白細胞分類人工鏡檢與全自動血細胞分析儀檢查結果的比較

（大連大學 門診部，遼寧 大連 116622）

0 引言

對于早期發現和診斷全身性疾病，血常規測定是不可或缺的手段之一，可以反映出骨髓造血系統、血液循環系統和貧血等相關疾病情況[1,2]。作為機體免疫細胞之一的白細胞（White blood cell，WBC），在機體發生炎癥或其他疾病時，其分類計數是血液學檢驗的重要參考項目。報道顯示，WBC分類計數結果的可靠性是臨床疾病診斷和治療的重要依據[3]。傳統的人工顯微鏡鏡檢是常用的WBC分類法，但其操作費時費力、步驟繁瑣，近些年已被全自動血細胞分析儀所取代，后者極大地降低了工作強度，但臨床上對其結果是否準確仍有爭議全自動血細胞分析儀 Sysmex XN-10[B4]融合了激光技術和電阻抗法，把核酸熒光染色和半導體流式激光技術有機結合，進行全血細胞計數和白細胞分類[4,5]，大大減輕了檢驗人員的工作強度，但實際工作中儀器分類干擾因素很多，使結果產生偏差。本文以此為出發點，對我部新生入學體檢標本和大醫三院門診患者血常規標本的兩種結果進行比較，現匯報如下。

1 材料與方法

1.1 一般材料

選取我部2017年9月新生入學體檢血液標本75例用于檢測。另選大醫三院2017年8月至9月門診血常規檢測的患者126例，男性75 例，女性51例，二者比例1.47:1，年齡在12～68歲，平均41.4±4.5歲，選擇其中MO百分率在15%～25%的血液標本43例用于檢測。首診疾病為：急性單核細胞白血病、傳染性單核細胞增多癥、粒細胞減少癥、脾功能亢進、急性胃腸炎、流行性出血熱、貧血待查、急性粒細胞白細胞病和發熱待查等。

1.2 試劑與儀器

EDTA-K2真空抗凝管（德國Greiner Bio-One公司），人工鏡檢染色用瑞氏-姬姆薩染液（BASO珠海），Olympus CX31光學顯微鏡（日本Olympus公司）；Sysmex XN-10[B4]全自動血細胞分析儀（帶原裝配套試劑、校準物和質控品）。

1.3 檢查方法

對照《全國臨床檢驗操作規程》（第4版），以抗凝血制備血涂片，用瑞氏-姬姆薩染色。參照CLSI-H20A2文件，由兩名副主任檢驗師，用雙盲法對展開較好、顏色適中和分散均勻的體尾交接處的白細胞進行分類檢測。取2張血片，每張分類100個白細胞取均值，鏡下注意辨別NE、LY、BA、EO和MO等各種細胞，同時觀察是否存在異常、幼稚細胞和其它非正常細胞。

用EDTA-K2真空抗凝管采集2ml靜脈血（防止溶血、凝集等發生），輕輕顛倒混勻8次后置室溫存放，用Sysmex XN-10[B4]全自動血細胞分析儀進行檢測，全部檢測在2hr內完成。Sysmex XN-10[B4]血細胞分析儀報警內容有：原始細胞、原始淋巴細胞、幼稚細胞、異形淋巴細胞、有核細胞和核左移等[6]。人工顯微鏡復檢標準：2.0×109/L＜WBC＜2.5×109/L、NE＞85%、LY＞65%、BA＞1.5%和EO＞6.5%。

1.4 觀測指標

①新生入學體檢血標本兩種分類方法WBC結果比較。血涂片用人工顯微鏡分類和Sysmex XN-10[B4]血細胞分析儀分類。

②門診血常規MO為15%～25%的血標本兩種分類方法WBC結果比較。對MO百分率在15%～25%的血液標本43例進行人工鏡檢分類和血細胞分析儀分類，把二者WBC分類結果進行比較。

③人工鏡檢結果和儀器報警提示的比較。計算公式：靈敏度=真陽性/真陽性+假陰性，特異度=真陰性/真陰性+假陽性；假陰性率=1-靈敏度，假陽性率=1-特異度。按儀器報警內容進行人工顯微鏡復檢，得出儀器檢測的陰性率、陽性率和特異度、靈敏度[7,8]。

1.5 質量控制

Sysmex公司提供的高、中和低值e-Check配套質控品進行室內質控，原裝配套試劑。同時參加大連市臨床檢驗中心室間質控，均取得較好的成績，從而確保了本次研究結果的準確性和可靠性。

1.6 統計學處理

統計學分析用SPSS17.0軟件進行。正態分布的計量資料用X±S表示，非正態分布的資料用秩和檢驗，頻數比較用X2檢驗，組間比較用t檢驗，用單因素方差進行多組間均數比較，P＜0.05被認為有顯著性差異。

2 結果

2.1 新生入學體檢標本人工鏡檢與儀器法WBC分類的比較

新生入學體檢標本人工鏡檢與儀器法檢測的中性粒細胞、淋巴細胞和單核細胞的百分率比較，均無顯著性差異（P＞0.05）；嗜酸粒細胞、嗜堿粒細胞兩組比較，有顯著性差異（P＜0.05）（表1）。

