刺絡(luò)瀉血療法對(duì)四氯化碳誘導(dǎo)的HF大鼠PCⅢ、CⅣ的影響

張博 趙慧玲 譚麗 魏珂 魏丹蕾 曾蕊

摘要目的：本實(shí)驗(yàn)采用用四氯化碳（CCL4）誘導(dǎo)的SD大鼠HF模型，在大鼠足三里、太沖、陽陵泉這3個(gè)穴位上進(jìn)行刺絡(luò)瀉血治療，觀察該療法對(duì)HF模型大鼠肝臟組織形態(tài)、肝功能AST、ALT及肝纖維化指標(biāo)PCⅢ、CⅣ的影響，從而探索刺血療法對(duì)于HF的療效及其作用機(jī)制。方法：SpragueDawley（SD）大鼠40只，雄性，隨機(jī)分為4組，空白對(duì)照組（10只）、模型對(duì)照組（10只）、秋水仙堿組（10只）以及刺血干預(yù)組（10只）。除空白對(duì)照組外，其余3組用40% CCL4（花生油稀釋）誘導(dǎo)HF模型，為期6周。第6周至第12周，對(duì)空白對(duì)照組的大鼠09%生理鹽水皮下注射，2次/周，至12周；其余3組的大鼠持續(xù)注射40% CCL4（花生油稀釋），模型對(duì)照組的大鼠只抓取，不做其他處理，秋水仙堿組同時(shí)220 μg/（kg·d）標(biāo)準(zhǔn)給予秋水仙堿，5次/周；刺絡(luò)瀉血組同時(shí)進(jìn)行刺絡(luò)瀉血療法干預(yù)，2次/周，至12周。12周后，麻醉大鼠并行開腹術(shù)，取大鼠肝左葉小塊組織行石蠟包埋、切片，以及Masson染色，觀察大鼠肝左葉的組織形態(tài)學(xué)改變；采用ELisa法對(duì)肝纖維化指標(biāo)PCⅢ、CⅣ，采用化學(xué)法對(duì)肝功能指標(biāo)AST、ALT進(jìn)行定量檢測(cè)。結(jié)果：1）肝臟組織形態(tài)改變：對(duì)切片分析后可見生理鹽水對(duì)照組肝小葉結(jié)構(gòu)完整，匯管區(qū)周圍存在少量染色；模型組肝小葉消失，纖維架橋出現(xiàn)，形成肝纖維化；秋水仙堿組和刺血干預(yù)組肝纖維化程度明顯比造模組減輕，但比空白對(duì)照組嚴(yán)重，說明秋水仙堿組和刺血干預(yù)組干預(yù)均有效。2）肝功能情況：比較于模型對(duì)照組，刺血干預(yù)組AST、ALT含量顯著降低（P<005），秋水仙堿組AST含量降低（P>005），而ALT含量顯著降低（P<005）；提示刺血療法可顯著降低血清AST、ALT的含量。3）對(duì)肝纖維化指標(biāo)PCⅢ、CⅣ的影響：比較于模型對(duì)照組，秋水仙堿組和刺血干預(yù)組PCⅢ、CⅣ的含量下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005）提示刺血療法可以顯著降低PCⅢ、CⅣ的含量。

關(guān)鍵詞肝纖維化；刺絡(luò)瀉血；Ⅲ型前膠原；Ⅳ型膠原

Effects of Pricking Blood Therapy on PC III and C IV in HF Rats Induced by Carbon Tetrachloride

Zhang Bo1， Zhao Huiling1， Tan Li2， Wei Ke3， Wei Danlei1， Zeng Rui1

（1 Beijing University of Chinese Medicine， Beijing 100029， China； 2 Guangzhou University of Chinese Medicine， Guangzhou

510405， China； 3 Beijing Fengtai Hospital of Integrated Traditional and Western Medicine， Beijing 100071， China）

