鼻咽癌患者外周血膜聯(lián)蛋白A1檢測(cè)的臨床意義

陳紅耀，王榮國(guó)，宋曉飛，皮麗宏

(河北省人民醫(yī)院耳鼻咽喉科，石家莊 050051)

鼻咽癌起源于鼻咽黏膜上皮和腺體，是頭頸部腫瘤中惡性程度較高的腫瘤之一，有明顯的種族差異，我國(guó)的發(fā)病率較高，南部地區(qū)明顯高于北部地區(qū)，以40～50歲的中年男性患者居多[1]。鼻咽癌早期癥狀不典型，臨床上容易延誤診斷，嚴(yán)重威脅患者的身體健康[2-3]。雖然醫(yī)療技術(shù)迅速發(fā)展，但鼻咽癌的治療效果仍不理想，尤其近年來青年人發(fā)病率增加，女性發(fā)病率也增加，對(duì)鼻咽癌的診治提出了新的要求。目前用于鼻咽癌檢測(cè)的腫瘤指標(biāo)特異度及靈敏度均較低，因此尋找新的腫瘤特異性蛋白及因子十分必要。膜聯(lián)蛋白A1(ANXA1)是膜聯(lián)蛋白家族中的一員，與多種惡性腫瘤關(guān)系密切，參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[4-5]。但是關(guān)于ANXA1在鼻咽癌中的具體作用機(jī)制還不清楚，本研究通過檢測(cè)鼻咽癌患者外周血及腫瘤組織ANXA1的水平變化，深入探討其作用機(jī)制及變化規(guī)律，為鼻咽癌的診療提供臨床依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2014年2月至2017年3月于本院行放射治療的初診鼻咽癌患者80例納入放療組，該組患者以前均未接受過抗癌治療，均經(jīng)過CT、磁共振及組織活檢病理結(jié)果確診，其中男51例，女29例，年齡35～64歲，平均(48.3±9.8)歲。根據(jù)國(guó)際抗癌聯(lián)盟(UICC，1997)和美國(guó)癌癥分期聯(lián)合委員會(huì)(AJCC，2002)第5版的方案進(jìn)行分期，其中0期16例、Ⅰ期29例、Ⅱ期22例、Ⅲ期8例、Ⅳ期5例。放療后復(fù)發(fā)的患者30例納入復(fù)發(fā)組，其中男19例，女11例，年齡37～59歲，平均(47.8±10.4)歲。選擇同期性別、年齡相匹配的健康體檢者50例納入對(duì)照組，其中男22例，女28例，年齡35～65歲，平均(48.6±10.5)歲。所有入選者均自愿參與本研究，并簽署知情同意書，本研究獲得本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。

1.2儀器與試劑 德國(guó)BNⅡ System全自動(dòng)特定蛋白分析儀，ANXA1試劑盒、腫瘤壞死因子(TNF)-α 酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)試劑盒、白細(xì)胞介素(IL)-10 ELISA試劑盒均購(gòu)自美國(guó)R&D公司，瑞士HAMILTON酶免之星全自動(dòng)免疫分析儀。

1.3方法

1.3.1標(biāo)本采集 所有入選者清晨空腹抽取靜脈血5 mL，室溫靜置30 min后，3 500 r/min離心15 min，分離血清。放療組在放療前1 d、放療后1 d、放療后1個(gè)月各采血1次,對(duì)照組采血1次。復(fù)發(fā)組在確診復(fù)發(fā)后采取下一步治療以前采血1次。

1.3.2血清C反應(yīng)蛋白(CRP)水平的檢測(cè) 血清標(biāo)本采用德國(guó)BNⅡ System全自動(dòng)特定蛋白分析儀檢測(cè)。質(zhì)控品、定標(biāo)品為儀器廠家配套產(chǎn)品。

1.3.3ANXA1、TNF-α、IL-10水平的檢測(cè) 采用雙抗夾心法檢測(cè)ANXA1、TNF-α、IL-10在外周血中的表達(dá)水平，使用前從冰箱取出標(biāo)本在室溫下靜置30 min，所有液體組分使用前充分混勻，操作過程嚴(yán)格依據(jù)相應(yīng)試劑盒的說明書進(jìn)行。在450 nm波長(zhǎng)處，采用酶免之星全自動(dòng)酶標(biāo)儀檢測(cè)讀數(shù)。ANXA1檢測(cè)范圍為6～220 μg/L，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。樣本線性回歸與預(yù)期水平相關(guān)系數(shù)(r)=0.99。TNF-α檢測(cè)范圍為20～400 ng/L，批內(nèi)與批間變異系數(shù)應(yīng)分別小于9%和11%，樣品線性回歸與預(yù)期水平r應(yīng)為0.95以上。IL-10檢測(cè)范圍為50～1 600 pg/mL，批內(nèi)與批間變異系數(shù)應(yīng)分別小于7%和9%，樣品線性回歸與預(yù)期水平r應(yīng)在0.97以上。

