Th17細胞表面CCR4、CCR6、CXCR3表達量檢測對慢性乙型肝炎患者病情評估的價值分析

徐開菊 周巧靈 楊仁國（通訊作者）

（四川省人民醫院 四川 成都 610072）

臨床上，慢性乙型肝炎十分常見，屬于慢性傳染性疾病的一種，主要治療方式為抗病毒治療[1-2]。慢性乙型肝炎防治指南（2015年版）中提示，若僅采用抗病毒療法對患者進行治療，便難以獲得明顯的治療效果，會導致多數患者病情遷延，最終發展成為肝硬化[3]。據最新研究可知，慢性乙型肝炎患者肝組織和外周血中的Th17（輔助性T細胞）表達水平會顯著升高，可以將其作為治療慢性乙型肝炎的的一個新靶點[4]。本研究對Th17細胞表面的CXCR3（CXC亞族趨化因子受體3）、CCR6（CC趨化因子受體）、CCR4（CC趨化因子受體）表達量進行檢測，以此來分析其和患者病情之間存在的相關性，報道如下。

1.資料與方法

1.1 臨床資料

于2017年1月—2017年12月在我院接受診治的慢性乙型肝炎患者中選取88例，歸為觀察組，從未接受過抗病毒治療，患者平均年齡（36.28±8.29）歲，男性50例，女性38例；病情重度、中度、輕度患者分別有18例、30例、40例。再選取同時期我院86例健康體檢者為對照組，平均年齡（37.05±8.16）歲，男性49例，女性37例。對比兩組基礎資料，差異有對比價值存在，P＞0.05。

1.2 檢測方法

Th17細胞表面CCR4、CCR6、CXCR3表達量檢測：抽取所有研究對象5ml清晨空腹靜脈血，在抗凝管中放置，PBMC（外周血單個核細胞）采用Ficoll密度梯度離心法進行分離，采用培養基將無菌PBMC濃度調節到1×106個/ml，并且放入到24孔板中，將阻斷劑、伊屋諾霉素以及刺激劑加入之后，在5%二氧化碳、37℃的條件下對其進行5h培養，CD8、CD4、CD3表面均標記染色固定，在室溫下保持20min靜置，注意避光，細胞洗滌之后，Thl7細胞表面趨化因子受體CXCR3、CCR6、CCR4表達百分率、CD8+Thl7、CD4+Thl7細胞細胞占總淋巴細胞百分率均采用流式細胞儀進行檢測。

肝功能指標檢測：抽取患者2ml清晨空腹靜脈血，對其進行離心處理，Glo（球蛋白）、Alb（白蛋白）、TBIL（總膽紅素）、ALT（丙氨酸轉氨酶）等肝功能指標均采用大型自動生化儀進行檢測。

血清纖維化指標檢測：抽取患者2ml清晨空腹靜脈血，室溫下放置之后對其進行15min離心處理，速度控制為2000r/min，PCⅢ（人Ⅲ型前膠原）、IVc（Ⅳ型膠原）、LN（層黏連蛋白）、HA（透明質酸）等纖維化指標均采用ELISA（酶聯免疫吸附）法測定。

1.3 統計學分析

經SPSS20.0統計學軟件統計，計量資料采用t檢驗，計數資料行χ2檢驗，P＜0.05時說明差異明顯。

2.結果

2.1 各組Th17細胞表面CXCR3、CCR6、CCR4表達量對比

經檢驗，慢性乙型肝炎患者外周血Th17細胞表面CXCR3、CCR6、CCR4表達量均高于對照組，差異顯著，P＜0.05；慢性乙型肝炎患者病情越嚴重，外周血Th17細胞表面CXCR3、CCR6、CCR4表達量越高，差異明顯，見表1。

表1 各組Th17細胞表面CXCR3、CCR6、CCR4表達量對比（±s，%）

表1 各組Th17細胞表面CXCR3、CCR6、CCR4表達量對比（±s，%）

CD4+Thl7 CXCR3 CCR6 CCR4 CXCR3 CCR6 CCR4對照組（n=86） 31.29±5.72 3.45±0.52 7.12±0.88 21.28±3.58 4.10±0.55 5.28±0.67重度（n=18） 63.28±7.37 10.29±1.53 18.40±2.35 52.37±6.08 19.27±2.52 26.48±3.28中度（n=30） 58.30±7.11 7.10±0.82 13.28±1.42 35.47±4.61 11.26±1.73 15.33±1.90輕度（n=40） 40.23±5.31 5.12±0.58 9.27±0.84 28.37±3.45 6.48±0.75 9.75±0.82 F 9.298 8.390 7.726 10.385 8.265 9.340 P 0.012 0.0013 0.025 0.013 0.020 0.014組別 CD8+Thl7