AbstractObjective：To observed effect of the pathological change of the liver， liver function and apoptosis factor PCIII and PCIV in HF model rats induced by CCL4， and with the treatment on or near Taichong， Zusanl and Yanglingquan of the rats by pricking blood therapy with a threeedged needle， so as to explore the mechanism of bloodletting in prevention and treatment of HF rats. Methods：Forty male SD rats were randomly divided into normal control group， model group， colchicinescontrolled group and bloodletting group with 10 cases in each group. Except the normal control group， the other three groups were induced into liver fibrosis model with 40% CCL4 diluted by peanut oil. After 6 weeks， the colchicinescontrolled group was given colchicine 200 μg/（kg·d） with 5 times a week； the bloodletting group had 0.150.2 mL hemorrhage on or near Taichong， Zusanl and Yanglingquan with 2 times a week. After 12 weeks， the general conditions of rats were observed； Small piece of liver tissue selected from left lobe of liver was embedded in paraffin， sliced and stained with Masson and its pathological changes were observed； The liver function AST， ALT were detected by ELISA method； PCⅢ and PCIV were detected by the expression by fluorescence semi quantitative PCR. Results：The morphological change of liver tissue：Masson staining showed structural integrity of hepatic lobule. There were only a little collagen fibers in portal area. Compared with normal group， masson staining result indicated significant liver fibrillation. The fibrillation of colchicinescontrolled group and bloodletting group was lighter than that in model group， indicating the treatment was effective. Liver function：compared with the model group， AST， ALT levels of the pricking blood group decreased significantly （P<005）， and AST content of colchicine control group decreased （P>005）. And the content of ALT significantly reduced （P<005）； Pricking blood therapy could significantly reduce the serum AST and ALT levels； PCIII， CIV expression：compared with the model group， PC III， C IV expression of colchicine group and thorn blood group decreased， and the difference had statistical significance （P<005）. The pricking blood therapy can significantly down regulated the expression of PCIII and CIV. Conclusion：Firstly， bloodletting therapy can reduce the content of serum ALT and AST to a certain extent， and can protect liver function. Secondly， bloodletting therapy can significantly reduce the expression of PCIII and CIV. Thirdly， bloodletting therapy is effective in the treatment of liver fibrosis in rats， which can reduce the expression of apoptosis inhibiting gene PCIII and CIV， as well as change the ratio of PCIII/CIV.

Key WordsHepatic fibrosis； Blood pricking therapy； PCⅢ； CⅣ

中圖分類號(hào)：R24531+2文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2018.05.043

肝纖維化（Hepatic Fibrosis）是慢性肝病向肝硬變以及肝癌的發(fā)展必經(jīng)階段，在肝纖維化發(fā)展的后期會(huì)嚴(yán)重影響患者的生命質(zhì)量，如果繼續(xù)惡化，甚至危及生命。我國長期以來都占據(jù)著肝病大國的位置，根據(jù)2008年調(diào)查的數(shù)據(jù)顯示，全球大約有35億乙肝病毒感染者，中國大約有12億，占總數(shù)的343%，占我國人口總數(shù)的98%[1]。慢性乙型肝炎發(fā)展為肝纖維化，只需要2～6年的時(shí)間，慢性乙型肝炎患者中約10%～15%的人可能會(huì)在5～10年內(nèi)發(fā)展為肝纖維化，從而導(dǎo)致肝硬化。此外，急性丙肝的危害也較大，2007年世界衛(wèi)生組織公布數(shù)據(jù)表明，全球約有17億人感染丙型肝炎病毒，包括肝硬化或肝癌；我國HCV的感染率約為32%[2]。2009年報(bào)告的發(fā)病人數(shù)在短短6年時(shí)間內(nèi)竟然達(dá)到是2003年發(fā)病人數(shù)的6倍多。多項(xiàng)研究表明，肝纖維化經(jīng)過治療后可以發(fā)生逆轉(zhuǎn)化。因此，提早預(yù)防和干預(yù)肝纖維化的形成，對(duì)各種慢性肝病的治療具有重要意義。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)治療肝纖維化的手段，主要從肝纖維化發(fā)生的各個(gè)途徑抑制纖維化的發(fā)生和發(fā)展，但是在治療肝纖維化的過程中，不僅需要長期服藥，而且會(huì)有較大經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，因此，有必要尋求一種更為安全有效、經(jīng)濟(jì)、無不良反應(yīng)的治療方法。

1材料與方法

11材料

111動(dòng)物清潔級(jí)健康雄性SD大鼠44只，體重（200±20）g，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供，許可證號(hào)SCXK（京）20120001。在2級(jí)動(dòng)物室（北京中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)針灸動(dòng)物室：室溫22 ℃，相對(duì)濕度45%）清潔條件下喂養(yǎng)。

