疏肝解郁法對肝氣郁結型輕度認知功能障礙患者端粒酶活性的影響

詹向紅 丁 瑩 劉 永 侯俊林 孫前明 關徐濤 潘玉穎

(河南中醫藥大學基礎醫學院，河南 鄭州 450046)

輕度認知功能障礙(MCI)是指有主觀、客觀記憶或認知損害，但日常生活能力正常的狀態，是正常衰老與阿爾茨海默病(AD)之間的過渡階段。MCI患者是癡呆的高危人群，MCI患者以每年10%～15%的速度進展為AD，轉化率較正常老年人高10倍〔1〕。現代醫學研究表明：MCI的危險因素主要包括社會人口因素、疾病、生活方式、基因、精神心理因素(焦慮、抑郁等)五個方面〔2～4〕。由于生活節奏加快、壓力過大造成的抑郁、焦慮等情緒問題引起的長期心理應激會使下丘腦-垂體-腎上腺軸持續亢進、糖皮質激素水平升高〔5〕，損傷海馬〔6〕，使認知功能下降。祖國醫學認為，抑郁等情緒問題多屬肝氣郁結的范疇。而肝主疏泄，調暢情志及全身氣機，若情志不暢，肝疏泄失司，則全身氣機失調，血液運行不暢，精血清陽之氣不能上輸于腦，長此以往必然導致認知功能的下降。研究發現長期心理應激不僅使認知功能損傷〔6〕，還導致端粒酶活性降低〔7〕。本研究從端粒酶活性角度探討疏肝解郁法改善認知功能的療效及其可能機制。

1 對象與方法

1.1研究對象 研究方案經河南中醫藥大學第一附屬醫院倫理委員會批準，研究對象年齡40～65歲，在河南中醫藥大學第一附屬醫院、第三附屬醫院體檢中心進行體檢的人員及鄭州市大型社區招募的志愿者。最終符合實驗要求并完成檢測的肝氣郁結型MCI患者共30例，平均年齡(52.80±5.93)歲，男10例、女20例，受教育程度為大專及以上4例、高中12例、初中7例、小學7例。

1.2納入標準

1.2.1MCI患者納入標準 符合國際MCI工作組標準(2004年)：①患者或其家庭成員有認知損害的主訴；②患者或知情者報告在過去1年中患者認知功能出現衰退；③臨床評估證實存在認知障礙；④患者基本日常生活能力未受影響；⑤尚未進展為癡呆〔8〕。

1.2.2神經心理量表 ①蒙特利爾認知評估量表(MoCA)：用以判斷認知功能，篩選 MCI 患者，滿分30分，MoCA得分<26分為納入標準，若受教育年限≤12年，則MoCA得分加1分以校正〔9〕。②簡易精神狀態檢查(MMSE)量表：用以排除癡呆，滿分30分，得分低于下述劃界分者為癡呆狀態，須排除：文盲組≤17分、小學組≤20分、中學或以上組≤24分〔10〕。③全面衰退量表(GDS)：用以判斷患者認知功能損害程度，從正常到認知下降非常嚴重分為7 級，納入標準為2～3級〔11〕。④日常生活活動(ADL)量表：對患者日常生活能力進行評估，分值20～80分，納入標準為ADL<26分〔12〕。入組MCI被試需同時符合以上要求。

1.2.3肝氣郁結證癥狀篩選標準 采用肝氣郁結證癥狀程度計分表：①胸脅、乳房、少腹脹痛；②抑郁太息；③咽有梗阻感；④痛經、閉經或月經先后不定期；⑤脈弦。5項中1、2必備，具有3項或兼有1項脾虛癥狀(神疲體倦；納差；腹脹；便溏)，計分在6分以上者〔13〕。

1.3排除標準 ①不能配合調查及檢測者；②腦部腫瘤患者；③存在神經系統疾病或精神疾病病史者；④患有可能影響腦功能或影響認知功能評價的重要臟器病變者；⑤目前診斷為活動性癲癇者；⑥癡呆患者；⑦服用影響認知功能藥物者。