2.2 各組肝功能對比

經檢驗，慢性乙型肝炎患者Alb、TBIL、ALT均高于對照組，Glo低于對照組，差異顯著，P＜0.05；慢性乙型肝炎患者病情越嚴重，Glo水平越低，Alb、TBIL、ALT水平越高，差異明顯，見表2。

表2 各組肝功能指標對比（±s）

表2 各組肝功能指標對比（±s）

組別 Glo（g/L）Alb（g/L）TBIL（μmol/L）ALT（IU/L）對照組（n=86） 35.22±4.93 6.48±0.84 19.28±3.27 15.96±2.07重度（n=18） 3.40±0.91 54.29±7.10 118.47±15.46398.56±49.62中度（n=30） 18.22±2.10 32.49±4.36 83.27±9.41 109.65±18.96輕度（n=40） 25.37±3.47 13.28±1.74 41.29±5.32 49.26±6.15 F 8.326 7.368 9.370 13.625 P 0.015 0.018 0.012 0.010

2.3 各組血清纖維化指標對比

經檢驗，慢性乙型肝炎患者PCⅢ、IVc、LN、HA均高于對照組，差異顯著，P＜0.05；慢性乙型肝炎患者病情越嚴重，PCⅢ、IVc、LN、HA水平越高，差異明顯，見表3。

表3 各組血清纖維化指標對比（±s，ng/ml）

表3 各組血清纖維化指標對比（±s，ng/ml）

組別 PCⅢ IVc LN HA對照組（n=86） 6.19±0.92 15.29±2.65 17.19±3.08 19.29±3.52重度（n=18） 153.69±32.4213.56±30.25183.68±30.42154.89±28.62中度（n=30） 58.36±7.20 76.98±9.56 92.40±12.36 79.56±10.25輕度（n=40） 14.62±2.12 28.56±4.09 31.58±4.82 38.02±5.11 F 9.625 12.658 11.295 9.6258 P 0.013 0.001 0.015 0.012

2.4 Thl7細胞表面趨化因子受體表達量和患者病情之間的相關性分析

相關分析結果顯示，Th17細胞表面CXCR3、CCR6、CCR4表達量和Gl之間存在負相關性，和Alb、TBIL、ALT、PCⅢ、IVc、LN、HA之間存在正相關性，P＜0.05。

3.討論

臨床上，乙肝病毒在肝細胞破壞過程中不發揮作用，屬于非細胞毒性病毒的一種，但是在肝細胞免疫病理損傷中則具有十分重要的作用。肝組織中處于激活狀態的淋巴細胞可以對特定受體分子進行表達，并向靶器官進行遷移，促使炎癥反應與免疫應答出現。研究顯示，慢性乙型肝炎患者肝組織和外周血中的Th17表達水平會呈現顯著升高現象，這可能是受到肝損傷的影響。Thl7細胞產生的三種趨化因子受體包括CXCR3、CCR6、CCR4，受體上G蛋白與趨化因子會在炎癥過程中偶聯，進而導致炎癥細胞活化與遷移，釋放胞內鈣離子，激活蛋白激酶c。為了將慢性乙型肝炎患者中Thl7細胞表面CXCR3、CCR6、CCR4表達情況具體明確，本研究對健康者和不同病情嚴重程度的慢性乙肝患者進行了分析，結果顯示，慢性乙型肝炎患者病情越嚴重，外周血Th17細胞表面CXCR3、CCR6、CCR4表達量越高，可知Thl7細胞表面趨化因子受體的高表達現象確實存在于慢性乙型肝炎患者中，并且趨化因子受體表達量會隨著患者病情加重而增加，提示慢性乙肝病情加重的內在原因為趨化因子受體表達增加。其次，Th17細胞表面CXCR3、CCR6、CCR4表達量和Glo之間存在負相關性，和Alb、TBIL、ALT、PCⅢ、IVc、LN、HA之間存在正相關性，提示Thl7細胞表面趨化因子受體表達量增加會對慢性乙肝患者病情進展產生直接影響，炎癥相關趨化因子增加會進一步提高趨化因子受體表達量，最終形成一種惡性循環。

綜上所述，Th17細胞表面CCR4、CCR6、CXCR3表達量檢測在慢性乙型肝炎患者病情評估的應用價值顯著，可推廣。