂質體制備工藝 根據預實驗結果，確定影響頭孢克肟脂質體制備的主要因素為藥物：卵磷脂比、膽固醇：卵磷脂、膽酸鈉：卵磷脂、水和介質pH值，針對4個主要因素選取主要水平，并以綜合評分評價頭孢克肟脂質體質量（綜合評分=包封率×50%+載藥量×50%）進行評價，采用L9（34）正交實驗進行工藝優選。結果如下：

表1 正交試驗主要因素與水平表

表2 頭孢克肟脂質體制備正交試驗結果

表3 頭孢克肟脂質體綜合評分方差分析表

由表2結果直觀分析可得，以頭孢克肟脂質體包封率和載藥量綜合評分為考察指標，三個因素影響程度依次為C＞B＞A＞D，且A3＞A2＞A1，B1＞ B2＞B3，C1＞C2＞ C3，D3＞D1＞D2可得出最佳工藝條件為A3B1C1D3。

由表3方差分析可得：以頭孢克肟脂質體包封率和載藥量綜合評分為考察指標時，因素B和C對試驗結果有顯著性影響，因素A和D對實驗結果均無顯著性影響,因此最佳制備工藝為A3 B1C1D3，即藥物：卵磷脂比為1：45、膽固醇：卵磷脂為1∶4、膽酸鈉：卵磷脂為1∶1、水和介質pH值為7.5。

2.2.4 驗證最優條件 采用正交試驗結果最佳工藝制備6份頭孢克肟脂質體進行驗證試驗，結果得到頭孢克肟脂質體包封率、載藥量和綜合評分，見表4。驗證試驗中制備的頭孢克肟脂質體包封率平均值為89.63%，其載藥量為1.93%，綜合評分為45.78%。

表4 頭孢克肟脂質體工藝驗證

3.討論

通過正交試驗[7-9]對頭孢克肟脂質體工藝進行篩選，其綜合評分為45.78%，而脂質體包封率平均值為89.63%，其載藥量為1.93%，得到較為可靠的質量。包封率是脂質體質量控制的重要指標，反應藥物被載體包封的程度及藥物和載體的濃度，由于脂質體比藥物粒子在體積上差異較大，故考慮用葡聚糖如Sephadex G-50柱層析作為區分和富集方法。經皮給藥是藥物通過皮膚吸收的一種給藥方法，藥物應用于皮膚上后，通過皮膚擴散，由毛細血管吸收進入體循環的過程稱經皮吸收或透皮吸收。脂質體具有雙重特性一親水性和疏水性，因此可改善藥物對皮膚的通透性，并可促進表皮及真皮組織的吸收，增加藥物對角質層的穿透性。將頭孢克肟制成脂質體，經皮給藥可避免肝臟首過效應，且藥物吸收不經胃腸道，同時能長時間持續擴散進入血液循環，減少用藥次數，改善患者用藥順應性，提高治療效果，是一種理想的劑型選擇。本文制備的頭孢克肟脂質體質量可靠，擴展了臨床應用劑型，具有良好的前景。

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