2 結(jié) 果

2.13組研究對(duì)象外周血ANXA1、TNF-α、IL-10水平的比較 放療組患者放療前外周血CRP、TNF-α的水平明顯高于放療后1 d和放療后1個(gè)月，放療組患者放療后1 d外周血CRP、TNF-α水平明顯高于放療后1個(gè)月，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；放療組患者放療前外周血ANXA1、IL-10的水平明顯低于放療后1 d和放療后1個(gè)月，放療組患者放療后 1 d外周血ANXA1、IL-10水平明顯低于放療后1個(gè)月，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。復(fù)發(fā)組患者外周血CRP、TNF-α的水平明顯高于放療組放療前的水平，外周血ANXA1、IL-10的水平明顯低于放療前的水平，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

2.2放療組不同分期的鼻咽癌患者外周血各項(xiàng)指標(biāo)水平比較 隨著分期的逐漸加重，外周血CRP、TNF-α水平明顯升高，ANXA1、IL-10的水平明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

2.3放療組外周血ANXA1與其他指標(biāo)的關(guān)系 Pearson相關(guān)分析顯示，放療組外周血ANXA1與IL-10表達(dá)呈顯著正相關(guān)(r=0.451 7，P<0.05)，與血清CRP、TNF-α水平呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.397 6，-0.412 7，P<0.05)。

表1 3組研究對(duì)象外周血ANXA1、TNF-α、IL-10水平的比較

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05；與放療后1個(gè)月比較，#P<0.05；與放療后 1 d比較，△P<0.05;與放療前比較，▲P<0.05

表2 放療組不同分期的鼻咽癌患者外周血各項(xiàng)指標(biāo)水平比較

注：與0期比較，*P<0.05；與Ⅰ期比較，#P<0.05；與Ⅱ期比較，△P<0.05;與Ⅲ期比較，▲P<0.05

3 討 論

我國(guó)鼻咽癌發(fā)病率較高，位置隱蔽，病程進(jìn)展較快。鼻咽癌的病因是多種因素造成的，如遺傳因素、環(huán)境因素、EB病毒感染等。近年來，雖然鼻咽癌手術(shù)和放療技術(shù)有了一定的進(jìn)步，但鼻咽癌的復(fù)發(fā)率及病死率依然沒有明顯改善。與此同時(shí)鼻咽癌的發(fā)病率略有升高，發(fā)病年齡呈年輕化趨勢(shì)[6-7]。只有找到靈敏度與特異度均較高的鼻咽癌相關(guān)指標(biāo)，才能對(duì)其進(jìn)行早期診斷和早期治療，確保手術(shù)和放療的效果，改善患者預(yù)后。目前常用的一些指標(biāo)不能早期提示鼻咽癌的發(fā)生，而ANXA1在多種惡性腫瘤患者體內(nèi)異常表達(dá)，本研究就ANXA1在鼻咽癌患者中的變化情況及其與其他血清學(xué)指標(biāo)的關(guān)系進(jìn)行了研究討論。

ANXA1位于人9q12-q21.2，包含13個(gè)外顯子和12個(gè)內(nèi)含子，編碼346個(gè)氨基酸。ANXA1隸屬于膜聯(lián)蛋白家族，廣泛表達(dá)于動(dòng)植物體內(nèi)各種組織和細(xì)胞表面，依賴鈣離子的結(jié)合，并能與磷脂可逆結(jié)合才能發(fā)揮調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、分化、變異、凋亡等一系列作用。ANXA1具有很強(qiáng)的抗炎、抗感染功能；通過表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)、激活蛋白激酶C(PKC)途徑或是直接磷酸化，促進(jìn)細(xì)胞的增殖、趨化、新生血管形成；通過加強(qiáng)過氧化氫(H2O2)的過氧化功能促進(jìn)細(xì)胞凋亡、組織壞死[8]。有研究報(bào)道，ANXA1通過磷酸化促進(jìn)細(xì)胞癌變及腫瘤細(xì)胞增殖，抑制抑癌基因分化，通過與鈣離子和磷脂結(jié)合降低腫瘤細(xì)胞對(duì)藥物的敏感性，促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移[9-10]。本研究應(yīng)用ELISA技術(shù)檢測(cè)了研究對(duì)象外周血ANXA1水平，結(jié)果顯示ANXA1在鼻咽癌患者放療前的表達(dá)水平明顯降低，隨著放療的進(jìn)行，ANXA1水平逐漸回升，放療后1個(gè)月時(shí)基本恢復(fù)到正常水平，與對(duì)照組中ANXA1的水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，說明ANXA1在腫瘤發(fā)生時(shí)表達(dá)下降，隨著腫瘤的切除或腫瘤細(xì)胞的殺滅，其表達(dá)水平逐漸升高，提示ANXA1與鼻咽癌的進(jìn)展程度密切相關(guān)。同時(shí)本研究還發(fā)現(xiàn)復(fù)發(fā)組患者血清ANXA1水平下降更多，明顯低于鼻咽癌患者放療前的水平，提示ANXA1與鼻咽癌的復(fù)發(fā)關(guān)系密切。

