胸腔積液γ-干擾素釋放試驗在結核性胸膜炎診斷中的價值*

曾 君，王光明△，王 港，吳本清，張潤玲，湯冬娥，戴 勇，朱 鵬

(1.深圳市光明新區中心醫院檢驗科，廣東深圳 518107；2.深圳市人民醫院臨床醫學研究中心，廣東深圳 518020；3.深圳市坪山區人民醫院中心實驗室，廣東深圳 518000)

結核性胸膜炎是一種常見的結核分枝桿菌感染疾病，可在任何年齡段發病，胸腔積液是主要并發癥之一。近年來結核病的發病率呈明顯上升趨勢，有研究報道滲出性胸腔積液中約有54.8%為結核性胸膜炎引起，對該病的診斷主要依靠影像學、實驗醫學、病理學等檢查，但實際臨床工作中存在諸多難題[1]。近年來，體外γ-干擾素釋放試驗(IGRA)受到國內外臨床醫務工作者的高度重視，它是一種結核分枝桿菌感染的體外免疫檢測新方法，靈敏度和特異度均較高。本研究通過分析105例疑似結核性胸膜炎患者的胸腔積液IGRA檢測數據，綜合評價胸腔積液IGRA在結核性胸膜炎患者中的診斷價值，為IGRA用于臨床診斷結核性胸膜炎提供依據。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2016年1-12月胸腔積液患者105例為研究對象，年齡19～92歲，其中男69例，女36例。結核性胸膜炎的診斷標準參考中華人民共和國衛生行業標準《肺結核診斷》(WS 288-2008)。經臨床診斷為結核性胸膜炎患者52例納入結核組；非結核性胸膜炎患者53例，其中IGRA結果陰性的42例患者納入IGRA陰性-非結核組；IGRA結果陽性的11例患者納入IGRA陽性-非結核組。非結核組包括肺部感染性疾病、胸腔積液、胸膜炎、癌性胸腔積液患者，均否定既往有結核感染史。

1.2儀器與試劑 本研究的主要儀器是ESCO-170B型二氧化碳培養箱，中科中佳SC-3612型低速離心機，雷杜RT6500酶標儀，上海力康生物安全柜；檢測試劑盒由武漢海吉力生物科技有限公司提供，陰性刺激劑為磷酸鹽緩沖液(PBS)，結核刺激劑為PBS加ESAT6-CFP-10融合抗原，陽性刺激劑為PBS加外源凝集素。

1.3胸腔積液IGRA檢測 收集無菌操作穿刺胸腔積液20～50 mL，置于無菌離心管中，3 000 r/min離心5 min，去上清液，并留取1.5 mL的沉淀懸液，混勻后分別加入到陰性對照管(N)、陽性對照管(P)、結核刺激管(T)3種培養管中，每管0.5 mL，并加入對應的刺激劑；輕柔混勻后放入37 ℃二氧化碳培養箱培養(22±2)h，培養后的胸腔積液以3 000 r/min離心5 min；吸取上清，以ELISA 方法檢測人γ干擾素(IFN-γ) 水平，所有操作均嚴格按照IGRA診斷試劑盒說明書進行。IGRA檢測陽性判斷標準是結核刺激劑干擾素水平減去陰性對照干擾素水平大于或等于0.35 IU/mL，并且陽性對照干擾素水平減去陰性對照干擾素水平大于或等于0.50 IU/mL；IGRA檢測陰性判斷標準是結核刺激劑干擾素水平減去陰性對照干擾素水平小于0.35 IU/mL，并且陽性對照干擾素水平減去陰性對照干擾素水平大于或等于0.50 IU/mL。

2 結 果

105例胸腔積液患者胸腔積液IGRA全部檢測成功，其中IGRA陽性結果63例，陰性結果42例；結核組中陰性對照干擾素水平明顯高于IGRA陰性-非結核組(t=0.001 6)和IGRA陽性-非結核組(t=0.001 7)陰性對照干擾素水平；且結核組結核刺激劑干擾素水平明顯高于IGRA陰性-非結核組(t=6.327 61×10-8)和IGRA陽性-非結核組(t=5.906 37×10-7)結核刺激劑干擾素水平，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 各組胸腔積液IGRA干擾素水平比較(IU/mL)

3 討 論

IGRA在結核病的實驗室診斷中廣泛開展，受到國內外臨床醫務人員的高度重視。IGRA的原理是結核分枝桿菌感染患者的體液中存在結核特異效應淋巴細胞，該細胞受到結核分枝桿菌特異抗原刺激后分泌IFN-γ，實驗室通過檢測刺激培養后的體液IFN-γ水平來判斷機體結核分枝桿菌感染情況[2]。WILKINSON等[3]的研究表明結核性患者的胸腔積液中，抗原特異性T淋巴細胞比外周血中高出10倍，理論上講是有希望通過IGRA將其與非結核性胸腔積液鑒別開來。ARIGA等[4]的研究結果表明，胸腔積液IGRA檢測能夠準確迅速地診斷活動性結核性胸膜炎。

目前，國內外有大量的文章討論IGRA檢測結果對結核病診斷的價值[5-6]，諸多文獻表明IGRA的特異度及靈敏度都較高[7-8]，也有文獻報道IGRA聯合結核分枝桿菌-DNA或腺苷脫氨酶檢測結果能夠有效提高診斷率[9]。而極少有研究報道IGRA檢測值在結核性胸膜炎中的診斷價值，本研究顯示結核性胸膜炎患者胸腔積液IGRA檢測陰性對照干擾素水平明顯高于非結核性胸膜炎患者(P<0.05)，說明結核性胸膜炎患者胸腔積液中存在分泌干擾素的細胞，使結核性胸膜炎患者胸腔積液干擾素基礎水平增高，與石瑞如等[10]的研究報道相同。本研究結核性胸膜患者胸腔積液IGRA檢測結核刺激劑干擾素水平明顯高于非結核性胸膜炎患者(P<0.05)。因此，通過綜合分析胸腔積液IGRA檢測陰性對照及結核刺激劑干擾素水平能夠有效診斷結核性胸膜炎，體現胸腔積液IGRA檢測值的臨床應用價值。