有氧運動聯合參附注射液對心肌病心衰大鼠NT—proBNP的影響

胡思遠　李欣春　胡志希　梁昊

〔摘要〕 目的 觀察有氧運動聯合參附注射液對心肌病心衰大鼠N末端腦鈉素前體（NT-proBNP）的影響。方法 50只SD大鼠隨機選取10只作為對照組，其余40只腹腔注射鹽酸多柔比星建立心肌病心衰模型。造模成功后，將造模存活大鼠隨機分為模型組、參附注射液組、有氧運動組、有氧運動聯合參附注射液組，每組9只。以上各組分別用生理鹽水、參附注射液、有氧運動、有氧運動聯合參附注射液干預4周，用Elisa法檢測NT-proBNP指標。結果 成功復制心肌病心衰大鼠模型，有氧運動聯合參附注射液組大鼠死亡率最低。模型組NT-proBNP水平較高，與其他各組比較差異有統計學意義（P<0.05）；參附注射液組與有氧運動組NT-proBNP比較，差異無統計學意義（P>0.05）；有氧運動聯合參附注射液組NT-proBNP水平明顯降低，與參附注射液組、有氧運動組比較差異有統計學意義（P<0.05）。結論 參附注射液、有氧運動均能降低NT-proBNP水平，對心衰有較好療效，且有氧運動聯合參附注射液的效果最佳，提示有氧運動聯合參附注射液治療心衰的方法值得研究和推廣應用。

〔關鍵詞〕 有氧運動；心衰；參附注射液；N末端腦鈉素前體

〔中圖分類號〕R256.2；R285.5 〔文獻標志碼〕A 〔文章編號〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2018.06.007

〔Abstract〕 Objective To observe the effect of aerobic exercise combined with Shenfu injection on N-terminal pro brain natriuretic peptide （NT-proBNP） in rats with cardiomyopathy-induced heart failure. Methods The 50 SD rats were randomly selected 10 rats as the control group， and the others were built for the cardiomyopathy model by intraperitoneal injection of doxorubicin hydrochloride. After the model was successful， the model group was randomly divided into the model group， the Shenfu injection group， the aerobic exercise group and the aerobic exercise combined with the Shenfu injection group， 9 rats in each group. After 4 weeks intervention respectively with saline， Shenfu injection and aerobic exercise， NT-proBNP index was detected by Elisa method. Results Heart failure rats with cardiomyopathy were successfully established， aerobic exercise combined with Shenfu injection group showed the lowest mortality rate. The level of NT-proBNP in model group was higher than other groups， the difference was ststistically significant（P<0.05）. There was no significant difference of NT-proBNP between the Shenfu injection group and the aerobic exercise group （P>0.05）. The level of NT-proBNP in aerobic exercise combined with Shenfu injection group was significantly lower than Shenfu injection group and aerobic exercise group （P<0.05）. Conclusion Shenfu injection and aerobic exercise could reduce the level of NT-proBNP， which has a good effect on heart failure， and aerobic exercise combined with Shenfu injection shows the best efficacy， which is worthy to be clinically popularized.

〔Keywords〕 aerobic exercise； heart failure； Shenfu injection； N-terminal pro brain natriuretic peptide

心力衰竭（heart failure）是各種心臟疾病的終末期，是心臟結構或其他功能性障礙所導致的心室充盈及射血無力的綜合征，可造成心肌收縮受限，體循環異常，血液無法良好地灌注到各組織器官，引起頭暈乏力、心慌心悸、呼吸不暢、血瘀水腫等癥狀。心肌病最終可導致心力衰竭，鑒于心衰的高危性與治療效果不理想，心衰可導致患者生活質量下降、心理負擔與經濟負擔加重，因此如何提高治療效果和生活質量，是心衰臨床要解決的關鍵問題。本課題運用有氧運動聯合參附注射液干預心肌病心衰大鼠模型，觀察N末端腦鈉素前體（NT-proBNP）的變化，從而判斷療效，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 藥品試劑與儀器