為進(jìn)一步探討外周血中ANXA1水平與鼻咽癌的進(jìn)展程度、有無淋巴結(jié)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的關(guān)系，本研究將放療組根據(jù)分期情況進(jìn)行分組，結(jié)果顯示，隨著分期的變化，ANXA1水平逐漸下降，說明ANXA1水平在鼻咽癌出現(xiàn)周圍組織浸潤(rùn)、淋巴結(jié)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移時(shí)進(jìn)一步降低，提示ANXA1的水平與鼻咽癌的浸潤(rùn)程度、惡化與轉(zhuǎn)移情況密切相關(guān)，檢測(cè)ANXA1水平可以提示鼻咽癌患者目前腫瘤的發(fā)展?fàn)顟B(tài)，預(yù)測(cè)腫瘤轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)。

炎癥的局部表現(xiàn)和全身反應(yīng)的臨床特征是紅、腫、熱、痛和功能障礙。紅、熱是由于局部血管擴(kuò)張，血流加快。腫是局部炎癥性充血，血液成分滲出。痛是由于滲出物壓迫和某些炎癥介質(zhì)直接作用于神經(jīng)末梢所致。150年前，VIRCHOW最初發(fā)現(xiàn)慢性炎癥與癌變之間存在關(guān)聯(lián)。研究發(fā)現(xiàn)超過25%的癌癥都是由于慢性感染或其他類型的慢性炎癥引起[11]。慢性炎癥通過多種機(jī)制致癌，其包括誘導(dǎo)基因突變、促進(jìn)血管生成、改變基因狀態(tài)和促進(jìn)細(xì)胞增殖等方面。而這些機(jī)制主要通過一些炎性因子作為媒介起到致癌作用。

本研究還檢測(cè)了CRP、TNF-α、IL-10等炎癥指標(biāo)的水平，發(fā)現(xiàn)放療組患者術(shù)前外周血CRP、TNF-α的水平明顯升高，IL-10的水平明顯降低，隨著放療的進(jìn)行，CRP、TNF-α的水平明顯下降，IL-10的水平明顯升高，于放療后1個(gè)月，三者的水平與對(duì)照組的水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，尤其是復(fù)發(fā)組患者外周血CRP、TNF-α的水平明顯高于放療組放療前的水平，IL-10的水平明顯低于放療前的水平，提示鼻咽癌的進(jìn)展過程也是炎性反應(yīng)的過程，通過炎性因子的變化可以間接反映腫瘤的變化情況，提示腫瘤的發(fā)生和復(fù)發(fā)。本研究還發(fā)現(xiàn)，放療組不同分期的鼻咽癌患者中外周血CRP、TNF-α水平隨著分期的逐漸加重明顯升高，IL-10水平明顯降低，進(jìn)一步驗(yàn)證了炎性因子的水平變化趨勢(shì)可以間接代表鼻咽癌的浸潤(rùn)程度、有無淋巴結(jié)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)。

相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，外周血ANXA1水平與IL-10表達(dá)呈顯著正相關(guān)，與血清CRP、TNF-α水平表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)。提示ANXA1與炎癥指標(biāo)聯(lián)合應(yīng)用對(duì)掌握鼻咽癌患者的病情變化更有意義，同時(shí)也提示ANXA1可能通過促進(jìn)炎性反應(yīng)干預(yù)了腫瘤的進(jìn)程。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)鼻咽癌患者的外周血ANXA1水平隨腫瘤的發(fā)展、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移逐漸下降，且復(fù)發(fā)患者ANXA1水平下降更明顯，說明ANXA1與鼻咽癌的發(fā)生、發(fā)展、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)關(guān)系密切，監(jiān)測(cè)外周血ANXA1水平的變化對(duì)了解鼻咽癌患者的病情變化及評(píng)估十分重要。外周血ANXA1可作為鼻咽癌的隨訪指標(biāo)，對(duì)臨床治療有一定的指導(dǎo)價(jià)值。