丁建營 劉春娟 郭建軍 胡曉宇 公愛娟 張波
中圖分類號 R93 文獻標志碼 A 文章編號 1001-0408(2018)13-1859-06
DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2018.13.31
摘 要 目的:為建立天花粉的質量評價標準提供參考。方法:以“天花粉”“化學成分”“質量評價”“天花粉蛋白”“天花粉凝集素”“天花粉多糖”“藥理活性”“檢測方法”“Trichosanthis Radix”“Chemical component”“Quality evaluation”“Trichosanthin”“Trichosanthes kirilowii lection”“Polysaccharides of trichosanthis radix”等為關鍵詞,組合查詢1980年1月-2018年1月在中國知網、萬方、維普、ScienceDirect、PubMed、Web of Science等數據庫中的相關文獻,對天花粉化學成分的藥理活性、提取與檢測方法進行論述。結果與結論:共檢索到相關文獻857篇,其中有效文獻54篇。天花粉含有蛋白質類、多糖類、皂苷類、黃酮類、氨基酸等多種活性成分,其中研究較多的為天花粉蛋白、天花粉多糖、天花粉凝集素這3種成分的藥理活性、提取與檢測方法,而皂苷類成分和黃酮類成分研究較少,停留在總皂苷或總黃酮的層面上,缺乏化學結構鑒定及藥理活性研究。天花粉蛋白是天花粉的專屬性成分,具有抗病毒、抗腫瘤、中期引產等多種藥理活性,可作為天花粉質量評價指標性成分。
關鍵詞 天花粉;化學成分;質量評價;天花粉蛋白;天花粉凝集素;天花粉多糖
天花粉,又名栝樓根,為葫蘆科植物栝樓(Trichosanthes kirilowii Maxim.)或雙邊栝樓(Trichosanthes rosthornii Harms.)的干燥根,具有清熱瀉火、生津止渴、消腫排膿等多種功效[1],是臨床常用中藥材之一。據統計,2015年版《中國藥典》(一部)收載的成方制劑和單味制劑共1 943種,其中含有天花粉的中成藥有44個之多,約占收載總量的2.3%,使用頻次較高[1]。再者,天花粉為“消渴圣藥”,可“通月水”“治包衣不下”[2],在治療糖尿病及終止妊娠方面具有極高的新藥開發利用價值。天花粉發揮其藥理活性的主要成分包括天花粉蛋白(Trichosanthin,TCS)、天花粉凝集素(Trichosanthes kirilowii lection,TKL)、天花粉多糖、瓜氨酸,此外還包括皂苷類和黃酮類成分等[3],但在諸多的化學成分中并沒有明確其質量控制指標性成分。2015年版《中國藥典》(一部)僅規定了天花粉的“水浸出物含量(冷浸法)不得少于15.0%”[1],指標特異性有待提高。筆者以“天花粉”“化學成分”“質量評價”“天花粉蛋白”“天花粉凝集素”“天花粉多糖”“藥理活性”“檢測方法”“Trichosanthis Radix” “Chemical component” “Quality evaluation” “Trichosanthin” “Trichosanthes kirilowii lection” “Polysaccharides of trichosanthis radix”等為關鍵詞,組合查詢1980年1月-2018年1月在中國知網、萬方、維普、ScienceDirect、PubMed、Web of Science等數據庫中的相關文獻。結果,共檢索到相關文獻857篇,其中有效文獻54篇。現對天花粉化學成分的藥理活性、提取與檢測方法進行綜述,以期為建立天花粉的質量評價標準提供參考。
1 TCS的藥理活性、提取與檢測方法
