超高效液相色譜-串聯質譜法測定水產品中氟甲砜霉素殘留量的不確定度

◎ 吳正雙，王光新，林顯活

（1.佛山市質量計量監督檢測中心，廣東 佛山 528225；2.國家知識產權局專利局專利審查協作江蘇中心，江蘇 蘇州 215163）

不確定度是與測量結果相關的參數，用來表示被測量值的分散性，其數值大小反映了結果的準確性，與結果的判定相關，一切測量都不可避免地具有不確定度[1-3]。

氟甲砜霉素是一種廣譜類抗生素。農業部235號公告規定，氟甲砜霉素（又叫氟苯尼考）在各種動物源性食品中的殘留限量為200～3000 μg/kg[5]。近年來，水產品中氟甲砜霉素在國家及地方監督抽檢中的檢出率有上升趨勢[6]，為保證檢測結果的準確性和科學性，有必要對測定結果進行不確定度的評定，同時為測定其他獸藥殘留量的不確定評定提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

標準物質：氟甲砜霉素、氘代氯霉素（D5-氯霉素），德國Dr.Ehrenstorfer公司。

Quattro Premier XE超高效液相色譜-三重四級桿串聯質譜儀（UPLC-MS/MS）：美國Waters公司；旋轉蒸發儀：上海振捷實驗設備有限公司；HU-20500 D超聲波清洗器：天津恒澳科技發展有限公司。

1.2 樣品前處理方法

樣品前處理參照GB/T 20756-2006《可食動物肌肉、肝臟和水產品中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考殘留量的測定 液相色譜-串聯質譜法》進行，內標法定量。

2 結果與分析

2.1 數學模型

根據GB/T 20756-2006的測定方法，建立樣品中待測物含量的數學模型如下：

其中，X：樣品中氟甲砜霉素的含量，μg/kg；R：由標準曲線求得的樣品溶液中待測物濃度與D5-氯霉素內標濃度比；Cis：樣品溶液中D5-氯霉素內標的濃度，ng/mL；V：樣品最終定容體積，mL；m：樣品質量，g。

2.2 不確定度來源分析

本方法的不確定主要來源有：①樣品稱量不確定度。②樣液定容體積不確定度。③標準溶液配制及稀釋時引入的不確定度。④標準曲線擬合引入的不確定度。⑤樣品重復測定引入的不確定度。⑥同位素內標引入的不確定度[2-4]。

2.3 相對標準不確定度分量的評定

2.3.1 樣品稱量不確定度[5]

稱取樣品5.2581 g，天平的精度為0.0001 g，根據天平計量證書查的其最大允差為±0.05 g，取矩形分布（又叫均勻分布），k=則不確定度u(m)=0.05/=0.0289 g；相對標準不確定度ur(m)=0.0289/5.2581=0.0055。

2.3.2 樣液定容體積不確定度

樣品經萃取、凈化后用1.0 mL單標刻度的移液管定容至1.0 mL。根據校準規程標準JJG 196-2006《常用玻璃量器檢定規程》給出的1 mL單標刻度移液管（A級）的容量允差為±0.007 mL，取矩形分布，則定容體積引入的相對不確定度為：

2.3.3 標準溶液配制及稀釋引入的不確定度

（1）由標準物質證書可知：氟甲砜霉素標準品純度ps=99.0%，最大允差為0.5%，取矩形分布，則標準物質純度引入的相對標準不確定度為：

（2）標準物質稱量。氟甲砜霉素的稱樣量ms=10.12 mg，使用的天平精密度為0.01 mg，允差為±0.1 mg，取矩形分布，則引入的相對標準不確定度為：

（3）標準溶液配制與稀釋過程的體積引入的不確定度。定容和稀釋產生的不確定度包括容量瓶和移液器引入的不確定度。①10 mL、50 mL容量瓶體積。根據校準規程JJG 196-2006《常用玻璃量器檢定規程》，20 ℃時10 mL、50 mL容量瓶（A級）的容量允差分別為±0.02 mL、±0.05 mL，取三角分布，則標準不確定度分別為u=0.02/=0.00816 mL、u=0.05/=0.0204 mL。②1 mL可調移液器的體積引入的不確定度。根據校準規程JJG 646-2006《移液器檢定規程》，1 mL可調移液器移液點體積Vi、各移液點體積的容量允差Ui、分布類型及不確定度計算見表1。計算公式為：

表11 mL可調移液器移液點體積校準的不確定度表

標準溶液配制和稀釋過程中體積引入的標準溶液的相對不確定度合成為：

氟甲砜霉素標準溶液濃度cs，引入的相對標準不確定度合成后為0.0139，計算公式為：

2.3.4 D5-氯霉素同位素內標引入的相對標準不確定度

D5-氯霉素內標純度為99.7%，其純度、稱量、定容和稀釋以及在樣品中的加入量等因素引入的相對標準不確定度分析和計算與2.3.1至2.3.3同理，相對標準不確定度分別是0.0029、0.0116、0.0112、0.0036，故d5-氯霉素同位素內標引入的相對標準不確定度：

2.3.5 線性回歸方程引入的不確定度

選取待測物與同位素內標濃度之比（x）為橫坐標，待測物與同位素內標峰面積之比（y）為縱坐標進行擬合，設置5個梯度的校準工作溶液，每個標準溶液濃度平行測定2次，線性回歸方程和相關系數等數據見表2。

表2 線性回歸方程測定結果和不確定計算表

2.3.6 樣品重復測量引入的不確定度

2.4 相對標準不確定度的合成與擴展

2.4.1 相對標準不確定度的合成

上述各項不確定度分量相互獨立，不考慮其相關性，氟甲砜霉素相對標準不確定度的合成結果u(w)=0.156 μg/kg，計算公式為：

u(w)=w×ur(w)，w=5.20 μg/kg

2.4.2 標準不確定度的擴展及結果表示

根據JJF 1135-2005，取包含因子k=2，置信概率p=95%，氟甲砜霉素的擴展不確定度：

U(w)=k×u(w)=0.313 μg/kg

故本實驗檢測結果可表示為：（5.20±0.312）μg/kg。

3 結論

本實驗通過對天平、容量瓶、移液器、樣品前處理、重復測定和標準曲線擬合等因素進行分析和評定[6-8]。結果表明，標準溶液配制所產生的不確定度最大，其次是樣品測量重復性和標準曲線擬合。因此，在實際操作過程中，可以通過提高實驗人員的經驗水平和熟練程度、增加平行樣品測定次數來減小測量不確定度，從而保證檢測結果的準確性。