高效液相色譜法測定雞蛋中磺胺類藥物殘留

馬世柱 陳楠 黎小鵬 周嘉誠 梁錦填 高文彬 林俊杰

摘要 本文應用高效液相色譜法檢測雞蛋全蛋中磺胺嘧啶（SD）、磺胺二甲嘧啶（SM2）、磺胺甲氧嗪（SMP）、磺胺間甲氧嘧啶（SMM）、磺胺甲噁唑（SMZ）、磺胺地索辛（SDM）和磺胺喹噁啉（SQ）7種磺胺類藥物（SAs），并對提取、凈化等前處理條件以及檢測條件進行優化。結果表明，雞蛋樣品中的磺胺類藥物適宜采用乙酸乙酯進行提取，35 ℃減壓旋蒸濃縮至近干，經水飽和正己烷洗滌凈化或堿性氧化鋁SPE凈化均可以除去大部分雞蛋中的干擾物，滿足檢測要求；以0.1%磷酸∶乙腈（V∶V=80∶20）作為流動相，20 min內7種磺胺類藥物均能達到基線分離。本方法提取效果良好，結果重復性及回收率滿足實際檢測需求，2種凈化方法使用靈活，適合于雞蛋中7種磺胺類藥物殘留量的測定。

關鍵詞 高效液相色譜法；雞蛋；磺胺類藥物；殘留

中圖分類號 O657.7+2 文獻標識碼 A 文章編號 1007-5739（2018）11-0235-02

Abstract In this paper，7 kinds of sulfonamides（SAs），such as pyrimidine（SD），sulfamethazine（SM2），sulfamethoxypyridazine（SMP），sulfa-monomethoxine（SMM），sulfamethoxazole（SMZ），sulfadimethoxine（SDM） and sulfaquinoxaline（SQ）were detected by HPLC method，and the extra-ction and purification conditions and testing conditions were optimized.The results showed that the sulfonamides in egg samples were suitable to be extracted by ethyl acetate，decompressed and evaporated to dryness at 35 ℃.Water saturated hexane scrubbing or alkaline alumina SPE purification could remove most of the interferents in eggs and meet the detection requirements.Using 0.1% phosphoric acid ∶ acetonitrile（V∶V=80∶20）as the mobile phase， 7 kinds of sulfonamides were able to achieve the baseline separation in 20 min.The extraction effect was good by this method，and repeatability and recovery rate of the result met the actual detection requirements.The 2 kinds of purification methods were flexible and suitable for the determination of 7 kinds of sulfonamides residues in eggs.

Key words HPLC；egg；sulfonamides；residue

隨著人們生活水平的日益提高，人們對動物性食品的衛生質量與安全的要求也越來越高，不僅對營養與味道要求高，還要求食品衛生且經濟。一方面，獸藥（其中包括添加劑）除保障動物健康生長以外，還可以降低動物發病率以及死亡率，同時提高飼料的利用率，促進動物的生長發育并改善動物產品的品質；但是另一方面，獸藥的使用又會導致動物性食品中含有獸藥殘留，這種殘留會給人體的健康帶來不可逆轉的危害。因此，獸藥殘留問題也日益受到了世界各國的重視。

磺胺類藥物（Sulfonamides，SAs）是一種化學合成抗生素，其基本母核是對氨基苯磺酰胺，是具有這一類共同母核的藥物總稱[1]。隨著經濟的日益增長，供過于求的市場現狀促進了現代農業的集約化、規模化以及標準化發展，這使得獸藥特別是磺胺類藥物在水產品養殖等行業的使用量大大加大。而在我國，限用藥物、非法藥物濫用現象屢見不鮮，這引發了我國食品安全事件頻發的嚴重后果[2]。因此，研究動物性獸藥殘留的檢測方法變得尤為重要，我國也在繼續改進相關方面的技術檢測，以防止重大食品安全事故的發生。因此，對SAs的化學性質、作用機理及其殘留與檢測方法的研究是關系到畜牧業健康發展的重要問題之一[3]。本文應用高效液相色譜法，對雞蛋全蛋中磺胺嘧啶（SD）、磺胺二甲嘧啶（SM2）、磺胺甲氧嗪（SMP）、磺胺間甲氧嘧啶（SMM）、磺胺甲噁唑（SMZ）、磺胺地索辛（SDM）和磺胺喹噁啉（SQ）7種SAs的前處理及儀器檢測條件進行了研究。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Agilent高效液相色譜儀（HPLC-DAD）；多功能超純水系統（S20，Spring）；旋轉蒸發儀（含真空泵，IKA-RV10，IKA）；臺式冷凍高速離心機（A2316R，上海安戈儀器有限公司）；固相萃取裝置（天津奧特賽思儀器有限公司）；多功能超純水系統（Spring-S20，廈門銳思捷科學儀器有限公司）；百分之一電子天平（CP2102，Ohaus）。

樣品前處理采用的乙酸乙酯、甲醇、二氯甲烷、無水硫酸鈉、鹽酸均為分析純，廣州化學試劑廠生產；流動相采用的0.1%磷酸水溶液和乙腈混合液均為色譜純，德國默克化學試劑有限公司生產；0.22 μm有機濾膜，天津津騰實驗室設備有限公司生產。標準品均由農業部環境保護科研監測所生產，濃度均為100 mg/L，使用前用甲醇將其稀釋成所需濃度的混合標準溶液。