1.1 藥理活性
TCS是從天花粉中分離得到的一種由19種共247個氨基酸組成的堿性(等電點為9.4)失活蛋白,分子量約27 kD,是僅由肽鏈組成的簡單蛋白,且結構中不含半胱氨酸[4]。TCS是我國醫藥工作者在20世紀80~90年代根據國家計劃生育基本國策所需從傳統中藥復方中篩選獲得的具有顯著終止妊娠作用的活性成分,因此其最早應用于中期引產,其引產機制為專一性破壞滋養層細胞[5]。由于對滋養層細胞的破壞作用顯著,TCS還被廣泛用于治療惡性葡萄胎、絨毛癌、宮頸癌等與胎盤滋養層相關的疾病[6]。TCS屬Ⅰ型核糖體失活蛋白,其可水解真核細胞核糖體的28S rRNA的4324位上的腺苷酸N-C糖苷鍵,使核糖體發生不可逆失活,從而抑制蛋白質的合成,此特性大大提高了TCS的應用范圍,如用于抗腫瘤與抗病毒。TCS對小鼠宮頸癌U14細胞、人宮頸癌HeLa細胞、人宮頸癌Caski細胞、人卵巢癌HO8910細胞、乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7細胞、人白血病HL-60細胞、人白血病K562細胞、淋巴瘤細胞、人黑色素瘤細胞、結腸癌SW-620細胞、結腸癌CMT-93細胞、人胃癌SGC-7901細胞、食管癌Eca-109細胞、肝癌H22細胞、肺癌A549細胞、鼻咽癌CNE2細胞、小鼠前列腺癌RM-1細胞、前列腺癌PC3細胞等均表現出顯著的抗腫瘤作用[7]。高富紅等[8]對TCS的抗腫瘤機制進行了總結分析,認為TCS發揮抗腫瘤活性除與抑制蛋白合成相關外,還可通過抑制細胞生長、誘導細胞凋亡、增強紅細胞免疫功能、調節免疫系統(增強自然殺傷細胞活性、調節細胞因子、激活補體系統、增強細胞免疫和體液免疫功能)等途徑發揮作用。研究表明,TCS對多種病毒具有抑制作用,包括乙腦病毒、流感病毒、單純皰疹病毒、柯薩奇病毒、脊髓灰質炎病毒、腺病毒、麻疹病毒、肝炎病毒、人類免疫缺陷病毒等,其作用機制包括核糖體失活作用、抑制病毒DNA聚合酶或核酸內切酶活性、選擇性殺死病毒感染細胞、介導趨化因子等[9]。
1.2 提取與純化方法
TCS屬于水溶性堿性蛋白質,其提取方法主要采用偏酸性的鹽溶液提取,而純化方法主要有丙酮分級沉淀法和鹽析法[10]。
1.2.1 丙酮分級沉淀法 丙酮分級沉淀法最早由汪猷[4]提出,該法以新鮮栝樓根為原料,經去皮、搗碎、榨汁、過濾后,上清液用鹽酸(2 mol/L)調節pH至4.0左右,再加入原汁體積0.8倍的丙酮,離心去除沉淀。上清液再加入原體積0.5倍量的丙酮,此次離心所得沉淀經蒸餾水溶解并透析后得TCS提取物,得率為0.1%~0.15%。
1.2.2 鹽析法 硫酸銨溶解度大,溶解后可形成大量的銨根正離子和硫酸根離子,可競爭結合蛋白表面的水分子,破壞其水化膜,降低蛋白溶解度,進而聚集沉淀,是鹽析法最常用的無機鹽之一。孫建忠等[11]用生理鹽水抽提粉碎后的栝樓根塊莖,然后加硫酸銨至濾液中使其濃度至90%,離心收集沉淀經凝膠過濾后即可獲得TCS,與結晶法比較該方法提取周期短,且保持了TCS的活性。馬翠麗等[12]以新鮮栝樓根為原料,經去皮、粉碎、榨汁后,第一次向原汁中加入硫酸銨粉末使其濃度達到40%,沉淀離心后取上清,再加硫酸銨使其濃度達到75%,離心后得天花粉蛋白粗提物(沉淀)。經蒸餾水透析和柱層析純化后,十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)結果顯示,天花粉蛋白為1條或2條完全分離的條帶,表明該方法簡單、高效。
