基于生物堿含量測定評價江油地區附子商品的品質現狀

唐雪梅 趙雪梅 謝慶璐 金艷 馬蓉 冉連輝

（1江油市中醫醫院藥劑科 四川 江油 621700）（2江油市中醫醫院中醫科 四川 江油 621700）

江油作為附子的道地產區，其種植加工歷史可追溯到唐代以前，迄今已有1300余年。產地加工技術成熟。附子生品毒性大，一般需經炮制加工后方能入藥。隨著飲片生產的標準管理與市場競爭的優勝劣汰，江油地區現有通過國家中醫藥管理局驗收的附子飲片加工企業三家，具一定規模的散戶數家，附子的減毒存效為炮制重點。2015版《中國藥典》、2015版《四川省中藥飲片炮制規范》均將單酯、雙酯生物堿含量測定作為附子質控的重要指標，文中雙酯型生物堿為烏頭堿、次烏頭堿、新烏頭堿百分含量之和。雙酯型生物堿經加工炮制后水解成毒性較小的單酯型生物堿，文中單酯型生物堿為苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰次烏頭堿、苯甲酰新烏頭堿百分含量之和。本研究通過對江油地區不同廠家生產的三個炮制品種的江油附子商品進行單酯、雙酯型生物堿含量測定，摸清江油種植附子商品的品質現狀。

1.實驗部分

1.1 儀器與材料

HPLC 色譜儀（島津LC-20A）；烏頭堿、次烏頭堿、新烏頭堿、苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰次烏頭堿、苯甲酰新烏頭堿對照品均購自中國藥品生物制品檢定所。乙腈為色譜純，其余化學試劑均為分析純；實驗材料購自生產廠家，產地為江油，經課題組鑒定為毛茛科植物烏頭(Aconitum carmichaeli Debx)子根經不同炮制方法而成的附子商品。

1.2 色譜條件與系統適用性試驗

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-四氫呋喃（25：15）為流動相A，以0.1mol／L醋酸銨溶液（每1000ml加冰醋酸0.5ml）為流動相B，按下表中的規定進行梯度洗脫，檢測波長為235nm。

時間（分鐘） 流動相A（%） 流動相B（%）0～48 15→26 85→74 48～49 26→35 74→65 49～58 35 65 58～65 35→15 65→85

1.3 對照品溶液的制備

取烏頭堿、新烏頭堿、次烏頭堿、苯甲酰新烏頭原堿、苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰次烏頭原堿對照品適量，精密稱定，加異丙醇-二氯甲烷（1：1）混合溶液制成每1ml各含10μg的混合溶液，即得。

1.4 供試品溶液的制備

取本品粉末(過三號篩)約2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加氨試液3ml，精密加入異丙醇-乙酸乙酯（1：1）混合溶液50ml，稱定重量，超聲處理(功率300W，頻率40kHz，水溫在25℃以下)30分鐘，放冷，再稱定重量，用異丙醇-乙酸乙酯（1：1）混合溶液補足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續濾液25ml，40℃以下減壓回收溶劑至干，殘渣精密加入異丙醇-二氯甲烷（1：1）混合溶液3ml溶解，濾過，取續濾液，即得。

1.5 標準曲線的繪制

將上述對照品溶液梯度稀釋成6個濃度的對照品溶液，分別精密吸取10μl，注入液相色譜儀，測定。以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，以線性回歸方法繪制標準曲線圖，回歸方程依次為：

注：1-苯甲酰新烏頭原堿；2-苯甲酰烏頭原堿；3-苯甲酰次烏頭原堿；4-新烏頭堿；5-次烏頭堿；6-烏頭堿

1.6 樣品測定

分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。經炮制后生產的各種附子商品，其酯型生物堿的含量均符合相關規定，測定結果見表1。

表1 不同廠家附子商品的雙酯型、單酯型生物堿含量測定結果

2.討論

附子炮制減毒的同時，也造成了有效成分的流失，如何平衡減毒存效為附子研究的重中之重；附子的炮制規格眾多，除文中提到的炮制規格以外，還有近10余種；江油道地產區形成了附子特有多道工序的產地加工(炮制)技術，在多個環節能夠對附子中劇毒的烏頭堿類雙酯型生物堿起到很好的炮制解毒作用，成為臨床安全使用附子的重要保證,成為江油附子譽滿全球的必要保證[7]。江油地區炮制加工更是歷史悠久，在飲片生產標準化的同時，傳統工藝仍占有一席之地，說明傳統炮制仍有優勢所在。但附子飲片炮制加工存在非道地產地非規范工藝生產附子[8]，影響江油附子的質量和品牌，如何正確對待附子炮制散戶加工廠，亟待解決，以利于附子炮制加工更好的發展。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典一部[S].2015年版.北京: 中國醫藥科技出版社，191-193.

[2]四川省中藥飲片炮制規范[M].2015年版.四川：四川科學技術出版社.

[3]劉智，張大方，曲曉波，等.炮制對烏頭生物堿的影響及毒性作用研究[J].時珍國醫國藥，2012,5（23）：1113-1114.

[4]考玉萍，劉滿軍，袁秋貞.附子化學成分和藥理作用[J].陜西中醫，2010:1658-1660．

[5]吳克紅.附子的化學成分及其活性研究[D].中國中醫科學院，2013．

[6]徐霄.附子化學成分的研究現狀[J].中國中醫藥現代遠程教育，2014，(20) : 140-141．

[7]黃勤挽.附子炮制歷史沿革研究[J].中國實驗方劑學雜志，2011.12（23）:269-271.

[8]陳彥琳.道地藥材附子炮制加工規范化探討[J].中國現代中藥，2009.11(7):41-43.