不同劑量促卵泡素對成年和牛超數排卵效果的影響分析

孫鳳俊 焦子康 薛建華 宣柏華 張佳誼

1 材料與方法

1.1 供體母牛選擇 供體母牛是位于北京市懷柔區的和牛生物科技（北京）有限公司飼養的空懷和牛，年齡為三四歲。

1.2 藥品與器械 促卵泡素（FSH）（貝爾尼奇公司FOLLTROPIN-V，400 mg NIH/瓶），黃體酮緩釋劑陰道栓CIDR（新西蘭DEC國際有限公司，黃體酮1．38 g/支），氯氣前列烯醇（齊魯動物保健品公司，0．322 g/支），黃體酮（P4）注射液（寧波市三生藥業有限公司，2 mL∶50 mg/支）；苯甲酸鈉雌二醇（EB）注射液（寧波市三生藥業有限公司，2 mL∶4 mg/支）；沖卵液自配（含有10%FCS的PBS液），胚胎保存液及冷凍保護液均購自貝爾尼奇公司，采卵管為二路式采卵管（規格為18#）和集卵杯購自富士平公司。

1.3 超排方法與胚胎采集

1.3.1 超排處理方法 供體和牛超數排卵處理與胚胎采集于2017年3-4月在北京市懷柔區和牛生物科技（北京）有限公司和牛養殖場進行。供體牛超數排卵處理采用陰道栓+促卵泡素+PG方法進行。超數排卵具體方法：在發情周期任意一天上午給供體牛放置陰道栓，同時肌肉注射黃體酮注射液（P4）100 mg和苯甲酸鈉雌二醇注射液（E2）2 mg，放栓當日為0 d，第5～8 d超排處理按著每天2次遞減量肌肉注射Folltropin-V。促卵泡素采用Folltropin-V，連續4 d共8次遞減劑量注射方法，每頭供體牛超數排卵注射Folltropin-V總劑量分別為200、240、250、260 mg 4個組別[1]。

1.3.2 人工授精 供體牛放栓后第9 d早晚觀察發情，站立發情后12 h進行第1次人工授精，精液為和牛常規冷凍精液，間隔12 h進行第2次輸精。每次1支凍精，輸精部位子宮體。

1.3.3 胚胎采集與質量鑒定 供體牛超排發情后第7 d（發情當天為0 d）采用非手術法采集胚胎。每側子宮角使用250 mL左右沖卵液回收胚胎，反復沖洗六七次，回收液在集卵杯中，沖胚后，子宮內灌注25～30 mL碘甘油，并肌肉注射2支氯前列烯醇。在實驗室內使用體式顯微鏡進行檢胚，并根據形態學鑒定胚胎質量，并將胚胎分為A級、B級、C級、退化胚胎和未受精卵，其中A、B、C級胚胎為可用胚胎，退化胚胎和未受精卵為不可用胚胎。A、B級胚胎具體鑒定標準如下：A級，表示胚胎形態完整、輪廓清晰呈球形、結構緊湊，分裂球大小均勻、色調和透明度適中，無附著的細胞和液泡；B級，表示輪廓清晰、色調和細胞密度良好，可見到少量附著的細胞和液泡。

2 結果與分析

累計處理和牛供體34頭，共獲得總卵數299枚，頭均獲得總卵數8．79枚，第1～3組頭均獲總卵數分別為12．60、9．83、9．11枚，均高于第4組6．79枚，但差異不顯著（P＞0．05）；34頭供體累計獲得可用胚198枚，頭均獲得可用胚5．82枚，1～3組頭均獲得可用胚分別為6．00、7．17、5．67枚，均高于第4組5．29枚，但差異不顯著（P＞0．05），各組間也沒有顯著差異。然而，第1組不可用胚（6．60枚/頭）和退化胚（6．20枚/頭）顯著高于其他各組(分別為2．67枚/頭和0．67枚 /頭，3．44枚 /頭和 2．44枚 /頭，1．50枚 /頭和0．86枚/頭)，2～4組各組間差異不顯著（P＞0．05）。

3 討論

供體牛超排時，外源激素FSH劑量和注射時間及方法是直接影響超排效果的重要因素。FSH劑量過大時，供體卵巢反應過度，影響卵母細胞質量，從而降低了超排效果；而FSH劑量過低，又起不到超排作用。

本試驗對三四歲成年和牛供體應用Folltropin-V的劑量200～260 mg/頭，低于成年荷斯坦牛供體的劑量（400 mg/頭），平均可用胚也達到了5．82枚的良好效果。從試驗結果可以看出，頭均獲得可用胚數量第1組260 mg組（6．00枚）、第2組250 mg組（7．17枚）和第3組240 mg組（5．67枚）均高于第4組200 mg組（5．29枚），但各組間差異不顯著（P＞0．05）。從可用胚數量看出，隨著FSH劑量的降低，超排效果也呈降低趨勢。另外，從胚胎質量結果也可以看出，FSH劑量增加，不可用胚和退化胚數量也增多。說明促卵泡素劑量過大，會產生不利效果。因此，超排應根據不同品種牛供體對促卵泡素制劑的敏感性以及供體牛年齡和體質量等因素，確定適宜劑量，從而達到良好的超排效果。本試驗超排供體牛數量較少，同時供體牛個體差異較大，因此還需進一步驗證。

[1]劉善齋，劉洪渝，涂曉華，等．和牛母牛超數排卵及胚胎移植試驗研究效果初報[J]．中國牛業科學，2012（5）：12-14，20．