1.2.3 以干栝樓根為原料的TCS提取與純化方法 TCS最早從新鮮栝樓根中提取,但新鮮栝樓根市場使用量少,且水分含量大不易長期保存,因此近年來研究多以干栝樓根為原料。楊燁等[13]以干栝樓根為原料,粉碎后過篩,用氯化鈉(0.15 mol/L)攪拌過夜提取,過濾,上清液用醋酸鹽緩沖液(0.5 mol/L,pH=2.0)調節pH=3.0,離心取上清,再用磷酸鹽緩沖液(0.5 mol/L,pH=7.0)調節pH=6.5,然后用30%~85%硫酸銨分級沉淀,85%所得沉淀組分經透析、Sepharose CL-6B層析柱純化后得TCS純品(得率為2.2%),SDS-PAGE與PAGE結果均顯示1條條帶,表明該方法可用于干栝樓根為原料的TCS提取制備。汪苗苗等[14]以干栝樓根為原料,采用硫酸銨分級沉淀法制備TCS粗提物,并進一步利用雙水相技術純化后得到了TCS純品,其優選的最佳硫酸銨分級沉淀條件為固液比1 ∶ 12,浸泡時間24 h,溶液pH在5.0左右,最終得率為0.08%。Maraganore JM、Narayanan P等[15-16]采用磷酸鹽緩沖液勻漿提取法,從干栝樓根中提取TCS粗品,利用柱層析或反相高效液相色譜(RP-HPLC)進一步純化獲得TCS純品。
與丙酮分級沉淀法比較,鹽析法不使用有機溶劑,減少了提取過程對人體和環境的危害,且縮短了制備周期,方法更加簡便,可應用于干栝樓根為原料的TCS提取,是比較理想的提取TCS的方法。
1.3 檢測方法
1.3.1 紫外分光光度法 TCS本質是一種蛋白質,具有蛋白質的共性,所以常規蛋白質的檢測方法如凱式定氮法和紫外分光光度法均可用于TCS的定量檢測[17]。根據顯色劑的不同,紫外分光光度法又可分為雙縮脲法、Folin-酚法、考馬斯亮藍染色法和二喹啉甲酸(BCA)法等。張波等[18]采用考馬斯亮藍染色法檢測了雌雄栝樓根中TCS的含量差異。此外,2015年版《中國藥典》(一部)采用Folin-酚法,以牛血清白蛋白為對照品,用以檢測雷丸中的雷丸素含量作為其質量評價指標,為中藥蛋白質類成分的質量檢測標準方法提供了借鑒[1]。但此類檢測方法缺乏專一性,且檢測結果易受基質干擾。
1.3.2 HPLC法 HPLC法是各國藥典應用最多的質量控制方法,但其多用于小分子化合物的定性定量檢測。對于TCS的定量檢測,李艷萍等[19]以硅膠基TSK- G3000SW凝膠柱為HPLC的固定相,以0.02 mol/L磷酸二氫鈉-0.15 mol/L 氯化鈉 -95%乙醇(45 ∶ 45 ∶ 10,V/V/V)為流動相,結果TCS保留時間為16 min,檢測限為0.625 μg/mL。與紫外分光光度法比較,HPLC法對樣品純度要求較高,因此目前只適用于TCS注射液的檢測,若應用于基質復雜的天花粉提取液仍有一定難度。
1.3.3 免疫檢測法 免疫檢測技術是基于抗原抗體特異性結合反應實現定性檢測,結合抗原抗體標記技術而實現定量檢測的技術,在中藥質量安全性和有效性快速評價中應用廣泛[20]。TCS是大分子化合物,對于實驗動物(小鼠、兔、羊等)來說是免疫原性較強的異源蛋白,因此很容易致敏動物從而獲得抗血清,或進一步利用單克隆抗體技術制備單克隆抗體[21-23]。利用放射性同位素或酶標記抗體后,通過檢測放射性信號或酶促反應信號即可實現TCS的定量檢測。馬恒東等[24]以放射性同位素125I標記TCS,采用雙抗體法進行牛奶中TCS的放射性免疫分析(RIA),其靈敏度為87.7 pg/管,平均回收率為100.29%。同理,鄭亦輝等[25]也建立了檢測牛奶中TCS的RIA法,其靈敏度為0.3 ng/管。與紫外分光光度法、HPLC法比較,RIA法雖然靈敏度較高,但其存在放射性污染且對實驗室條件要求苛刻,而以酶標記代替放射性同位素而發展起來的免疫檢測方法,也稱酶聯免疫吸附試驗(ELISA),其能有效避免放射性污染,且具有操作簡單、檢測快速、高通量等優勢。馮成強等[26]用TCS純品免疫新西蘭大耳兔后,制備了抗TCS的多克隆抗體,然后建立了定性定量檢測TCS的間接競爭ELISA檢測法,該方法靈敏度為10 ng/mL,并將此法應用于天花粉的真偽鑒別。結果顯示,新鮮栝樓根和天花粉飲片中均有檢出TCS,而天花粉偽品(王瓜根、湖北栝樓根、木鱉子根、異葉馬瓞兒根等)均未檢出TCS,說明通過ELISA檢測TCS,可用于天花粉的真偽鑒定。
