應用高效液相色譜法測定丹參中丹參酮IIA的含量

龐謝輝

[摘要]目的：分析高效液相色譜法在中藥丹參不同部位中丹參酮IIA含量測定中的應用價值。方法：建立反相高效液相色譜測定模式，選用Hypers110DS（C18）色譜柱，以75甲醇/25水為相液流動相比例，分別檢測丹參不同部位有效成分丹參酮IIA的含量，并通過實驗驗證這一方法的有效性、穩定性等。結果：丹參酮IIA面積和濃度呈線性相關，在1.25-21.45yg/ml濃度范圍內線性最佳；加樣溶液丹參酮IIA回收率平均為99.52%，相對標準偏差值為2.02%；丹參莖、葉未含丹參酮IIA。結論：反相高效液相色譜法，可在短時間內精準獲知丹參不同部位丹參酮IIA的含量，為丹參品質鑒定、藥用價值和劑量研究工作提供可靠參考資料。

[關鍵詞]高效液相；丹參；丹參酮IIA；色譜柱

丹參是藥用價值極高的草本植物，其根部內含丹參酮，常被入藥調經疏絡、活血祛瘀、消腫鎮痛，其中丹參酮IIA是丹參脂溶性成分的代表物質，被廣泛用于冠心病防治。但是，丹參入藥采購、運輸、選品等各個環節均存在危險因素，如部分不法分子試圖用偽劣品以假亂真牟取利益，制藥工作人員專業水平不達標不能準確鑒別真偽、優劣，嚴重影響了中醫藥學的發展。鑒于此，本院開展了丹參不同部位丹參酮IIA含量測定研究，旨在證實高效液相色譜法的應用價值并為丹參藥用研究提供參考資料。

1 材料和設備

1.1 實驗材料 本實驗研究材料包括由中國藥品生物制品檢定所提供的丹參酮IIA標準品，江陰祥輝化工有限公司提供的色譜純甲醇，廣州致信中藥飲片有限公司提供的干燥丹參根（6個月齡）、莖和葉子，實驗用超純水。

1.2 實驗設備 本實驗研究設備包括高效液相色譜儀（杭州漢澤儀器有限公司，型號為LC-2010HT），紫外檢測器（Genesys系列）、色譜柱（Hypersi10DSC18，長度為250mm，內徑為4.6mm，填料顆粒直徑為Sμm）、電子分析天平（瑞士梅特勒一托利多AB-S系列）、精密可程式干燥箱（上海博迅醫療生物儀器股份有限公司，BXH-130S）、電熱恒溫水槽（上海精密儀器儀表有限公司，CU系列）、實驗室色譜超生儀（必能信超聲上海有限公司，SB2200）。

2 方法和結果

2.1 色譜條件 建立反相高效液相色譜測定模式，選用Hypersi10DS（C18）色譜柱，以75甲醇/25水為相液流動相比例，將每分鐘流速設置為1.2ml，進樣量為10μl，柱溫控制在30℃，檢測波長介于268-270nm之間。

2.2 配制對照品溶液 準備5.5mg丹參酮IIA以及容量為25ml的棕色量瓶，將丹參酮IIA置人瓶內，并持續加入甲醇，直至達到稀釋標準，將配制品搖勻；提取搖勻后的溶液2.5ml并將其放置在容量為lOml的棕色量瓶內，持續加入甲醇直至達到稀釋標準，搖勻所得即為對照品溶液，將其置入冰箱內保存待檢，冰箱溫度為4℃。

2.3 配制試驗品溶液 準備適量丹參根莖葉并研磨成粉狀，稱取6.Omg倒入容量為25ml的燒瓶內，混入5ml甲醇，稱其重量并記錄；在超聲儀的輔助下進行提取處理，總時長控制為半小時，待溶液恢復至室溫后，再次稱其重量，所丟失質量由甲醇補足；充分搖勻溶液，并應用直徑為0.22μm的微孔濾膜過濾部分溶液，所得藥液倒入容量為25ml的瓶內，持續加入甲醇直至達到定溶標準，此時所得到的溶液即為試驗品溶液，將其置于冰箱內保存待檢，冰箱溫度為4℃。