1.2 試驗方法

1.2.1 樣品的提取與凈化。

（1）取雞蛋5.00 g±0.05 g于50 mL離心管，加入20 mL乙酸乙酯和8 g無水硫酸鈉，渦旋振蕩2 min（或搖床振蕩15 min），5 000 r/min冷凍離心5 min，用一次性塑料吸管取上層清液移入50 mL圓底燒瓶。雞蛋殘渣中加入20 mL乙酸乙酯重復提取，用玻璃棒攪勻結塊殘渣，并用少量乙酸乙酯洗滌玻璃棒，之后倒入離心管，渦旋振蕩2 min（或搖床振蕩15 min），5 000 r/min離心5 min，合并乙酸乙酯層，35 ℃減壓旋蒸至近干[4]。

（2）向圓底燒瓶中加入5.00 mL 流動相[0.1%磷酸水溶液∶乙腈（V∶V=80∶20）]，混勻超聲1 min，移入15 mL離心管，向離心管中加入8 mL水飽和正己烷，渦旋混勻1 min，5 000 r/min離心5 min，棄去上層正己烷，重復上述操作1次后取2 mL下層清液，過0.20 μm濾膜，棄去前幾滴溶液后轉入2 mL樣品瓶供HPLC-DAD分析。

1.2.2 色譜條件。色譜柱為ZORBAX SB-C18柱，150 mm×4.6 mm，粒徑5.0 ？滋m；流動相為0.1%磷酸水溶液∶乙腈（V∶V=80∶20）；柱溫為25 ℃；流速為1.0 mL/min；進樣量取50 ？滋L；檢測器使用DAD檢測器，檢測波長為270 nm，采集時長為20 min。

2 結果與分析

2.1 標準色譜圖

水產品中SAs殘留檢測的流動相一般采用乙酸水與甲醇或乙腈按一定比例混合[5]。根據文獻報道的測定磺胺類藥物的反相HPLC流動相體系[6-7]、農牧發〔2001〕38號《動物源食品中磺胺類藥物殘留的檢測方法-高效液相色譜法》[8]的磷酸水-乙腈體系，同時參考多個流動相體系進行色譜方法優化試驗，并比較了不同濃度及比例的磷酸、乙酸、甲酸水與乙腈流動相體系。結果表明，水相pH值越低或有機相比例越高，均會提前目標物的出峰位置，但同時也造成部分藥物基線分離較差，甚至保留時間重疊，對比多組數據結果，選取了0.1%磷酸水溶液∶乙腈（V∶V=80∶20）作為流動相，在25 ℃柱溫條件和1 mL/min流速下，7種SAs能達到基線分離，峰型尖銳，峰對稱性較好。7種SAs的標準色譜圖見圖1。

2.2 線性范圍和檢出限

在20～500 μg/L濃度范圍內，以峰面積（y）為縱坐標，以標準品濃度（x）為橫坐標，根據五點校正法繪制標準曲線，擬合得出標準曲線在20～500 μg/L濃度范圍內7種SAs的線性回歸方程及相關系數，以3倍信噪比來確定檢測限，10倍信噪比來確定定量限，結果見表1。

由表1可知，該儀器方法測定7種SAs在20～500 μg/L內線性優異，SAs的相關系數在0.999 63～0.999 99之間，其線性響應范圍完全滿足檢測的要求，說明該儀器方法用于定量檢測具有很好的可靠性。

2.3 回收率和精密度

通過在空白樣品中添加不同濃度的SAs，以樣品加標回收率和樣品結果重復性來評價方法的可靠性。選擇100、40、20 μg/kg共3個添加濃度進行試驗，按照2種凈化方法同時進行同一添加濃度的前處理試驗，每個添加濃度做6個平行加標樣，計算結果扣除樣品空白，測定結果用平行測定后的算術平均值表示，保留3位有效數字，并計算求得平均回收率和相對標準偏差，見表2。

由表2可知，2種凈化方法總體上均獲得了良好的回收率，RSD值均<10%，說明2種方法的重現性符合要求，結果準確可靠，可以滿足雞蛋中SAs含量檢測的要求。

3 結論

本文應用高效液相色譜法，對雞蛋全蛋中磺胺嘧啶（SD）、磺胺二甲嘧啶（SM2）、磺胺甲氧嗪（SMP）、磺胺間甲氧嘧啶（SMM）、磺胺甲噁唑（SMZ）、磺胺地索辛（SDM）和磺胺喹噁啉（SQ）7種SAs的前處理及儀器檢測條件進行了研究。結果表明，雞蛋樣品中的SAs采用乙酸乙酯振蕩提取，無水硫酸鈉脫水鹽析，提取液經35 ℃減壓旋蒸濃縮，復溶物通過水飽和正己烷洗滌或堿性氧化鋁SPE凈化后，均可以除去雞蛋樣品中大部分的色素、蛋白質及脂肪，滿足HPLC-DAD檢測要求；色譜條件以0.1%磷酸∶乙腈（V∶V=80∶20）作為流動相，7種SAs均能達到基線分離，2種凈化方法的回收率良好，其中SPE凈化法檢測限為3.35～17.84 μg/kg，定量限低于60 μg/kg。本方法提取效果良好，結果重復性及回收率滿足實際檢測需求，適合于雞蛋中7種SAs殘留量的測定。

4 參考文獻

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