克林霉素磷酸酯凝膠的制備和質量評價

陳洪波

摘 要：本實驗研究克林霉素磷酸酯凝膠的制備方法并建立反相高效液相色譜法測定克林霉素磷酸酯凝膠中克林霉素磷酸酯的含量。方法：采用安捷倫十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱（218mm×4.6mm，5μm），0.1mol/L磷酸二氫鉀（用磷酸調pH2.5）-甲醇-乙腈（70：10：20），檢測波長為210nm，流速為1.0ml/min，柱溫為30℃。克林霉素磷酸酯在10～50ug·mL-1范圍內呈良好的線性關系。克林霉素磷酸酯平均回收率為99.3%。結論：本制劑穩定、可靠，測定方法簡便、準確。

關鍵詞：克林霉素磷酸酯；制備；質量

克林霉素磷酸酯化學名稱為（2s-反式）-6-（1-甲基-4-丙基-2-吡咯烷碳酰氨基）-1-硫代-甲基-7-氯-6，7，8-三脫氧-L-蘇式-α-D-半乳糖吡喃糖苷-2-二氫磷酸酯。克林霉素磷酸酯為化學合成的克林霉素衍生物，它在體外無抗菌活性，進入機體迅速水解為克林霉素發揮抗菌活性。克林霉素磷酸酯具有抑制痤瘡丙酸桿菌、顆粒丙酸桿菌、金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌等的生長作用。本實驗研究克林霉素磷酸酯凝膠的制備方法并建立反相高效液相色譜法測定克林霉素磷酸酯凝膠中克林霉素磷酸酯的含量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器：電子天平FA1004型（南京華欣分析儀器制造有限公司）；YL9100液相色譜儀（汕頭市科毅儀器設備有限公司）；MPC-K6s加熱制冷型恒溫水浴油浴（北京賽美思儀器設備有限公司）；德國SIGMA小型臺式高速（冷凍）離心機（北京博勱行儀器有限公司）；15升超聲波清洗器US-15A（中科儀（北京）儀器有限公司）。

1.2 色譜柱：安捷倫 十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱（218mm×4.6mm，5μm）。

1.3 對照品：克林霉素磷酸酯 購自中國藥品生物制品檢定所。

1.4 試劑：甲醇、乙腈為色譜純；水為純化水，其它試劑均為分析純。

1.5 輔料：卡波姆（江蘇省海安石油化工廠）、脂肪醇聚氧乙烯醚（江蘇省海安石油化工廠）、依地酸二鈉（江蘇采薇生物科技有限公司）。

2 制備方法

2.1 處方

克林霉素磷酸酯、卡波姆、三乙醇胺、甘油、乙醇、脂肪醇聚氧乙烯醚、亞硫酸氫鈉、依地酸二鈉。

2.2 制備

將亞硫酸氫鈉、依地酸二鈉溶于水中，攪拌下加入卡波姆，克林霉素磷酸酯甘油、乙醇、脂肪醇聚氧乙烯醚、亞硫酸氫鈉等，攪拌均勻得藥物溶液，分裝，即得。

3 質量控制

3.1 性狀

本品為透明凝膠。符合《中國藥典》2015年版對凝膠的要求。

3.2 含量測定

3.2.1 流動相的選擇。0.1mol/L磷酸二氫鉀-甲醇-乙腈（70：10：20）， 0.2%三乙胺溶液（用磷酸調pH至5.3）-乙腈（65∶35），甲醇-乙腈-甲酸-水（30：10：1：59），0.1mol/L磷酸二氫鉀（用磷酸調pH2.5）-甲醇-乙腈（70：10：20）不同比例的流動相，結果以0.1mol/L磷酸二氫鉀（用磷酸調pH2.5）-甲醇-乙腈（70：10：20）；為流動相，供試品各峰分離效果最好，故選用0.1mol/L磷酸二氫鉀（用磷酸調pH2.5）-甲醇-乙腈（70：10：20）為流動相。依據查閱文獻及考查的結果，確定色譜條件如下[1-5]。流動相：0.1mol/L磷酸二氫鉀（用磷酸調pH2.5）-甲醇-乙腈（70：10：20），檢測波長：210nm，流速：1.0m·min-1。柱溫：30℃。理論板數按克林霉素磷酸酯峰計算應不得低于2000。