112藥物四氯化碳（分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，生產(chǎn)批號(hào)：20130326）；秋水仙堿（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，生產(chǎn)批號(hào)：4415010150）；花生油（魯花集團(tuán)有限公司，生產(chǎn)批號(hào)：691616861630）。

113試劑與儀器甲醛溶液（分析純，北京鼎國昌盛生物技術(shù)有限公司，生產(chǎn)批號(hào)：20130907）；磷酸氫二鈉（北京鼎國昌盛生物技術(shù)有限公司，生產(chǎn)批號(hào)：20140310）；磷酸氫二鈉（北京鼎國昌盛生物技術(shù)有限公司，生產(chǎn)批號(hào)：20140310）；10%水合氯醛（北京中醫(yī)藥大學(xué)生理教研室配制）；75%酒精（北京夢(mèng)怡美商貿(mào)中心）；09%氯化鈉溶液（江蘇強(qiáng)生生物科技有限公司）；試劑盒：ALT、AST生化試劑盒，由北京中醫(yī)藥大學(xué)科研中心提供；離心機(jī)（3K18 Sigma）；全自動(dòng)生化分析儀（邁瑞B(yǎng)S220）；Imagepro Plus 6圖像分析系統(tǒng)（北京中醫(yī)藥大學(xué)科研中心提供）；Anymicro DSSTM圖像采集系統(tǒng)（北京中醫(yī)藥大學(xué)科研中心提供）；電子秤（HOCKY AD05）；小號(hào)三棱針（北京中研太和醫(yī)藥有限公司20 mm×57 mm）；移液槍（北京中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿機(jī)能實(shí)驗(yàn)室提供）。

12實(shí)驗(yàn)方法

121分組與模型制備采用隨機(jī)數(shù)字表法將44只大鼠隨機(jī)分為2組，空白組12只，模型組32只。參考王偉明[3]、周賢[4]的造模方法，即在大鼠頸后皮下注射經(jīng)過花生油稀釋的40% CCL4。使用該造模方法對(duì)36只大鼠造模。6周后隨機(jī)選取2只模型組大鼠，2只空白組大鼠進(jìn)行肝臟病理切片觀察，以保證造模成功。最終納入數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)的是空白組10只，模型組30只。然后將模型組大鼠隨機(jī)分為模型對(duì)照組，刺血干預(yù)組及秋水仙堿組，每組10只。

122干預(yù)方法全部大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，空白組：常規(guī)飼養(yǎng)，09%生理鹽水皮下注射，2次/周，至12周，第6周后只抓取，其他不做任何處理；模型對(duì)照組：皮下注射經(jīng)過花生油稀釋的40% CCL4 6周，2次/周，第6周后只抓取，不做其他處理，至12周；刺血干預(yù)組：皮下注射經(jīng)過花生油稀釋的40%CCL4 6周，2次/周，同時(shí)足三里、陽陵泉、太沖刺血，出血量為025～04 mL（換算公式為出血量=體重×74%×2%）[510]，2次/周，至12周；秋水仙堿組：皮下注射經(jīng)過花生油稀釋的40% CCL4 6周，2次/周，同時(shí)220 μg/（kg·d）標(biāo)準(zhǔn)給予秋水仙堿[11]，5次/周，至12周。

123檢測(cè)指標(biāo)與方法實(shí)驗(yàn)進(jìn)行至第12周末，各組大鼠禁食不禁水12 h，使用10%水合氯醛（35 mL/kg）進(jìn)行腹腔注射麻醉后，固定于鼠板，開腹后于腹主動(dòng)脈取血5 mL，靜置2 h，在4 ℃環(huán)境下，將離心機(jī)設(shè)置3 000 r/min，離心20 min，分離上層血清，移液槍轉(zhuǎn)移血清至EP管，-80 ℃保存，待用于ALT、AST、PCⅢ、CⅣ的檢測(cè)；選取肝左葉距邊緣約05 cm處取1 cm×1 cm×05 cm大小新鮮肝組織，投入10%中性甲醛溶液中固定，用石蠟包埋后切片，使用MASSON法染色。