參附注射液，10 mL/瓶，批號：140205010，雅安三九藥業有限公司；鹽酸多柔比星，10 mg/支，批號：130704，浙江海正藥業股份有限公司；肝素鈉注射液，2 mL∶12 500 u，批號：1404115，萬邦醫藥股份有限公司；NT-proBNP試劑盒，批號：14052001，上海拜沃生物科技有限公司；水合氯醛，250 g/瓶，批號：20130831，科密歐化學試劑有限公司；5417R小型高速冷凍離心機，德國Eppendorf公司；YJ-E111靜水池，江蘇羽佳塑業有限公司；SonoScape-S2N彩色多普勒超聲診斷儀，深圳開立科技有限公司；超低溫冰箱，美國Thermo公司。

1.2 動物模型建立

雄性SD大鼠50只，6～8周齡，體質量180～240 g，由湖南斯萊克景達實驗動物有限公司購入，SPF級動物實驗室分籠飼養，晝夜比12∶12，室溫20 ℃。根據Migrino Raymond Q的大鼠心衰模型建立方法[1]，參考成忠煌等[2]大鼠心衰模型中的給藥周期與劑量對心肌病心衰大鼠模型進行優化：本實驗將50只SD大鼠采用隨機數字表法分為對照組10只與模型組40只，模型組腹腔注射鹽酸多柔比星注射液，用生理鹽水配制成2 mg/mL液體，按0.75 mL/kg劑量腹腔注射，每周2次，共7周，累積總量21 mg/kg。對照組大鼠以同樣方式注射等容量生理鹽水。

造模結束后，觀察大鼠一般情況與行為體征，發現模型組大鼠出現精神萎靡，食欲不振，活動量減低，毛發枯黃無澤，行走蹣跚，腹部水腫明顯等癥狀[3]，腹水多呈暗紅色或淡黃色。心動彩超檢測發現心衰大鼠左室舒張末內徑（LVDD）和左室舒張末容積（LVDV）減小，左室收縮末內徑（LVSD）增大[4]；眼眶取血檢測發現：心衰大鼠NT-proBNP數值明顯上升（均大于250 pg/mL），顯示造模成功，心肌病心衰大鼠模型成立。

1.3 分組與干預

按隨機數字表法將造模成功的36只心衰大鼠分為模型組、參附注射液組、有氧運動組、有氧運動聯合參附注射液組，每組9只，以上各組分別用生理鹽水、參附注射液，有氧運動、有氧運動聯合參附注射干預4周。參附注射液組、有氧運動聯合參附注射液組（在運動前3 h）腹腔注射參附注射液2 mg/kg，每日1次，共4周；對照組、模型組、有氧運動組大鼠腹腔注射等容量生理鹽水，每日1次，共4周。

1.4 運動方案

采用有氧游泳運動方案[4]，用圓柱形游泳水桶直徑60 cm，高120 cm，水深70 cm，水溫控制在31～36 ℃，每周運動訓練6 d，每天1次，共4周。第1周進行適應性訓練，時間從10 min逐步增加至60 min，從第2周起，每次保持60 min的訓練時間；如大鼠無法完成訓練，出現5 s沒有到水面換氣，則撈出休息5 min后，繼續訓練[5]。

1.5 指標檢測

模型驗證采用眼眶取血收集1.5 mL血液，于低溫離心機3 000 r/min 離心15 min，取上清液于-20 ℃保存待測。最終外周血檢測采用腹主動脈采血的方式進行，采用ELISA法檢測NT-ProBNP濃度，按照試劑盒說明進行操作。

1.6 統計學方法

采用SPSS 22.0統計軟件分析數據，計量資料以“x±s”表示，經正態性檢驗，兩兩比較采用T檢驗，多組間比較采用方差分析，方差不齊時采用秩和檢驗。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組大鼠死亡率統計

在施加影響因素干預過程中，由于鹽酸多柔比星存在一定的毒性，加上腹腔注射，易導致腹腔內肝腎的壞死與腹膜后纖維化，導致大鼠死亡率較高。其中模型組死亡5只，參附注射液組死亡3只，有氧運動組死亡4只，有氧運動聯合參附注射液組死亡1只。見表1。

2.2 各組大鼠血清NT-proBNP比較

模型組NT-proBNP水平較對照組高，差異有統計學意義（P<0.05）；與模型組比較，參附注射液組、有氧運動組、有氧運動聯合參附注射液組NT-proBNP水平下降，差異有統計學意義（P<0.05）；參附注射液組與有氧運動組比較，差異無統計學意義（P>0.05）；與參附注射液組比較，有氧運動聯合參附注射液組血清NT-proBNP水平明顯降低，差異有統計學意義（P<0.05）；與有氧運動組比較，有氧運動聯合參附注射液組血清NT-proBNP水平明顯降低，差異有統計學意義（P<0.05）。見表2。