3.2.2 對照品溶液的制備

精密稱取克林霉素磷酸酯對照品適量，置容量瓶中，加流動相制成每1mL含20ug的溶液，即得。

3.2.3 供試品溶液的制備

取適量供試品精密稱定，用流動相溶解至10ml容量瓶中并稀釋定容，搖勻后，離心5分鐘，取上清液，即得。

3.2.4 專屬性試驗

依照處方取卡波姆、三乙醇胺、甘油、乙醇、脂肪醇聚氧乙烯醚、亞硫酸氫鈉、依地酸二鈉等，按樣品制備工藝制成陰性對照樣品，照3.2.3項下供試品溶液的制備方法制成陰性液，依上述方法測定，結果在克林霉素磷酸酯出峰處陰性液無色譜峰，結果陰性試驗沒有干擾，表明本方法專屬性良好。

3.2.5 精密度試驗

精密稱取克林霉素磷酸酯對照品適量，加甲醇使溶解，制成濃度為20ug·mL-1的供試品溶液。照上述色譜條件，精密吸取10μl，連續進樣6次，記錄峰面積。結果，RSD=0.58%，表明本方法精密度良好。

3.2.6 對照品的線性考察

精密稱取克林霉素磷酸酯對照品10mg，置100ml容量瓶中，加入甲醇溶液使溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取1、2、3、4、5mL，置于10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。分別精密上述溶液吸取10μL，注人液相色譜儀，依照3.2.2項下的色譜條件測定，記錄色譜峰。以峰面積（Y）為縱坐標，對照品進樣量（X）為橫坐標，繪制標準曲線，計算回歸方程。結果表明，克林霉素磷酸酯在10～50μg·mL-1范圍內呈良好的線性關系。

3.2.7 重現性試驗

稱取同一批的克林霉素磷酸酯凝膠樣品6份，按測定方法項下的方法制備供試品溶液，測定含量，并計算樣品的RSD值，結果RSD為0.83%，結果表明此方法的重現性良好。

3.2.8 準確度試驗

精密稱取已知含量的樣品6份，分別加入一定量的克林霉素磷酸酯對照品，上述方法進行測定，計算回收率，平均回收率為99.1%，RSD=0.89%，結果表明樣品加樣回收率良好。

3.3 微生物限度檢查

按照《中國藥典》2015年版附錄所載方法測定，結果符合規定。

4 討論

本制劑穩定、可靠，符合中國藥典相關規定。此測定方法可用于克林霉素磷酸酯凝膠中克林霉素磷酸酯的含量測定。依照上述含量測定方法，測定克林霉素磷酸酯凝膠三批樣品中克林霉素磷酸酯的含量，結果三批樣品的含量分別為標示量的100.1%、99.6%、99.6%。克林霉素磷酸酯凝膠中克林霉素磷酸酯的含量為標示量的95%-105%。

參考文獻

[1]張斗勝，李進，許明哲，王晨，姚蕾，相秉仁，胡昌勤.快速液相色譜法與常規高效液相色譜法測定克林霉素磷酸酯及有關物質的比較[J].中國抗生素雜志，2008（06）.

[2]夏振華，秦赟，王明珊.克林霉素磷酸酯的“不良反應”——解析“克林霉素磷酸酯”生產工藝和質量標準[J].抗感染藥學，2007（03）.

[3]李文東，龐青云，張潔萍，王成剛，周立春.克林霉素磷酸酯注射液熱穩定性研究及其降解產物的LC-MS初步鑒定[J].中國藥學雜志，2009（03）.

[4]張斗勝，李進，許明哲，王晨，姚蕾，相秉仁，胡昌勤.快速液相色譜法與常規高效液相色譜法測定克林霉素磷酸酯及有關物質的比較[J].中國抗生素雜志，2008（06）.

[5]袁耀佐，張玫.反相高效液相色譜法測定注射用克林霉素磷酸酯的含量[J].江蘇藥學與臨床研究，2001（01）.