黑菊芋經(jīng)口急性毒性試驗研究

姬妍茹，劉宇峰，楊慶麗，高 宇，孫宇峰，魏連會

（黑龍江省科學院大慶分院，黑龍江大慶 163319）

黑菊芋是以新鮮菊芋為原料，依據(jù)美拉德反應原理，利用獨特的齒變式加熱工藝加工而成的新型保健食品。鮮菊芋富含菊糖、氨基酸、維生素、膳食纖維和硒等營養(yǎng)成分，其中最為重要的功能性成分是菊糖，占菊芋干質(zhì)量的70%以上，具有降血脂、雙向調(diào)控血糖、改善腸道、防治便秘、促進礦物質(zhì)吸收、防肥胖、抗腫瘤和提高免疫力等功能[1]。中醫(yī)以菊芋塊莖和莖葉入藥，用于治療熱病、腸熱下血、跌打骨傷。據(jù)報道，菊芋還有通便、利膽、利尿、健胃、滋補的功能，在民間被用來治療糖尿病和風濕病[2]。鮮菊芋加工成黑菊芋后，顏色由白色或紅色變?yōu)榱梁谏?，而且營養(yǎng)物質(zhì)和揮發(fā)性成分的種類和比例都有所改變。例如，黑菊芋中的總糖略降低、還原糖升高、5-羥甲其糠醛和總多酚的含量均有所升高[3]，未檢測到酸類、酚類和胺類3種揮發(fā)性成分存在，而且產(chǎn)生L-抗壞血酸二棕櫚酸酯等新的揮發(fā)性物質(zhì)[4]。試驗以黑菊芋為受試材料進行小鼠經(jīng)口急性毒性試驗，初步評價其食用安全性，為黑菊芋新產(chǎn)品的推廣提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

受試樣品，黑菊芋，黑龍江省科學院大慶分院制備，為黑色質(zhì)軟塊狀物，無特殊氣味，試驗前將其研磨后加蒸餾水制成適當濃度的混懸液，于4℃冰箱中保存。

受試動物，SPF級昆明種小白鼠60只，雌雄各半，體重18～22 g，哈爾濱醫(yī)科大學實驗動物學部提供，動物合格證號SCXK（黑）2013-001。

試驗條件，小鼠飼養(yǎng)于哈爾濱醫(yī)科大學衛(wèi)生檢驗中心實驗室SPF級小鼠實驗室，溫度24±2℃，濕度50%±5%，提供符合要求的基礎飲料和清潔水供動物自由攝食、飲用。

1.2 試驗方法

1.2.1 預試驗

取飼養(yǎng)6 d后的小鼠20只，雌雄各半，試驗前禁食4～6 h，自由飲用清潔水。將雌雄小鼠隨機分為2組，每組5只，處理組和對照組每組為10只小鼠，雌雄各半。精確稱取受試樣品13 250 mg，加蒸餾水充分研磨勻漿后，定容至50 mL成均勻懸液，24 h內(nèi)灌胃3次，每2次之間間隔4 h，3次總劑量達10 000 mg/kg·bw，末次灌胃1～2 h后喂飼料和水。連續(xù)觀察7 d，觀察小鼠的外觀、行為、活動、食欲、大小便顏色、體重變化和死亡情況。給黑菊芋后，連續(xù)觀察7 d，并記錄初始體重和試驗結束時體重。發(fā)現(xiàn)小鼠生命體征良好，無死亡，無法確定黑菊芋的半致死劑量，因此正式試驗采用限量法進行。

1.2.2 最大耐受量試驗

取飼養(yǎng)6 d的昆明小鼠40只，雌雄各半，試驗前禁食4～6 h，自由飲用清潔水。將雌雄小鼠隨機分為2組，每組10只，處理組和對照組每組為20只小鼠，雌雄各半。處理組以預試驗中同樣濃度黑菊芋混懸液給小鼠灌胃，24 h內(nèi)灌胃3次，每2次之間間隔4 h，3次總劑量達20 000 mg/kg·bw，末次灌胃1～2 h后喂飼料和水?？瞻讓φ战M以同樣方法灌胃蒸餾水，連續(xù)觀察14 d，觀察小鼠的外觀、行為、活動、食欲、大小便顏色、體重變化和死亡情況。記錄動物試驗時的初始體重、1周時體重及試驗結束時體重。

1.2.3 數(shù)據(jù)處理

1.2.4 臟器病例解剖檢驗

試驗過程中，如果有小鼠死亡要及時尸檢，觀察其心臟、肝、脾、胃、腎等主要器官有無病變；如發(fā)現(xiàn)有可疑病變時進一步進行病理學檢查；試驗結束，如果沒有小鼠死亡，也要隨機抽取小鼠進行解剖，觀察其心臟、肝、脾、胃、腎等主要器官有無病變，如發(fā)現(xiàn)有可疑病變時進一步進行病理學檢查。

2 結果與分析

2.1 小鼠行為狀況

經(jīng)口灌胃后，黑菊芋組和對照組小鼠在14 d內(nèi)均未出現(xiàn)斷尾、舉尾、震顫、抽搐，皮膚顏色正常，小鼠活動自如，飲食無異常，未有叫聲異常、驚厥、運動失調(diào)、流涎、流淚、流鼻涕、呼吸困難、腹瀉、便秘、腸脹氣等現(xiàn)象發(fā)生，動物皮毛有光澤，未見死亡。

2.2 小鼠體重變化

黑菊芋小鼠經(jīng)口急性毒性預試驗結果見表1。

由表1的原始數(shù)據(jù)進行t測驗分析，雄性處理組與對照組相比，t=4.832 4；雌性處理組與對照組相比，t=3.377 5，查t檢驗值臨界表可知，t（8，0.05）=2.306，說明在α=0.05水平上，處理組小鼠的體重變化與對照組沒有顯著差異。

表1 黑菊芋小鼠經(jīng)口急性毒性預試驗結果

黑菊芋小鼠經(jīng)口急性毒性正式試驗結果見表2。

表2 黑菊芋小鼠經(jīng)口急性毒性正式試驗結果

由表2的原始數(shù)據(jù)進行t測驗分析，雄性處理組與對照組7 d時體重變化相比，t=4.756 3，14 d時t=4.227 4；雌性處理組與對照組7 d時體重變化相比，t=3.982 5，14 d時t=4.001 8；查t檢驗值臨界表可知，t（18，0.01） =2.101，說明在14 d的觀察周期內(nèi)，處理組小鼠的體重變化與對照組在α=0.01水平上無著差異。

2.3 臟器剖檢分析

經(jīng)14 d觀察，黑菊芋組和對照組小鼠沒有死亡，生命體征也未見異常，將飼喂14 d的小鼠解剖后，可見其心臟、肝、脾、腎等主要器官顏色、外觀、大小比例、表面黏膜附著情況均正常，無組織結構腫瘤、結節(jié)、壞死、肥大等病理性變化；胃大小正常，黏膜無出血點，無壞死，胃內(nèi)容物性狀正常。

3 結論

小鼠經(jīng)口灌胃黑菊芋后，14 d觀察期內(nèi)未見任何中毒癥狀，亦無死亡。依據(jù)《食品國家安全標準經(jīng)口急性毒性試驗》附錄G中急性毒性劑量分級表標準及試驗結果可知，受試樣品黑菊芋雌、雄小鼠經(jīng)口LD50均大于20 000 mg/kg·bw，屬于實際無毒。