2.4 測定標準曲線 分別吸取0.25ml、0.50ml、l.OOml、1.25ml、1.50ml對照品溶液，依次滴入五個棕色量瓶（20ml）中，做好標記。持續加入甲醇至稀釋標準，以上述色譜條件各自進樣3次，將單次進樣量設置為10μl，獲取色譜圖。分析結果可知，丹參酮IIA面積和濃度呈線性相關，在1.25-21.45μg/ml濃度范圍內線性最佳。

2.5 測定精密度 吸取lO.Oμl試驗品溶液，采用高效液相色譜測定進樣6次，測定丹參酮IIA含量，計算丹參酮IIA峰面積相對標準偏差值為1.5%。

2.6 檢測穩定性 檢測丹參試驗品溶液的穩定性，需要在每一小時各進樣三次，此時所得丹參酮IIA峰面積相對標準偏差值為2.02%。

表1 加樣溶液丹參酮IIA回收率測定

2.7 檢測可重復性 將六個月齡的丹參干燥根適量研磨成分粉狀，稱取lOOmg并平均分為六份，以上述試驗品溶液配制方法配制溶液并測定丹參酮IIA含量，計算其相對標準偏差值為2.06%。

2.8 測定加樣回收率 將六個月齡的丹參干燥根適量研磨成分粉狀，稱取6.Omg，均分為六份，以上述試驗品溶液配制方法配制溶液，吸取l.Oml同時于每分溶液中各自加入1.Oml對照品儲備液，測定加樣溶液丹參酮IIA回收率。詳細結果見表1所示。

2.9 測定其他樣品 以上述試驗品溶液制備方法配制丹參莖、葉子粉末溶液樣品并進行丹參酮IIA含量測定，結果未測得丹參酮IIA。

3 結論

科學有效的丹參中藥材鑒定策略不僅能夠為丹參藥材質量控制提供支持，還可以為丹參的栽培種植、藥用部位擴展、品質鑒定、有效成分劑量研究等提供參考依據，應予以重視。當前，藥學工作者測定丹參及其制劑有效成分含量的方法包括毛細管電泳法、薄層掃描法、分光光度法、高效液相色譜法。其中，高效液相色譜法以可操作性強、適用范圍廣、靈敏度高、結果測定速度快等優勢得到了快速發展和應用。曾敬其等人[1]在研究中明確表明，“高效液相色譜法快速、靈敏、便于操作且可靠性高，適用于中藥樣品中丹參酮類化合物的測定”。另外，一項研究顯示[2]，“在流動相為甲醇一水（78：22）、流速為ImL-min-l、檢測波長為270nm、柱溫為25℃的條件下使用高效液相色譜法對供試品進行測定，其目標峰的峰型良好，分離完全”，為丹參酮ⅡA含量的測定以及丹參藥材質量管控工作提供了可靠參考依據。在本次實驗研究中，我們應用反相高效液相色譜法分析中藥丹參根、莖、葉不同部位丹參酮IIA的含量，結果顯示，丹參酮IIA面積和濃度呈線性相關，在1.25-21.45μg/ml濃度范圍內線性最佳；加樣溶液丹參酮IIA回收率平均為99.52%，相對標準偏差值為2.02%，丹參莖、葉未含丹參酮IIA，再次印證了反相高效液相色譜法的應用價值。

參考文獻

[1]曾敬其，李卓碉，趙燕妮，等.高效液相色譜法測定丹參中三種丹參酮含量[J].廣州化工，2017，45（08）：113-114+145.

[2]楊新.用高效液相色譜法測定丹參藥材中丹參酮ⅡA含量的最優測定條件分析[J].當代醫藥論叢，2014，12（01）：156-157.