13統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 220統(tǒng)計(jì)分析軟件，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組比較中，若各組方差齊且數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布時(shí)用單因素方差分析檢驗(yàn)，組間比較用LSD及SNK檢驗(yàn)，方差不齊或非正態(tài)時(shí)用Welch檢驗(yàn)或Nemenyi非參數(shù)檢驗(yàn)；方差齊時(shí)進(jìn)行2組獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，方差不齊時(shí)采用非參數(shù)檢驗(yàn)。以P<005為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

21各組大鼠肝臟組織鏡下形態(tài)學(xué)變化Masson染色可直接顯示除各組大鼠肝組織的匯管區(qū)周圍纖維增生的情況，可直觀的判斷除正常組之外的各組大鼠HF的程度和范圍。根據(jù)以上Masson染色片可知，正常組大鼠的肝小葉結(jié)構(gòu)完整，僅在匯管區(qū)周圍有少許膠原纖維被染色；模型組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)消失，匯管區(qū)周圍纖維架橋形成，HF明顯，這就說明造模成功；與模型組比較，秋水仙堿對(duì)照組和刺血干預(yù)組大鼠的HF程度明顯減輕，但比正常對(duì)照組的HF程度嚴(yán)重這說明2組的治療均有效。見圖1。

22刺絡(luò)瀉血療法對(duì)各組大鼠肝功能ALT、AST的影響造模結(jié)束后，與生理鹽水對(duì)照組同時(shí)間比較，模型組的AST、ALT含量顯著上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005）；與模型組同時(shí)間比較，刺血干預(yù)組AST、ALT含量顯著降低（P<005），秋水仙堿對(duì)照組AST含量降低（P>005），而ALT含量顯著降低（P<005）；刺血干預(yù)組與秋水仙堿對(duì)照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>005）。見表1。

23刺絡(luò)瀉血療法對(duì)各組大鼠肝纖維化指標(biāo)PCⅢ、ⅣC的影響造模結(jié)束后，與生理鹽水對(duì)照組同時(shí)間比較，模型組的PCⅢ、ⅣC含量顯著上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005）；與模型組同時(shí)間比較，刺血干預(yù)組PCⅢ、ⅣC含量顯著降低（P<005），秋水仙堿對(duì)照組PCⅢ、ⅣC含量顯著降低（P<005）但刺血干預(yù)組與秋水仙堿對(duì)照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>005）。見表2。

圖1大鼠肝臟病理形態(tài)學(xué)改變（Masson×400）

表1各組大鼠AST、ALT含量的比較（±s，U/mL，n=10）組別ASTALT空白對(duì)照組1615±3382059±608模型對(duì)照組2992±542*3306±669*刺血干預(yù)組2428±388△2735±53△秋水仙堿組234±4843034±421△注：與正常組同時(shí)間點(diǎn)比較，*P<005；與模型組同時(shí)間點(diǎn)比較，△P<005

表2各組大鼠PCⅢ、ⅣC的比較（±s，U/mL，n=10）組別PCIIIPCIV空白對(duì)照組6586±2646461±1478模型對(duì)照組12276±601*9715±2515*刺血干預(yù)組8267±2857△4978±1133△秋水仙堿組8370±2762△4846±1574△注：與正常組同時(shí)間點(diǎn)比較，*P<005；與模型組同時(shí)間點(diǎn)比較，△P<005

3討論

目前，國內(nèi)外臨床診斷HF的“金標(biāo)準(zhǔn)”是肝活檢組織病理學(xué)檢查，指通過肝穿刺取出少量的肝組織進(jìn)行組織切片，鏡下觀察以明確診斷肝纖維化，同時(shí)可以估測(cè)肝纖維化的炎癥活動(dòng)度、纖維化程度以及藥物療效。但是每次肝穿刺取出的肝組織體積僅占全部肝肝組織的1/50 000，而肝纖維化在肝內(nèi)發(fā)生的部位不同，因此一次肝穿刺具有偶然性不穩(wěn)定性，并從而造成誤診因此強(qiáng)調(diào)肝活檢時(shí)要有以下2個(gè)標(biāo)準(zhǔn)：首先，肝臟組織穿刺標(biāo)本的直徑至少要達(dá)到15 mm；其次，肝臟組織穿刺取出的標(biāo)本要包含6個(gè)以上的匯管區(qū)，且Bedossa[12]建議肝穿刺獲得肝組織時(shí)要不應(yīng)少于25 mm。