1.4藥物干預 因肝木易乘脾土，臨床上肝郁常與脾虛并見，“見肝之病，知肝傳脾，當先實其脾氣”，故選用疏肝解郁、健脾養血的經典方藥逍遙丸進行治療。逍遙丸(河南宛西制藥)，8粒/次，3次/d，口服，持續用藥12 w，每月定期隨訪。

1.5試驗儀器和試劑 994型-86℃超低溫冰箱(美國熱電)；K30臺式多功能高速冷凍離心機(美國Sigma公司)；全波長自動酶標分析儀(美國熱電)；HPS-250生化培養箱(哈爾濱市東聯電子技術開發有限公司)；1575自動酶標洗板機(美國熱電)。端粒酶活性試劑盒(Merck Millipore S7710)。

1.6端粒酶活性檢測 被試空腹肘靜脈采血，用酶聯免疫吸附(ELISA)法對外周血單個核細胞(PBMC)端粒酶活性進行分析，按照說明書進行檢測。

1.7統計學方法 應用SPSS17.0軟件進行配對t檢驗。

2 結 果

2.1MoCA得分 與用藥前相比，患者用藥后的視空間與執行、注意、語言、抽象、延遲回憶、命名、總分均顯著改善(P<0.05)；但定向得分差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 肝郁 MCI患者用藥前后MoCA結果分，n=30)

2.2端粒酶活性檢測結果 患者用藥后的端粒酶活性〔(12.81±8.86)U/g〕顯著高于用藥前〔(9.64±4.52)U/g,P<0.05〕。

3 討 論

端粒是一種特異結合蛋白與真核細胞染色體末端DNA重復序列形成的復合體，可維持染色體穩定，但端粒會隨著DNA復制、細胞分裂而不斷縮短。端粒長度決定細胞分裂的次數，超過分裂極限后細胞就自然衰老死亡。端粒酶是使端粒延伸的反轉錄DNA合成酶，是一種由RNA 和蛋白質組成的核糖核酸-蛋白的復合物。端粒酶主要功能是延伸端粒DNA，修復斷裂的染色體末端，使染色體保持完整。細胞內端粒酶活性降低或缺失會導致端粒縮短，引發細胞衰老〔14〕，端粒酶活性的下降反映了全身的衰老。

近些年來已有研究發現外周血端粒酶活性與認知衰老之間也存在聯系。Wolkowitz等〔15〕研究發現重度抑郁癥患者PBMC端粒酶活性與海馬體積存在顯著正相關。海馬是學習記憶的關鍵部位，海馬體積縮小通常意味著認知功能的下降。因此，可以認為嚴重抑郁癥患者的認知功能減退與PBMC端粒酶活性降低關系密切。其可能機制是當PBMC端粒酶活性下降時免疫系統功能衰退〔16〕，而免疫功能下降，可能導致變態反應增加，氧自由基生成增多，攻擊神經細胞致其死亡，使腦老化進程加速，認知功能降低。劉江紅等〔17〕對多篇文獻的分析也證明了免疫功能減弱是認知功能下降的可能機制。Deng等〔18〕研究顯示體育鍛煉可以提高PBMC端粒酶活性，也有報道顯示，長期適當體育鍛煉可以改善認知功能〔19〕，由此推測認知功能有可能隨著端粒酶活性的升高而改善。MoCA是目前應用廣泛的認知功能測評量表，其得分改變可以反映認知功能變化。本研究結果顯示認知功能改善與PBMC端粒酶活性提高有關。

氧化應激、炎癥反應、心理應激等都可降低端粒酶活性〔20〕。Epel等〔7〕研究表明，長期遭受心理應激者PBMC端粒縮短，端粒酶活性降低，即心理應激是導致端粒酶活性下降的原因之一。本研究發現采用疏肝解郁代表方藥逍遙丸對肝氣郁結型MCI患者進行干預后，患者促腎上腺皮質激素下降，應激狀態得到改善〔21〕，可以認為疏肝解郁方藥可能是通過改善患者應激狀態，從而使端粒酶活性得以提高。