新發2型糖尿病合并肥胖患者血清鋅α2蛋白水平與胰島素抵抗的相關性分析

王銘婕 閆朝麗

[摘要] 目的 分析2型糖尿病（TD2M）患者血清鋅α2蛋白（ZAG）水平與胰島素抵抗（IR）的相關性，探索ZAG成為代謝綜合征（MS）或肥胖血清指標的可能性。方法 選擇單純肥胖與新發TD2M合并肥胖患者為研究對象，通過雙向凝膠電泳（2-DE）、質譜分析、實驗室檢查等方式，分析血清ZAG水平與胰島素抵抗及脂糖代謝的相關性。結果 與對照組相比，觀察組ZAG上調；觀察組患者ZAG水平與胰島素抵抗指數（HOMA-IR）、糖化血紅蛋白（HbA1c）、甘油三酯（TG）呈正相關（P<0.05），與高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）呈負相關（P<0.05）；在觀察組中，HDL-C是血清ZAG水平的獨立危險因素（P<0.05）。結論 ZAG為單純肥胖者與新發TD2M合并肥胖者的差異表達蛋白，ZAG與新發TD2M合并肥胖者IR關系密切，是人體脂代謝的重要調節因子。

[關鍵詞] 2型糖尿病；血清鋅α2蛋白；胰島素抵抗；相關性

[中圖分類號] R587.1 [文獻標識碼] A [文章編號] 1672-4062（2018）03（a）-0055-02

糖尿病（DM）是臨床常見的慢性疾病，以高血糖水平為主要標志，若未能及時得到治療，可引起全身多器官損害[1]。隨著人們物質條件的提高，肥胖癥成為現代社會常見的慢性代謝性疾病，常伴有局部體脂沉淀過多的癥狀（單純肥胖脂肪分布均勻，無代謝分泌紊亂現象）。肥胖可導致胰島素抵抗（IR）與胰高血糖癥已被證實，但與DM之間的具體機制尚不明確。研究發現[2-3]，肥胖、IR、DM患者與健康人群之間存在諸多差異蛋白，這些蛋白可能在疾病的發生發展中扮演重要角色。鋅α2蛋白（ZAG）是成熟脂肪細胞分泌的一種脂肪因子，具有強烈的促脂肪分解作用，對人體脂糖代謝具有明顯的影響。該次研究比較了不同人群血清ZAG水平差異，探索ZAG成為代謝綜合征（MS）或肥胖血清指標的可能性，以及2型糖尿病（TD2M）合并肥胖患者血清ZAG水平與IR的相關性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選則10例內蒙古醫科大學內分泌科接收的門診或住院的新發TD2M合并肥胖者，納入觀察組。患者均符合《中國2型糖尿病防治指南（2013年版）》中提出的相關診斷標準[4]，身體質量指數（BMI）≥25 kg/m2。排除半年內有糖尿病癥狀且經治療的患者；合并肝腎功能異常、腫瘤、感染或其他嚴重系統性疾病及基線資料缺失者。

另外，選擇該院健康體檢中心選取年齡、性別、體重等基線資料相匹配的健康志愿者10例（單純肥胖，BMI≥25 kg/m2）作為對照組。該次研究經研究對象知情并簽署同意書。

1.2 蛋白質組學研究方法

1.2.1 實驗器材 儀器設備：臺式高速冷凍離心機（湘儀TGL-20M）、臺式高速離心機（湘儀TG16-WS）、等電聚焦儀（IEF 100）、雙向垂直電泳儀（Hoefer SE900）、快速掃描儀（愛普生 V10）、紫外可見分光光度計（α100）、納升液相色譜-四級桿-（micrOTOF-Q ⅡTM）。試劑盒：白蛋白/IgG去除試劑盒、IPG膠條（13 cm，PH3-10）。

1.2.2 樣本制備 所有受檢者禁食10 h后，于次日清晨進行統一血樣采集，取空腹肘靜脈血2～3 mL，離心10 min（3 000 r/min）后取上清液分裝，存放于-70℃冰箱內保存。實驗前將每組10例按等體積混勻。取樣本10 μL，利用除高豐度試劑盒去除多數高豐度白蛋白及IgG后，再利用三氯乙酸/丙酮進行除鹽。

1.2.3 雙向凝膠電泳（2-DE） 第一向電泳：將樣品與尿素、硫脲、CHAPS、溴酚藍、DTT、Bio-Lyte、超純水混合均勻后加至水化槽，然后放入預制IPG膠條（17 cm，PH3-10），對好正負極后蓋上蓋子，設置等電聚焦參數。第二向電泳：使用12%的SDS-PAGE膠，開始使用較低電流，待樣品走出IPG膠條，凝聚成線后后采用較高電流，當凝膠底部邊緣顯示酚藍指示劑時即為完成電泳。

1.2.4 凝膠掃描與圖像采集 快速掃描制備好的凝膠，將掃描好的圖像用PDQuest7.1.1 2-DU膠分析軟件結合肉眼觀察進行分析，確定蛋白差異點，切取差異點所在凝膠，放入EP管中。

