HPLC法測定桑椹顆粒中綠原酸的含量

李春麗

摘 要：本文采用高校液相測定了桑椹顆粒中綠原酸的含量，固定相為：安捷倫Cl8（4.6mm×250mm，5um），乙腈-甲醇-0.1mol/L冰醋酸 （10：10：80）為流動相，檢測波長為325nm，流速1.0mL·min-1，柱溫：30℃。綠原酸在0.01～3.2mg·mL-1范圍內呈良好的線性關系。綠原酸的平均回收率為99.6%，RSD為0.88%；此方法簡便、準確、重現性好，可用于桑椹顆粒中綠原酸的含量測定。

關鍵詞：桑椹顆粒；綠原酸；含量

桑椹顆粒滋陰益腎，補血潤燥。桑椹顆粒用于陰虧血燥引起的腰膝酸軟，眩暈失眠，目昏耳鳴，腸燥便秘，口干舌燥，須發早白。桑葚子別名桑實、文武實、黑椹、桑棗、桑果等，為桑科落葉喬木桑樹的成熟果實。桑葚子具有滋陰養血、生津、潤腸的功效。《本草衍義》記載：“桑根白皮條中言：桑之用稍備；然獨遺烏椹，桑之精英盡在于此。”桑葚子含有鞣酸（tannic acid）、蘋果酸（malicacid）、維生素（vitamin）B1、油酸（oleic acid）、辛酸（caprylic acid）、肉豆蔻酸（myris-tic acid）、牻兒醇（geraniol）、芳樟醇（linalool）、a-蒎烯（α-pinene）等。本文采用高校液相測定了桑椹顆粒中綠原酸的含量。

1 儀器與試藥

電子天平FA1004型（南京華欣分析儀器制造有限公司）；LU230四元低壓梯度液相色譜分析系統（大連依利特分析儀器有限公司）；司）；EasyGuard保護柱（島津技邇上海商貿有限公司）；BT-V20A/B高精度恒溫水槽（上海百典儀器設備有限公司）；PH510臺式精密酸度計（安萊立思儀器科技（上海）有限公司）；美國澤拉布Super超越系列全觸屏超純水系統（上海和泰儀器有限公司）；Globus超聲波萃取設備（賽普泰克有限公司（上海比朗儀器制造有限公司）；UV-5500（PC）掃描型紫外可見分光光度計（上海元析儀器有限公司）。綠原酸對照品由中國藥品生物制品檢定所提供。乙腈（河南薩默生物科技有限公司）、乙酸銨（天津市彪仕奇科技發展有限公司）、甲醇（天津市彪仕奇科技發展有限公司）、醋酸銨（南京化學試劑股份有限公司）、醋酸（河南薩默生物科技有限公司）、磷酸（南京化學試劑股份有限公司）、三乙胺（南京化學試劑股份有限公司）、磷酸二氫銨（南京化學試劑股份有限公司）。

2 含量測定

2.1 色譜條件：依據查閱文獻及考查的結果，確定色譜條件如下[1-5]。色譜柱為安捷倫Cl8規格為（4.6mm×250mm，5um）；乙腈-甲醇-0.1mol/L冰醋酸（10：10：80）為流動相；檢測波長為325nm。理論板數按綠原酸峰計算應不得低于2000。

2.2 供試品溶液的制備

取桑椹顆粒，研細，精密稱取，精密加入流動相30mL，超聲提取5分鐘，放冷，過濾，濾液轉移至50毫升容量瓶內用流動相定容，搖勻，即得。

2.3 對照品溶液的制備

精密稱取綠原酸對照品約10mg，用流動相溶解并稀釋成每1ml中含0.2mg的溶液，作為對照溶液。

2.4 陰性溶液的制備

依照處方取桑椹顆粒輔料，按樣品制備工藝制成陰性對照樣品，照供試品溶液的制備方法制成陰性液，依上述方法測定，結果在綠原酸出峰處陰性液無色譜峰，結果陰性試驗沒有干擾，表明本方法專屬性良好。

2.5 準曲線的制備

制備濃度為0.01、0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2mg·mL-1的對照品溶液，分別精密吸取10μL注入HPLC，記錄色譜圖。以峰面積積分值A（μg）為橫坐標，進樣量為縱坐標，繪制標準曲線，計算回歸方程。試驗表明，綠原酸對照品在0.01～3.2mg·mL-1范圍內線性關系良好。

2.6 精密度試驗

依照2.4項下制備對照品溶液，精密吸取綠原酸對照品溶液10μL重復進樣6次，測定峰面積積分值，對照品峰面積積分值的RSD為0.63%。結果表明，本實驗精密度良好。

2.7 重現性試驗

分別稱取同批桑椹顆粒樣品6份，分別依照2.2項下供試品制0.89%，結果表明，此含量測定方法的重現性良好。

2.8 穩定性試驗

依照2.2項下供試品制備方法制備供試品溶液，分別在0，0.2，0.，4，0.6、0.8、1.0小時精密吸取供試品溶液注入液相色譜儀，進樣測定，供試品綠原酸峰面積積分值的RSD為0.86%。結果表明綠原酸至少在1小時內穩定。

2.9 回收率試驗

采用加樣回收試驗，取已知含量的同一批供試品各6份，精密稱定，分精密添加一定量的綠原酸對照品，按供試品制備所述方法制備供試品溶液，測定含量（同時測定樣品含量），計算回收率。6次測定的平均回收率為99.6%，RSD為0.88%。

2.10 樣品含量測定

依照上述含量測定方法，測定桑椹顆粒三批樣品中綠原酸的含量，含量分別為0.18mg/g、0.23mg/g、0.21mg/g。

3 討論

分別考察乙腈-甲醇-0.1mol/L冰醋酸（10：10：80），乙腈-0.2%（質量分數）磷酸（體積比25：75），乙腈-甲醇-水（10：1：89）（用磷酸調PH值為6.0），甲醇-0.1%磷酸溶液（30：70），甲醇-異丙醇-乙腈（37∶61∶2），0.2%三乙胺溶液（用磷酸調pH至5.3）-乙腈（65∶35），0.045mol.L-1磷酸二氫銨溶液-乙腈（2∶1）（用三乙胺調pH值至6.5），0.1mol/L磷酸二氫銨溶液（三乙胺調節pH6.6）-乙腈（70：30），乙腈-甲醇-水（10：5：85）（用磷酸調PH值為6.0），水-甲醇-三乙胺（60∶40：0.01），0.1mol.L-1磷酸二氫銨溶液（三乙胺調節pH6.5）-乙腈（75∶25）不同比例的流動相，結果以乙腈-甲醇-0.1mol/L冰醋酸（10：10：80）為流動相，供試品各峰分離效果最好，故選用乙腈-甲醇-0.1mol/L冰醋酸（10：10：80）為流動相。此方法簡便、準確、重現性好，可用于桑椹顆粒中綠原酸的含量測定。桑椹顆粒中綠原酸的含量應為標示量的95-105%。

參考文獻

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