TCS的定性定量檢測方法較多,與紫外分光光度法、HPLC法、RIA法比較,ELISA具有免疫檢測技術的高度專一性,且靈敏度高,操作更加簡便,樣品前處理簡單(無需柱層析純化),無有機溶劑和放射性污染的優點,是天花粉中TCS檢測的較為理想的檢測方法。
2 TKL的藥理活性、提取與檢測方法
2.1 藥理活性
TKL是從天花粉中分離得到的一種由兩條肽鏈構成的專一結合半乳糖的蛋白質,其分子量約為60 kD,等電點約為5.5,結構中有一個疏水微區,無金屬離子結合部位[27]。TKL被認為是天花粉降糖作用的主要活性成分。李瓊等[28]以鹽酸二甲雙胍為陽性對照,將TKL分為低、中、高(0.3、0.6、0.9 g/kg)3個劑量分別灌胃鏈脲佐菌素誘導的糖尿病模型大鼠,3周后結果顯示,TKL可顯著改善糖尿病大鼠的血糖異常,增強大鼠抗氧化能力。其后又研究了TKL對自發性2型KK-Ay糖尿病小鼠血糖、血脂的影響,結果表明,TKL對KK-Ay糖尿病小鼠的血糖、血脂水平均有顯著的調節作用,TKL可促進糖、脂代謝良性循環[29]。此外,TKL還可降低補體溶血[30]。
2.2 提取與檢測方法
同TCS一樣,TKL屬于蛋白質類成分,提取與檢測方法類似。目前已報道的TKL的提取方法以無機鹽溶液浸提-硫酸銨分級沉淀法純化為主。李瓊等[31]采用磷酸鹽緩沖液浸提天花粉中的TKL,通過硫酸銨分級沉淀和蒸餾水透析純化后,利用考馬斯亮藍染色法檢測TKL含量,并利用單因素試驗和正交試驗考察了以磷酸鹽緩沖液提取TKL的最佳工藝,最終確定料液比為1 ∶ 30 (g/mL),提取時間為24 h,緩沖液pH為7.2,硫酸銨飽和度為70%,結果表明由優化工藝提取得到的TKL降糖活性較好。
3 天花粉多糖的藥理活性、提取與檢測方法
天花粉多糖是從天花粉中分離得到的一種多糖類成分,但由于分離純化的方法不同、檢測方法及標準品不同,導致測定的相對分子量(Mr)及其單糖組成存在差異。黃曉蘭等[32]利用超聲波振蕩提取、乙醇沉淀制備天花粉粗多糖,然后用重結晶、色譜柱純化獲得精制天花粉多糖,分別利用氣相色譜-質譜(GC-MS)、HPLC和凝膠滲透色譜(GPC)分析了天花粉多糖的單糖組成及其Mr。結果顯示,天花粉粗多糖及精制后的多糖均是由葡萄糖、半乳糖、鼠李糖、阿拉伯糖、果糖、甘露糖組成的雜多糖,且GPC顯示粗多糖和多糖均有2個有效峰,但其Mr存在差異:粗多糖的Mr分別為181 000和1 460,而精制天花粉多糖的Mr分別為160 000和4 554。屠婕紅等[33]經水提醇沉提取及多步柱純化后精制的天花粉活性多糖RTPS-1的Mr為17 555,且經GC、GPC、紅外光譜、核磁共振分析確定其是由葡萄糖組成的均多糖。許林琴等[34]通過高效凝膠滲透色譜法研究了天花粉多糖的Mr,結果表明,天花粉多糖的重均Mr在7 555~15 423之間。
3.1 藥理活性
3.1.1 免疫增強活性 徐水凌等[35]采用噻唑藍(MTT)法測定了不同濃度天花粉多糖的促人外周血單個核細胞淋巴細胞增殖作用,結果表明,天花粉多糖具有顯著的免疫增強作用,可促進人外周血單個核細胞淋巴細胞的增殖和活化作用,上調T細胞含量,并誘導外周血單個核細胞淋巴細胞高水平分泌腫瘤壞死因子α和白細胞介素6。