1.2.5 質譜分析 將2-DE挑選出的差異蛋白經ESI-Q-TOF-LC/MS質譜分析，鑒定蛋白點。向每個樣品管中加水，進行洗膠、然后行銀染脫色、酶解；將酶解液點入上樣孔，設置參數，獲取質譜分析結果。

1.2.6 實驗室指標檢測 采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附法檢測兩組患者血清ZAG水平；采用全自動生化分析儀檢測血常規、總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）水平；糖化血紅蛋白（HbA1c）采用糖化血紅蛋白分析儀進行檢測；化學發光免疫法檢測受檢者空腹胰島素（Fins）水平；胰島素抵抗指數（HOMA-IR）采用HOMA穩態模型進行計算：HOMA-IR=Fins×FPG/22.5。操作嚴格按照說明書進行。

1.3 觀察指標

觀察兩組患者ZAG的2-DE結果與質譜分析結果，分析觀察組患者ZAG與TC、TG、HDL-C、LDL-C、HbA1c水平及HOMA-IR指數相關性。

1.4 統計方法

此次研究均由SPSS 17.0統計學軟件處理分析數據資料，計量資料用均數±標準差表示，采用t檢驗；血清ZAG水平與各項實驗室指標的相關性分析采用偏相關分析，以血清ZAG水平為因變量，各項實驗室指標為自變量進行多元線性回歸分析。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 ZAG在不同人群中表達差異

通過2-DE 技術，明確了ZAG為對照組（單純肥胖）與觀察組（新發TD2M合并肥胖）患者的差異蛋白點。與對照組相比，觀察組ZAG上調，見表1。

2.2 空腹ZAG水平與實驗室指標的相關性分析

偏相關分析結果顯示，觀察組患者ZAG水平與HOMA-IR、HbA1c、TG正相關（rZAGvsHOMA-IRc=0.55、rZAGvsHbA1c=0.39、rZAGvsTG=0.43，P<0.05），與HDL-C負相關（rZAGvsHDL-C=-0.45）。以血清ZAG水平為因變量，各項實驗室指標為自變量進行多元線性回歸分析，結果顯示，在觀察組中，HDL-C是血清ZAG水平的獨立危險因素（β=-0.38，P<0.05）。

3 討論

ZAG是一種能在血清中分離得到的可溶性糖蛋白，是成熟脂肪細胞分泌的一種脂肪因子，從屬MHC-Ⅰ家族。近年來研究表明[5-6]，ZAG在機體脂代謝中具有重要地位，有明顯的分解脂肪的作用，其機制可能是通過激活β3腎上腺素受體，提高脂肪細胞內環磷酸腺苷水平所致。目前研究已證明瘦素、脂聯素等脂肪因子與IR關系密切，而ZAG可通過分泌影響瘦素、脂聯素等其他脂肪因子的表達，故而與IR存在一定關系[7]。目前研究關于血清ZAG水平與IR指標之間關系的研究結果并不一致，該研究就TD2M患者血清ZAG水平與IR的相關性展開研究，以期為深入了解ZAG與IR的關系作出參考。

2-DE實驗結果發現，在單純肥胖人群與T2DM合并肥胖患者群體中，ZAG表達并不相同，說明ZAG與機體體脂狀況關系不大，可能與IR存在一定的相關性。質譜分析結果發現，與對照組相比，觀察組ZAG上調，也驗證了這一點。偏相關分析結果顯示，觀察組患者ZAG水平與HOMA-IR、HbA1c、TG呈正相關（P<0.05），與HDL-C呈負相關（P<0.05）；這與以往文獻報道相符[8]。在TD2M組中，HDL-C是血清ZAG水平的獨立危險因素（P<0.05）；進一步提示ZAG與脂肪組織存在密切關系，是人體脂代謝的重要調節因子。

綜上所述，ZAG為單純肥胖者與新發TD2M合并肥胖者的差異表達蛋白，ZAG與新發TD2M合并肥胖者IR關系密切，是人體脂代謝的重要調節因子，ZAG可能在未來肥胖、TD2M的靶向治療中發揮重要作用。

[參考文獻]

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[5] 李白潔，范志宏.鋅α2糖蛋白與2型糖尿病關系的研究進展[J].中國糖尿病雜志，2016，24（8）：757-759.

[6] Hayward RA， Reaven PD， Wiitala WL. Follow-up of Glycemic Control and Cardiovascular Outcomes in Type 2 Diabetes[J].New England Journal of Medicine，2016，63（1）：279-280.

[7] 宋麗杰，邴艷萍，姜楠，等.血清鋅α2糖蛋白表達水平與2型糖尿病并發高尿酸血癥的關系[J].中國醫師雜志，2017， 19（10）：1534-1537.

[8] 解婧，蔣志華，成興波.2型糖尿病患者血清鋅α2糖蛋白水平的變化及其相關因素分析[J].中國糖尿病雜志，2012，20（2）：102-104.

（收稿日期：2017-12-09）