表1 75例新生入學體檢標本人工鏡檢與儀器法WBC分類的比較

2.2 門診患者MO為15%～25%的標本人工鏡檢與儀器法WBC分類的比較

門診血常規檢查的患者126例中單核細胞占15%～25%的標本43例，用人工鏡檢和儀器法檢測的中性粒細胞、單核細胞和嗜酸粒細胞的百分率比較，均無顯著性差異（P＞0.05）；儀器法檢測的淋巴細胞和嗜堿粒細胞百分率高于人工鏡檢法，二者比較有顯著性差異（P＜0.05）（表2）。

表2 43例門診血常規MO為15%～25%的標本人工鏡檢與儀器法WBC分類的比較

2.3 人工鏡檢結果與儀器報警的比較

以人工鏡檢法作為白細胞分類的金標準，對126例門診患者的血常規結果進行比較。結果顯示：Sysmex XN-10[B4]測定的結果報警53例，經人工顯微鏡復查確定真陰性為64例、真陽性為41例。計算得出：儀器白細胞分類計數的特異度為78.95%，假陽性率為21.05%，靈敏度為82.36%，假陰性率為17.64%（表3）。

表3 人工鏡檢結果與儀器報警的比較（例數）

3 討論

據報道，全自動血細胞分析儀目前可以完成每小時150例標本的檢測[9]。這一速度對提高檢驗結果的準確性和疾病的診斷效率、為患者爭取黃金治療時間意義重大，成為各醫療機構檢驗科必備的檢測儀器。Sysmex全自動血細胞分析儀XN-10[B4]，融合了半導體激光、電阻抗和流式細胞等技術。光源采用半導體激光，具有消耗功率小、啟動快和壽命長的特點。白細胞計數采用先進的核酸熒光染色和流式激光原理，使白細胞計數不受巨大血小板、血小板簇、難溶紅細胞和細胞碎片的干擾。在檢測低值白細胞樣本時，儀器可自動或人工轉換至低值白細胞模式，使白細胞檢測顆粒數比普通檢測模式增加3～5倍，使檢測結果更加準確。這一設備還可以對胸腹水、腦脊液和關節腔積液等體液進行白細胞和紅細胞計數。白細胞分類采用的是激光光源、流式原理和細胞核酸熒光染色技術。這些先進技術的運用，在很大程度上降低了檢驗人員的工作強度。然而，日常工作中尤其在標本量大的新生體檢時，對于異常標本，完全依靠儀器檢測而忽視白細胞的人工顯微鏡鏡檢，會引起疾病的漏診和誤診。這是因為，血細胞分析儀在進行白細胞分類計數和全血細胞分析時，在原始細胞、幼稚細胞、單核細胞、巨大血小板、有核紅細胞和異型淋巴細胞等的形態分辨方面存在缺陷，從而無法對它們進行準確的分類，導致結果的假陰性或假陽性，造成鏡檢結果與儀器結果的差別大，相關性低。

本研究顯示，75例新生入學體檢標本人工鏡檢分類和儀器分類測得的NE、LY和MO的百分率，均無顯著性差異，而BA和EO的百分率有顯著性差異，這可能是由于BA在大多數標本中所占百分比較低，對分類的結果影響有限造成的。說明在新生體檢工作中，白細胞分類的人工鏡檢和XN-10[B4]檢查的結果同樣準確可靠。對門診血常規檢查的患者126例中單核細胞占15%～25%的標本43例，分別進行人工鏡檢分類和儀器分類，測得NE、MO和EO的百分率比較，均無顯著性差異（P＞0.05），但是儀器法測得LY和BA的百分率卻高于人工鏡檢法（P＜0.05）。上述結果形成的原因是：MO百分率為15%～25%多見于粒細胞缺乏癥恢復期、多發性骨髓瘤和傳染性單核細胞增多癥等疾病，這類患者標本中的原始、幼稚和異常細胞在溶血素的作用下，其細胞漿顆粒大小、染色質疏松程度和細胞體積等特征均與單核細胞相似，儀器測定時會把這樣特點的細胞誤認作淋巴細胞[10]。同時，一些特殊疾病如活動性肺結核和急性感染恢復期、長期服用藥物等，其細胞表面電荷發生改變，這樣的細胞與正常血液標本的細胞相比體積會增大，也是造成上述結果的原因。有報道顯示，造成假陰性的細胞常為嗜酸和嗜堿性粒細胞[11,12]。導致假陽性的細胞常有：幼稚白細胞和異型淋巴細胞等。通過與人工鏡檢分類法比較，得出Sysmex XN-10[B4]白細胞分類計數特異度為78.95%，假陽性率為21.05%，靈敏度為82.36%，假陰性率為17.64%。

綜上，用Sysmex全自動血細胞分析儀XN-10[B4]進行白細胞分類測定時，對儀器報警結果應重新采集標本進行復檢，尤其對血液病患者和WBC總數異常者，更要進行人工顯微鏡復檢。而人工鏡檢是血細胞形態學檢查的金標準，只有把人工鏡檢和儀器測定相結合，才能為臨床診斷提供準確的檢驗結果。