3.1.2 抗腫瘤活性 曹麗莉等[36]在人乳腺癌MCF-7細胞培養液中添加不同濃度的天花粉多糖(0、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0 μmol/L),并采用MTT法觀察MCF-7細胞的生長情況。結果證實,10 μmol/L以上的天花粉多糖培養2 d即可誘導人乳腺癌MCF-7細胞凋亡,凋亡率為27.6%。趙桂珠等[37]用添加了不同濃度(0、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0 mmol/L)天花粉多糖的培養基培養人宮頸癌HeLa細胞和人乳腺癌MCF-7細胞3 d,結果表明,5.0 mmol/L以上的天花粉多糖僅培養1 d即可有效抑制人宮頸癌HeLa細胞和人乳腺癌MCF-7細胞生長,抑制率分別為53.1%、29.0%。
3.1.3 降糖活性 Hikino H等[38]從天花粉中分離得到了5種多糖類成分,即Trichosans A、B、C、D、E,這5種多糖在正常大鼠中均可表現出降糖活性,其中Trichosans A可顯著降低四氧嘧啶引起的糖尿病模型大鼠血糖濃度,且經檢測Trichosans A的組成為鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖、果糖(摩爾比0.8 ∶ 2.0 ∶ 0.4 ∶ 1.0 ∶ 0.2 ∶ 0.3),與黃曉蘭等[32]的研究結果相似。
3.2 提取與檢測方法
天花粉多糖的提取方法總體上以水提醇沉法為主,其中水提方法包括回流提取[39]、超聲提取[40-41]、微波提取[42]等,醇沉方法均為添加乙醇使提取液中乙醇濃度達到80%,多糖即可析出。為消除天花粉中脂溶性成分、單糖、低聚糖、苷類成分對多糖提取的影響,研究者使用石油醚、乙醚和80%乙醇加熱回流處理后再進一步提取多糖[39,41]。黃曉蘭等[40]優選的天花粉多糖超聲波振動提取條件為溫度45 ℃、料液比1 ∶ 5 (g/mL)、提取時間2 h。譚志燦等[41]采用星點設計-效應面法優選的天花粉多糖超聲提取最佳條件為溫度52 ℃、料液比1 ∶ 16(g/mL)、超聲提取2次、每次71 min,多糖提取率可達4.36%。微波具有極強穿透力,可用于細胞破壁,提高提取率。王莉等[42]采用微波技術提取天花粉中多糖,整個提取過程約40 min,且多糖提取率由回流提取法的0.84%提高到18.30%。與水提醇沉法比較,纖維素酶法具有設備需求簡單、提取率高、成本低、適于工業化生產等優點。牛憲立等[43]優選了纖維素酶法提取天花粉多糖的最佳工藝為溫度60 ℃、pH 5.0、酶用量0.2%、提取時間1.5 h,天花粉多糖得率為5.48%。
目前天花粉多糖的含量測定方法大多采用糠醛縮合顯色-紫外分光光度法(或苯酚-硫酸分光光度法或蒽酮-硫酸分光光度法)[39-43],在2015年版《中國藥典》(一部)中廣泛應用于玉竹多糖、靈芝多糖、昆布多糖、金櫻子多糖、枸杞多糖、鐵皮石斛多糖、海藻多糖和黃精多糖等中藥多糖成分的含量測定[1]。
4 天花粉中總皂苷的藥理活性、提取與檢測方法
4.1 藥理活性
陳穎等[44-45]以熊果酸為對照品,以香草醛-冰醋酸為顯色劑,采用紫外分光光度法測定了天花粉中總皂苷含量,結果表明天花粉約含有1.9%~2.4%的總皂苷,且皂苷類成分表現出較強的體外抗氧化活性[46]。李曉芳等[47]從天花粉中分離純化了1個四環三萜類化合物,進一步藥理實驗表明,該化合物對四氧嘧啶誘導的糖尿病模型小鼠表現出顯著的降糖作用。此外,陳穎等[48]研究發現,天花粉皂苷對缺血性腦血管疾病具有較好的治療作用。