本實(shí)驗(yàn)對(duì)不同組別的大鼠的Masson染色切片觀察和分析得知，刺絡(luò)瀉血療法有效地減輕了四氯化碳誘導(dǎo)的肝纖維化大鼠模型的肝臟組織形態(tài)學(xué)改變的程度。Masson染色切片，模型對(duì)照組大鼠的肝臟組織學(xué)形態(tài)改變明顯，已經(jīng)形成了肝纖維化；模型對(duì)照組大鼠的肝小葉結(jié)構(gòu)消失，并在匯管區(qū)周圍形成纖維架橋。將刺絡(luò)瀉血組和秋水仙堿組與模型對(duì)照組的Masson染色切片比較可見，刺絡(luò)瀉血組和秋水仙堿組大鼠的肝臟病變程度明顯減輕。秋水仙堿是目前治療肝纖維化的有效藥物之一，以此作為對(duì)照，可以間接證明刺絡(luò)瀉血療法能夠有效治療肝纖維化。

31刺絡(luò)瀉血對(duì)PCⅢ、CⅣ的影響本實(shí)驗(yàn)的研究結(jié)果表明，刺絡(luò)瀉血療法可以有效降低PCⅢ、CⅣ在肝臟組織中的表達(dá)，與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005）。刺絡(luò)瀉血療法能有效降低CCL4誘導(dǎo)肝纖維化大鼠PCⅢ、CⅣ的含量，其效果與西藥秋水仙堿作用相當(dāng)，改善肝纖大鼠肝組織病理變化，減輕肝損傷。

32刺絡(luò)瀉血對(duì)肝功能指標(biāo)AST、ALT的影響AST、ALT的血清活性是最常使用的反映肝細(xì)胞損傷的敏感指標(biāo)。當(dāng)肝細(xì)胞嚴(yán)重病變、壞死時(shí)，線粒體內(nèi)釋放出AST；當(dāng)肝細(xì)胞變性細(xì)胞膜變性、細(xì)胞膜通透性增加時(shí)，從細(xì)胞內(nèi)逸出的主要是ALT[13]；在本實(shí)驗(yàn)研究中，刺血干預(yù)組能夠降低AST、ALT的含量，減輕肝損傷與秋水仙堿組比較雖無明顯差異，但效果最優(yōu)。

目前，肝纖維化的發(fā)病機(jī)制已經(jīng)非常明確，即肝組織中大量沉積無法代謝的膠原纖維，導(dǎo)致肝細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)槔w維細(xì)胞。肝纖維化是各種慢性肝病以及病毒性肝炎和酒精性肝病等重大疾病向肝硬化甚至肝癌發(fā)展的必經(jīng)階段。目前，各種研究已經(jīng)表明肝纖維化經(jīng)過適當(dāng)?shù)闹委熀笫峭耆梢园l(fā)生逆轉(zhuǎn)。因此，抑制肝臟纖維化的發(fā)展，具有重大的現(xiàn)實(shí)意義。

近年來，西醫(yī)的抗肝纖維化藥物已達(dá)到細(xì)胞分子水平，也有的藥物可以通過基因調(diào)控肝細(xì)胞內(nèi)信息的表達(dá)，從而在一定程度上治療肝纖維化。同時(shí)，中醫(yī)藥在抗纖維化的研究中發(fā)揮了重要的作用，大量的中藥抗纖維化實(shí)驗(yàn)和臨床研究為抗纖維化提供了寶貴的經(jīng)驗(yàn)，顯示出其獨(dú)特的優(yōu)越性。

