HMGA2蛋白在口腔鱗狀細胞癌的表達與臨床意義

李 慧

（中西醫結合醫院 口腔科，吉林 吉林132011）

口 腔 頜 面 部 鱗 狀 細 胞 癌 （oral squamous cell carcinoma，OSCC）其患病率和死亡率位居常見口腔惡性腫瘤的第6位，浸潤和轉移是造成其不良預后的主要因素［1］。高遷移率族蛋白（HMGA2）在許多上皮組織惡性腫瘤中具有高表達，與腫瘤的發生、發展及預后密切相關［2］。本文通過檢測HMGA2在口腔鱗癌組織中的表達，探討它在口腔鱗癌發生發展中的作用，為口腔鱗癌的早期診斷和治療提供有參考價值的分子生物學指標。

1 材料與方法

1．1 臨床資料

收集2008年10月至2012年1月在我院口腔科經手術病理證實的口腔鱗狀細胞癌45例，術前均未接受過放化療治療。患者年齡在38－80歲，中位年齡是49．2歲。經頸淋巴結清掃術證實伴淋巴結轉移者20例，無淋巴結轉移者25例；按TNM分期，Ⅰ＋Ⅱ期患者25例，Ⅲ＋Ⅳ期患者20例。鱗癌分化程度：低分化14例，中分化14例，高分化17例。正常口腔黏膜組織標本30例做對照。

1．2 免疫組化染色方法

采用鏈菌素生物素蛋白－過氧化酶連接法（SP）對口腔鱗狀細胞癌組織中 HMGA2蛋白的表達進行檢測。首先脫蠟和水化，然后微波熱修復法抗原修復，接著用3%H2O2溶液處理10min，然后滴加適量正常山羊血清封閉，每張切片滴加HMGA2兔抗人多克隆抗體稀釋液50μl（1∶50稀釋），PBS洗3次，滴加生物素標記的二抗50μl，辣根過氧化物酶標記的鏈霉卵白素工作液，蘇木精復染細胞核2 min，自來水沖洗10min；脫水、透明、封片、鏡檢。

1．3 結果判定

采用雙盲法閱片。HMGA2蛋白陽性染色定位于胞核。高倍鏡下隨機選5個視野，結合染色強度與細胞染色百分率進行綜合評分。染色強度評分標準：胞核內無著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。陽性細胞占總細胞數＜5%為0，5%－25%為1分，26%－50%為2分，51%－75%為3分，76%－100%為4分。以染色強度評分結果與陽性細胞百分率評分結果相乘所得的總分進行結果判定：0 分為陰性，1－3 分為弱陽性（＋），4－8 分為中等陽性（＋＋），9－12分為強陽性（＋＋＋）。

所有數據采用SPSS17．0軟件統計分析，卡方檢驗，P≤0．05有統計學意義。

2 結果

HMGA2的陽性表達主要見于胞漿或胞膜，呈棕黃色，陽性顆粒粗細不等。HMGA2在口腔鱗癌組織中呈高表達，陽性表達率為46．7%，口腔正常黏膜組織的陽性表達率為16．7%，二者相比有顯著差異（P＜0．05）。口腔鱗狀細胞癌HMGA2的表達與臨床病理特征的相關性見表1。HMGA2的表達與淋巴結轉移密切相關，有淋巴結轉移組與無淋巴結轉移組HMGA2陽性表達率相比有顯著性差異（P＜0．05）。此外，HMGA2的表達與口腔鱗狀細胞癌分化程度無相關性，與TNM分期密切相關，在TNMⅠ＋Ⅱ期和Ⅲ＋Ⅳ期的表達率分別為36．0%和60．0%，有顯著性差異（P＜0．05）。

表1 口腔鱗狀細胞癌HMGA2的表達與臨床病理的關系

3 討論

HMGA2基因位于人類12號染色體的q15區，長10kb，由5個外顯子和4個內含子組成［3］。HMGA2基因編碼含109個AA的完整蛋白產物，分子量12kDa，表達定位于細胞核，屬于非組蛋白染色體蛋白。HMGA2蛋白是HMGA2基因的表達產物，HMGA2蛋白也可直接和轉錄因子相互作用，通過調整它的構象，影響其與DNA結合能致HMGA2在胚胎形成早期表達增高，隨著胚胎的生長發育表達逐漸降低［4］。在正常成人組織中，幾乎檢測不到HMGA2基因轉錄產物。最近幾年，越來越多的證據顯示HMGA2在多種人類上皮來源惡性腫瘤組織中出現異常表達，發病機制有首先干擾細胞周期，HMGA2可以結合細胞周期蛋白基因的啟動子進而上調細胞周期蛋白的表達，加速細胞周期G2／M 期的轉化，促使腫瘤發生［5］。其次，促進上皮細胞間質化，使上皮細胞失去極性，侵襲和游走遷移能力增強。Thuault等研究發現，在TGF－β信號通路中，Smad可以通過HMGA2上調其下游的目標基因Snail、Twist和Slug等表達，導致E－cadherin表達下調，細胞間極性喪失而誘發上皮細胞－間充質轉化（EMT）［6］。本研究發現口腔鱗癌織中HMGA2表達率顯著高于正常口腔黏膜組織，進一步證實HMGA2在口腔鱗癌發生發展中的重要作用。研究中還發現部分癌組織的侵襲緣周圍的腫瘤細胞陽性表達水平更高，說明癌巢周邊的腫瘤細胞可以檢測更多的HMGA2，表達多定位于癌組織的侵襲緣，顯示出細胞具有EMT特征使得腫瘤細胞更容易向周圍侵襲。本實驗結果還顯示，在淋巴結轉移組中，HMGA2的陽性表達率明顯高于無淋巴結轉移組。進一步研究分析，在口腔鱗狀細胞癌組織中HMGA2高表達與口腔鱗癌病理分級無關，與臨床分期有關，提示HMGA2高表達可能是口腔鱗癌具有高轉移、高侵襲能力的分子基礎。所以，高表達HMGA2的組織多呈高度惡性、伴有淋巴結轉移或遠處轉移，并且HMGA2的表達程度與病人術后生存期密切相關，高表達HMGA2的病人生存期縮短，提示預后不良，顯示出HMGA2是一個潛在的癌癥診斷標志物。

總之，HMGA2顯示出在口腔鱗狀細胞癌發生、發展過程中具有重要的調控作用，對HMGA2的研究有助于我們對口腔鱗狀細胞癌轉移的分子機制更深入了解，開辟治療的新途徑，同時為預后判斷提供有價值的分子生物學指標，為臨床進一步制定合理有效的綜合治療方案提供可靠的依據。

［1］邱蔚六．頜面外科學［M］．第四版．北京：人民衛生出版社，1999：266．

［2］周穎婷．HMGA2與胃癌之間關系的研究進展［J］．中外婦兒健康，2011，19（9）：173．

［3］查 郎，王子衛，張 能，等．HMGA2與胃癌上皮細胞間質轉化的相關性及臨床意義［J］．生命科學研究，2011，15（1）：62．

［4］Fusco A，Fedele M．Roles of HMGA proteins in cancer［J］．Nat Rev Cancer，2007，7（12）：899．

［5］Di Cello F，Hillion J，Hristoy A，et al．HMGA2participates in transformationin human lung cancer［J］．Mol Cancer Res，2008，6（5）：743．

［6］Thuault S，Valcourt U，Petersen M，et al．Transforming growthfactor－βemploys HMGA2to elicit epithelial mesenchymal transition［J］．Journal of cell biology，2006，174（2）：175．