4.2 提取與檢測方法
天花粉總皂苷的提取方法有2種,即乙醇超聲提取和乙醇回流提取。陳穎等[44]優選的天花粉總皂苷超聲輔助萃取條件為溫度80 ℃、乙醇體積分數80%、提取時間10 min。黃慶勇等[49]優選的回流提取條件為料液比 1 ∶ 15(g/mL)、乙醇體積分數48%、溫度88 ℃、時間120 min。天花粉總皂苷的含量測定方法主要以5%香草醛-冰醋酸和高氯酸為顯色劑的紫外分光光度法為主[45]。
5 瓜氨酸的藥理活性、提取與檢測方法
天花粉中富含多種氨基酸。張波等[50]采用柱前衍生HPLC法檢測了雌、雄栝樓根中的氨基酸含量,結果表明天花粉中含有17種氨基酸,其中必需氨基酸7種(蘇氨酸、纈氨酸、蛋氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、賴氨酸),非必需氨基酸10種,且雌、雄栝樓根中氨基酸組成比例差異明顯,雄株堿性氨基酸(尤其是精氨酸)含量高于雌株,而酸性氨基酸低于雌株。瓜氨酸是一種非蛋白質α-氨基酸,具有抗衰老、增強免疫力活性,由于瓜氨酸可在人體內轉換成精氨酸,因此瓜氨酸還可用于治療精氨酸缺乏引起的系列疾病,如心血管類疾病、糖尿病、代謝性疾病等[51]。2015年版《中國藥典》(一部)采用乙醇超聲提取[1],茚三酮顯色的薄層色譜法檢測瓜氨酸的有無作為天花粉真偽鑒定的主要依據之一。天花粉中瓜氨酸的提取主要以乙醇超聲提取為主,檢測方法則以薄層色譜法和柱前衍生-HPLC法為主。
6 其他成分
除TCS、TKL、天花粉多糖、三萜皂苷和氨基酸外,天花粉中還含有黃酮類成分、葫蘆素B、淀粉以及微量元素。天花粉中黃酮類成分含量極低,以至于汪猷[4]認為天花粉中不含黃酮,而楊申明等[52]利用1%氫氧化鈉、三氯化鋁甲醇溶液、鹽酸-鎂粉、濃硫酸等進行顯色反應定性鑒定天花粉中含黃酮,并利用亞硝酸鈉-硝酸鋁比色法測定天花粉總黃酮,結果其平均含量約為0.118 4 mg/g。葫蘆素B是天花粉中的毒性成分,劑量越大毒副反應越明顯,可致人出現惡心、嘔吐、腹瀉等癥狀,其在天花粉偽品中的含量比正品高出1 000倍。彭朝霞等[53]采用超聲提取法提取天花粉并建立了檢測葫蘆素B含量的HPLC法,為天花粉中葫蘆素B的含量檢測提供了參考。天花粉中含有大量淀粉,在其性狀鑒定中亦有“粉性足者佳”的說法。此外,天花粉中還含有大量微量元素,包括鐵、錳、鋅、銅、鈣等[54]。
7 結語
通過以上對天花粉中化學成分的藥理活性和提取與檢測方法的系統梳理可知,天花粉中雖然含有多種活性成分,但以TCS、TKL、天花粉多糖三者研究最為廣泛,且TCS是目前研究的熱點;而對于皂苷類成分和黃酮類成分的研究則相對較少,尤其在化學結構的鑒定和藥理活性的篩選方面存在較多空白,有待研究。
以《中國藥典》為標準的中藥質量評價方法現階段多以單個、多個或一類具有相關藥理活性或相對特異性的化學成分為指標,設置最低含量要求。而天花粉雖然具有顯著的臨床療效和廣泛的臨床應用,但其藥典標準中以“水浸出物總量”為質量評價指標缺乏特異性。通過本文的歸納分析,筆者認為TCS的藥理活性最為廣泛、作用機制較為清晰、提取與檢測方法成熟,且是天花粉中的特異性成分,既可起到藥材真偽鑒定的作用,又部分反映了天花粉的主要藥理活性,是較為理想的真偽鑒定及品質評價指標性成分。因此,筆者建議對于天花粉及其飲片可建立以TCS為指標性成分的基于鹽析法提取-ELISA定量檢測的質量評價標準。
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(收稿日期:2018-03-01 修回日期:2018-05-08)
(編輯:余慶華)