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明刺絡(luò)瀉血療法可調(diào)節(jié)血液循環(huán)，加快人體新陳代謝，可刺激骨髓的造血功能，增多循環(huán)血液中的紅細(xì)胞數(shù)量，提升血液含氧量刺血療法還可以通過神經(jīng)體液調(diào)節(jié)，改善局部微循環(huán)，加快代謝排出血中毒害物質(zhì)的能力，進(jìn)而提高人體的免疫能力。現(xiàn)代研究表明[14]，刺絡(luò)瀉血療法可以明顯改善血管內(nèi)血液的流變狀態(tài)以及增強(qiáng)體內(nèi)循環(huán)供血的能力，可以調(diào)節(jié)人體的凝血系統(tǒng)和抗凝系統(tǒng)，進(jìn)而起到調(diào)節(jié)人體內(nèi)分泌系統(tǒng)的功能。國外研究發(fā)現(xiàn)[15]，在治療遺傳性血色沉著病時(shí)，運(yùn)用刺絡(luò)瀉血療法可以間接的改善患者的HF程度，因此，可以推斷刺絡(luò)瀉血療法可能是通過綜合調(diào)整人體的供血功能以及內(nèi)分泌功能從而達(dá)到有效治療甚至逆轉(zhuǎn)HF的功能。但是，根據(jù)目前的情況來看，我們?nèi)耘f需要加大對(duì)刺絡(luò)瀉血療法的研究，以期進(jìn)一步探明刺絡(luò)瀉血療法治療HF的內(nèi)在機(jī)制以及對(duì)于HF不同程度的干預(yù)效果。只有更多的研究和更多的探索，才能進(jìn)一步為臨床治療HF提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，為探索刺絡(luò)瀉血療法對(duì)于HF的治療機(jī)理具有重大意義。

參考文獻(xiàn)

[1]谷堂，任雪蓮，逢鳳墳，等.抗己肝藥物研究進(jìn)展[C].第五屆沈陽科學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文集，沈陽：沈陽市科協(xié)，2008，530.

[2]毛青.抗丙型肝炎病毒新型藥物研究進(jìn)展[C].中華醫(yī)學(xué)會(huì)病毒性肝炎慢性化重癥化基礎(chǔ)與臨床研究進(jìn)展學(xué)術(shù)會(huì)議論文集，重慶：中華醫(yī)學(xué)會(huì)，2009，27.

[3]王偉明，暢洪昇，趙云，等.肝纖維化大鼠模型病理變化與行為學(xué)相關(guān)研究機(jī)[J].北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，35（12）：814815.

[4]周賢，劉翼，夏國棟，邵澤勇.肝好維化動(dòng)物模型探討[J].四川動(dòng)物，2010，29（1）：114.

[5]戰(zhàn)慧敏.刺絡(luò)瀉血對(duì)高脂血癥模型大鼠血脂、脂代謝酶及NO、ET1的影響[D].北京：北京中醫(yī)藥大學(xué)，2017.

[6]譚麗.刺絡(luò)瀉血對(duì)高尿酸血癥模型大鼠血尿酸及相關(guān)酶活性的影響[D].北京：北京中醫(yī)藥大學(xué)，2017.

[7]陳子晨.刺絡(luò)瀉血對(duì)高脂血癥大鼠動(dòng)脈粥樣硬化形成的干預(yù)作用[D].北京：北京中醫(yī)藥大學(xué)，2017.

[8]譚麗，王寧，趙慧玲，等.刺絡(luò)瀉血對(duì)高尿酸血癥大鼠血尿酸及相關(guān)酶活性的影響[J].世界中醫(yī)藥，2017，12（3）：631635.

[9]戰(zhàn)慧敏，趙慧玲，譚麗，等.刺絡(luò)瀉血對(duì)高脂血癥模型大鼠血脂、NO及ET1影響的研究[J].世界中醫(yī)藥，2017，12（5）：11011104.

[10]陳子晨，趙慧玲，戰(zhàn)慧敏，等.刺絡(luò)瀉血療法對(duì)高血黏度大鼠血清oxLDL和oxLP（a）的影響[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2017，23（17）：3537，47.

[11]史萌萌，奚勝艷，王彥暉，等.桃紅四物湯對(duì)肝纖維化小鼠病理性血管生成相關(guān)因子VEGF、KDR與Flt1表達(dá)的影響[J].中華中醫(yī)藥雜志，2016，31（2）：487491.

[12]Bedossa P，Daregere D，Paradis V，Samplingvariability of liver fibrosisin chronic hepatitis[J].Hepatology，2003，38：14491457.

[13]王寶恩，張定鳳.現(xiàn)代肝臟病學(xué)[M].北京：科學(xué)出版社，2003：182184.

[14]Adams PC，Braton JC.How Itreathemo chromatosis[J].Blood，2010，116（3）：317325.

[15]Falize L，Guillygomare′h A.Reversibility of hepatic f ibrosis in treat edgenetich emochromatosis：A study of 36 cases[J].Hepatology，2006，44（2）：472477.