高效液相色譜-串聯質譜法測定豬肉中的鹽酸克倫特羅

（蚌埠產品質量監督檢驗研究院，安徽 蚌埠 233000）

鹽酸克倫特羅（CL）又稱“瘦肉精”，屬于β-興奮劑[1]，具有舒張支氣管、改善通氣，舒張和松弛子宮平滑肌的作用，被用作促生長飼料添加劑[2]。但不法分子為了追求經濟效益，將其應用到了動物身上，發生了一系列人類“瘦肉精”中毒事件。《食品中可能違法添加的非食用物質和易濫用的食品添加劑名單（第四批）》（整頓辦函〔2010〕50號）將CL列入違法添加的非食用物質[3]。因此，尋找一種有效的CL檢測方法具有重要意義。

目前，用于檢測CL的方法主要有生物傳感技術、高效液相色譜法（HPLC）、氣相色譜/質譜聯用（GC/MS）等[4-5]。生物傳感技術僅可用于檢測尿液、血清和水溶液中的CL殘留，檢測范圍有限且靈敏度不高。HPLC耗時長，普通的紫外檢測器對低濃度CL檢測的假陽性率高、靈敏度低[6]。GC/MS法需要經過一系列分離純化，操作麻煩[7]。本文介紹了液相色譜-質譜法檢測CL，具有簡單、快速、準確的特點，且適用于大批量樣品的測定。

1 實驗部分

1.1 儀器和設備

高效液相色譜-串聯質譜聯用儀（Agilent 1290+6460），電子天平，旋渦混合器，離心機，氮吹儀，pH計，超聲波發生器。

1.2 試劑和材料

甲醇，液相色譜純；乙腈，液相色譜純；0.2 mol/L乙酸銨緩沖溶液，15.47 g乙酸銨溶解于1 L水中，用適量乙酸調節pH至5.2；甲酸水溶液，2%；氨水甲醇溶液，5%；高氯酸，分析純；乙酸乙酯；飽和氫氧化鈉溶液；MCX陽離子交換柱（60 mg/3 mL，使用前依次用3 mL甲醇和3 mL水活化）；鹽酸克倫特羅標準儲備液（100 μg/mL）；同位素內標物，鹽酸克倫特羅-D9；同位素內標儲備液，用甲醇配制成100 μg/mL的標準貯備液；同位素內標工作液，將上述同位素內標儲備液用甲醇進行適當稀釋。

1.3 色譜條件

色譜柱：Agilent SB-C18（2.1 mm×50 mm，1.8 μm），流速0.3 mL/min，進樣量5 μL；柱溫為30 ℃。流動相：A=水；B=乙腈。梯度淋洗，見表1。

表1 梯度淋洗表

1.4 質譜條件

干燥器流速，12 L/min；霧化氣，22.68 kg；脫溶劑氣溫度，350 ℃；電離方式，ESI+；碰撞氣，高純氮氣；其他質譜參數，見表2。

表2 鹽酸克倫特羅主要參考質譜參數表

1.5 樣品制備

1.5.1 樣品提取

稱取2 g左右豬肉樣品于50 mL離心管中，加50 μL 400 μg/L的內標工作液和10 mL乙酸銨緩沖溶液于待測樣品中，加蓋用旋渦混合器混勻，超聲20 min，離心8 min（10 000 r/min）。倒出所有上清液于另一個50 mL離心管中，加460 μL高氯酸，漩渦混勻后放置10 min，加入飽和氫氧化鈉調節pH在9.5左右，加15 mL乙酸乙酯，漩渦混勻后離心5 min（6 000 r/min）。

轉移全部有機相，在50 ℃水浴下用氮氣將其吹干。加2%甲酸水溶液，旋渦混合均勻，使殘渣充分溶解后備用。

1.5.2 樣品凈化

將陽離子交換柱連接到真空過柱裝置。將上述殘渣溶液上柱，依次用3 mL 2%甲酸水溶液、3 mL甲醇洗滌柱子并徹底抽干。最后用4 mL 5%氨水甲醇溶液洗脫柱子上的待測成分。洗脫液在50 ℃水浴下氮氣吹干。

準確加入2 mL 10%乙腈水溶液，旋渦混勻，過濾膜供液相色譜-串聯質譜測定。

2 結果與討論

2.1 實驗條件的優化

流動相比例對峰形有顯著影響。在這個實驗中，選擇用水和乙腈作為流動相，并選擇梯度淋洗，當水與乙腈的比為95∶5時出峰不穩定且峰形不好，當選擇這個實驗中的梯度淋洗后，出峰時間穩定，且避免了雜質峰的干擾。在最佳色譜條件下，標準品的色譜圖、質譜圖分別如圖1、2所示。

圖1 標準品色譜圖

圖2 標準品質譜圖

溶劑的選擇對峰形的影響也比較顯著。當選擇甲醇或乙腈作為溶劑時，峰形雜亂、響應值低，甚至在低濃度時不出峰。在這個實驗中，選擇10%乙腈水溶液作為溶劑，峰形穩定且靈敏度高。

2.2 液相色譜-串聯質譜法測鹽酸克倫特羅分析性能

在這個實驗中，鹽酸克倫特羅的信號強度隨著濃度的增大而增大，如圖3（a）所示。以鹽酸克倫特羅的含量和組分色譜峰面積作標準曲線，從圖3（b）可以看出，鹽酸克倫特羅的色譜峰面積跟其濃度的大小成正比例關系。在1～20 ng/mL，色譜峰面積（y）與鹽酸克倫特羅濃度（x）呈線性關系，檢出限為0.33 ng/mL（信噪比為3）。線性回歸方程y=1.114x-0.012，相關系數為0.999 5。由此可見，液相色譜-串聯質譜法檢測鹽酸克倫特羅具有良好的分析性能。

圖3 （a） 不同濃度的鹽酸克倫特羅色譜圖

圖3 鹽酸克倫特羅分析性能圖

3 結論

本實驗中，采用高效液相色譜-串聯質譜法測定豬肉中的鹽酸克倫特羅，檢測限為0.33 ng/mL。該方法靈敏度高、選擇性好。