3 討論

3.1 NT-proBNP在心衰診斷中的應用

N末端腦鈉素前體（NT-proBNP）是一種具有多種生物活性的多肽，有較好的穩定性，是目前心力衰竭診斷和評估的重要生物標志物。2014年《中國心力衰竭診斷和治療指南》[6]中認為NT-proBNP作為急慢性心力衰竭的診斷指標，在診斷心力衰竭分級、評估心力衰竭造模成功與否以及評價心力衰竭治療效果上均有較大的意義。這標志著NT-proBNP是目前診斷心衰的最佳指標之一。目前應用多個指標聯合診斷的研究也越來越多，尤其是利用NT-proBNP與其他相關指標進行聯合檢測。如血清結締組織生長因子（CTGF）和NT-proBNP聯合檢測有著理想的靈敏度和特異性，能有效的提高心衰診斷的準確性[7]。有學者認為聯合運用NT-proBNP、超聲心動圖及血氣分析較單獨使用其中某一指標更能提高急性左心衰診斷的準確性[8]。

本文通過心動彩超聯合NT-proBNP檢測，觀察心衰的發生、發展變化程度及治療干預的效果；而比較各組間NT-proBNP的變化，不僅能驗證模型是否成功，還能觀察各干預因素對模型動物的影響。造模成功后，模型組NT-proBNP明顯升高，特別是有氧運動聯合參附注射液能明顯降低心衰大鼠NT-proBNP，因此，NT-proBNP可能是評價心衰的重要客觀指標。

3.2 有氧運動與藥物聯合應用可能是心衰治療的最佳方式之一

越來越多的研究表明，適宜的運動有益于心力衰竭的康復[9-14]。目前認為適宜的運動訓練對調節和改善心力衰竭患者的神經內分泌系統、增強心臟功能、抑制心室重構、改善離子通道紊亂、提高血液流變性、增強血液纖溶能力等方面有積極意義，運動或許能抑制心力衰竭的發展進程[10]。研究表明，游泳是有氧運動的一種較好的形式，運動訓練可以減緩慢性收縮性心力衰竭的發展進程；能夠抑制慢性心力衰竭患者交感神經系統的激活，影響交感神經的輸出，抑制中樞激活，減緩心臟重構，從而改善心力衰竭的程度，提高生活質量，降低心衰等級[11]。運動訓練也能導致血漿去甲腎上腺素及NT-proBNP下降[12]，可以促進心肌線粒體的合成，而運動后心肌線粒體合成的增加，可能是對心衰后心肌功能下降的代償反應[13]。還有研究指出腿部被動運動可以改善舒張性心衰患者的心臟功能，提高生命質量和運動耐量，改善內皮細胞的功能[14]。運動聯合藥物對心力衰竭的效果可能比單一方式更好，文獻報道抗心衰藥物聯合有氧運動的方式更能改善心功能、提高患者的運動能力、耐力水平及紅細胞分布寬度[15]。如使用通絡補心化瘀湯聯合太極拳和運動康復訓練對心力衰竭患者進行康復治療，發現聯合作用的效果更佳[16]；運用益氣活血復方聯合運動訓練治療心力衰竭，在保護心功能、減輕心室重構方面較單一治療組有顯著效果[17]。美國心臟協會已經承認適宜運動能夠改善心力衰竭[18]。通過運動對心力衰竭的干預研究，有助于探索出一套經濟有效的預防、治療策略或方式。

本文選用參附注射液來源于“參附湯”，出自《圣濟總錄》卷五十九，由人參與附子組成，用于回陽救逆，有溫陽強心利尿之功效，是臨床上治療心力衰竭最常用的中藥注射劑。本研究利用有氧運動聯合參附注射液對心衰大鼠進行干預，實驗結果顯示，有氧運動聯合參附注射液治療比單純的參附注射液、有氧運動治療更能降低NT-proBNP水平，且在大鼠死亡率上，聯合治療組死亡率最低。表明聯合治療方法較單一治療方式的效果好，可能是心衰治療的最佳方式之一，值得研究和推廣應用。

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（本文編輯 李 杰）