胃癌組織中HMGB1和RAGE蛋白的表達及與臨床病理參數的關系

耿 穎

(湖南省腦科醫院,湖南 長沙 410007)

胃癌是臨床上的常見疾病，患者預后較差。雖然近年來胃癌的發生率呈一定下降趨勢，但是仍是全世界第4大惡性腫瘤，致死率高居惡性腫瘤第2位[1]。胃癌發生和發展分子機制尚不確切，各學者也試圖尋求胃癌惡性程度、轉移性的預測指標，并試圖尋求治療靶點[2]。高遷移率族蛋白B1(HMGB1)是一種非組蛋白，是高遷移率族的成員，是一種炎性因子，可能參與“炎性鏈”反應來引起腫瘤發生和發展。受體晚期糖基化終末產物受體(RAGE)與腫瘤發生和發展存在較大關系，可以參與腫瘤發生和發展[3]。HMGB1還可以通過與RAGE受體結合，參與腫瘤細胞的發生和生物學行為[4]。本研究旨在分析胃癌組織中HMGB1和RAGE蛋白的表達情況，并觀察其與臨床病理參數的關系，為臨床治療尋求新靶點提供依據。

1 臨床資料

1.1一般資料 選取2013年6月—2016年6月我院收治擬行手術治療的胃癌患者230例，均經手術病理證實為胃癌，均擬行手術治療術前未經任何放療和化療，均自愿參加。排除存在免疫系統疾病者，嚴重損傷者，其他系統惡性腫瘤者。其中男121例，女109例；年齡35～85(63.21±1.52)歲。

1.2方法 取癌組織及癌旁≥7 cm正常組織分別納入研究組和對照組，以4%甲醛固定，石蠟包埋。應用免疫組織化學法檢測2組組織中HMGB1和RAGE蛋白表達水平，進行防脫蠟處理后將片撈出，于60 ℃溫度下烤片30 min，應用二甲苯和乙醇脫蠟，將切片放置于3%H2O2中滅活內源性過氧化物酶，將切片放置于枸緣酸緩沖液中水浴，使其自然冷卻。加入一抗于4 ℃環境中孵育過夜，加入二抗孵育30 min，最后進行蘇木精染色。

1.3結果判斷 應用Olympus光學顯微鏡觀察結果，HMGB1蛋白以細胞核表達為主，RAGE蛋白以細胞質表達為主，呈棕黃色表示陽性信號。陽性由染色強度和陽性細胞所占百分比共同決定，染色強度可以分為無色、淡黃色、棕黃色和棕褐色，分別計為0分，1分，2分和3分；陽性細胞所占百分比≤5%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，≥76%為4分。最后評分為兩者之和。評分≥2分為陽性，≤1分為陰性[5]。

1.4統計學方法 應用SPSS 17.0軟件分析數據。計數資料以%表示，應用經2檢驗;HMGB1和RAGE的相關性應用Spearman相關分析法分析。P<0.05表示有統計學意義。

2 結 果

2.12組HMGB1和RAGE表達比較 研究組HMGB1和RAGE陽性表達率顯著高于對照組(P均<0.05)。見表1。

表1 2組HMGB1和RAGE陽性表達率比較 例(%)

2.2臨床病理參數關系 HMGB1表達與TNM分期、淋巴結轉移有關(P均<0.05)，RAGE表達與淋巴結轉移有關(P<0.05)。見表2和表3。

2.3相關性分析 Spearman相關分析顯示：HMGB1和RAGE表達呈正相關關系(r=0.629，P<0.009)。

3 討 論

HMGB1會于多種惡性腫瘤細胞中過度表達，如鼻咽癌、大腸癌、肝癌、胰腺癌等，且與患者預后存在較大關系[6]。HMGB1會因定位不同而表現出不同的功能，但在多數細胞中，HMGB1定位于細胞核中，是DNA分子伴侶起到穩定細胞核平衡的作用，對基因轉錄和重組均起調節作用，也能修復DNA和維持端粒長度[7]。而在細胞質或線粒體中，HMGB1可以增加自噬作用，對凋亡具有抑制作用，也能調節線粒體的形態、功能。而細胞表面，HMGB1可以促進突觸萌發，促進神經突觸增長[8]。在細胞外液中，HMGB1可以與多種受體相結合，與其他共激活物成為復合物，進而調節炎性、增殖、代謝、凋亡等生理、病理反應。從多種途徑參與腫瘤細胞的發生和發展[9]。因此，HMGB1是現階段腫瘤細胞的研究重點和熱點。且胃癌是屬于多基因疾病，不同基因在腫瘤的發生和發展過程中發揮不同作用，針對HMGB1通路成為腫瘤靶點治療的新熱點[10]。

表2 HMGB1蛋白表達與臨床病理參數關系 例(%)

表3 RAGE蛋白表達與臨床病理參數關系 例(%)

晚期糖基化終末產物(AGEs)是還原糖和蛋白質相結合形成的，可以通過受體實現多種效應，AGEs受體復合物主要有AGE-R1、AGE-R2、AGE-R3，RAGE是清道夫受體，包含CD-36和SCR-Ⅱ，其與糖尿病并發癥存在較大關系，也與炎性反應具有較大相關性[11]，除此之外，還參與腫瘤的發生和發展[12]。有研究證實，HMGB1可以與RAGE相結合，此通路與惡性腫瘤的發生和發展存在相關性[13]。因此，推測HMGB1-RAGE通路和胃癌也存在較大相關性。本研究顯示，研究組HMGB1和RAGE陽性表達率均明顯高于對照組，說明胃癌組織中會出現HMGB1和RAGE高表達，HMGB1和RAGE高表達與胃癌有關，其原因為HMGB1可以通過不同途徑發揮不同作用，其與惡性腫瘤的發生和發展均存在較大關系，HMGB1也可以與RAGE相結合，通過HMGB1-RAGE通路，促進腫瘤細胞的生長和增殖，抑制腫瘤細胞凋亡[14]，因此，胃癌組織中會出現HMGB1和RAGE高表達。研究還顯示，HMGB1表達與TNM分期、淋巴結轉移有關，RAGE表達與淋巴結轉移有關，說明HMGB1和RAGE會促進胃癌發展，均參與淋巴結轉移，分析其原因為HMGB1可以調節腫瘤細胞的生長與增殖，對腫瘤細胞的浸潤和侵襲存在較大影響，而TNM分期與腫瘤細胞浸潤、侵襲存在較大關系，因此HMGB1與TNM分期有關，HMGB1可以與RAGE相結合，促進腫瘤細胞增殖，腫瘤細胞過度增殖容易發生淋巴結轉移[15]，因此，HMGB1和RAGE均與淋巴結轉移有關。本研究還顯示，HMGB1和RAGE表達呈正相關關系，說明HMGB1和RAGE在胃癌發生和發展中起協同作用，推測HMGB1-RAGE軸在腫瘤的發生和發展過程中發揮重要作用，且兩者之間具有相互協調、相互促進的作用。因此，臨床上可以通過阻斷HMGB1-RAGE通路來起到阻斷腫瘤發生與發展的作用。

綜上所述，胃癌組織中會出現HMGB1和RAGE高表達，且HMGB1和RAGE高表達與胃癌的浸潤和轉移存在關系，兩者之間也存在正相關關系。臨床上可以通過阻斷HMGB1-RAGE通路來起到治療腫瘤的作用。