重癥腺病毒肺炎患兒T細(xì)胞亞群變化及其臨床意義的研究

鄭麗麗 許航燕 應(yīng)旦紅

肺炎是兒童常見病，也是發(fā)展中國家5歲以內(nèi)兒童疾病死因之首[1-2]。患兒年齡越小其自身免疫功能越低，所以重癥肺炎多見于未滿1歲的嬰兒[3]。腺病毒（Adenovirus，Adv）是導(dǎo)致嬰幼兒致死性肺炎的主要病原之一，它是一種DNA病毒，在1953年由Rowe等[4]首次從人腺樣體細(xì)胞分離到。已知人Adv有42個血清型，命名為腺病毒H1～H42，其中H7和H3二型是引起腺病毒性肺炎的主要病原體，所引起的肺炎常較嚴(yán)重，可以致死[5]。關(guān)于腺病毒性肺炎的免疫損害機(jī)制、重癥時機(jī)體細(xì)胞免疫功能異常的研究國內(nèi)外均較少。本研究通過測

定腺病毒性肺炎患兒的T細(xì)胞亞群CD3、CD4、CD8、CD4/CD8比值，分析重癥與非重癥患兒以及重癥患兒中急性期與恢復(fù)期上述指標(biāo)的變化，希望能有助于早期識別重癥肺炎，及時干預(yù)，減輕疾病對人體的損害，避免嚴(yán)重的并發(fā)癥及后遺癥。

1 對象和方法

1.1 對象 選取2013年12月至2017年12月我院按照《諸福棠實(shí)用兒科學(xué)》急性支氣管肺炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)并進(jìn)行咽拭子熒光PCR檢測Adv核酸陽性者、診斷為肺炎的60例住院患兒作為觀察對象。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）伴有支氣管哮喘、肺結(jié)核等其他呼吸系統(tǒng)疾病；（2）伴有免疫系統(tǒng)疾病；（3）近期服用過糖皮質(zhì)激素或者免疫抑制劑、抗生素等；（4）營養(yǎng)不良。其中重癥肺炎32例（符合《諸福棠實(shí)用兒科學(xué)》7版重癥肺炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)[1]：嚴(yán)重的缺氧及毒血癥，有呼吸衰竭，或發(fā)生心血管、神經(jīng)和消化等系統(tǒng)功能障礙），男18例，女14例，年齡2個月～12歲，平均（25.1±17.6）個月；非重癥肺炎 28例，男13例，女 15例，年齡 1個月～9歲，平均（27.2±11.5）個月。兩組患兒性別、年齡比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P ＞0.05）。

1.2 方法 兩組患兒均于入院時抽取靜脈血2ml送檢測定血清T細(xì)胞亞群水平，重癥肺炎組再于恢復(fù)期（住院治療1周）進(jìn)行第2次檢查；同時行胸部X線、腹部B超、心電圖等檢查。兩組患兒的治療按照支氣管肺炎臨床路徑設(shè)定處理，重癥肺炎患兒供氧，部分予糖皮質(zhì)激素治療。兩組患兒均未使用丙種球蛋白，無死亡病例。

1.3 T細(xì)胞亞群檢測 采用流式細(xì)胞術(shù)測定，使用美國BD公司提供的MultiTEST試劑盒，嚴(yán)格按照要求進(jìn)行操作。將100μl抗凝血加20μl熒光單克隆抗體，同時作陰性對照。避光室溫作用20min，溶去紅細(xì)胞后，固定劑固定。通過MultiSET軟件分析得到上流式細(xì)胞儀測定，以陰性對照測出本底參數(shù)，調(diào)節(jié)熒光補(bǔ)償，設(shè)定陽性參數(shù)值，軟件將計(jì)算出陽性表達(dá)細(xì)胞比例，從而得出CD3、CD4、CD8各淋巴細(xì)胞亞群比例及計(jì)算出CD4/CD8比值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料用表示，組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，組內(nèi)比較采用配對t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患兒T細(xì)胞亞群水平的比較 重癥肺炎組CD3、CD4、CD8及CD4/CD8比值均低于非重癥肺炎組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或0.01），見表1。

表1 兩組患兒T細(xì)胞亞群水平的比較

2.2 重癥肺炎患兒急性期與恢復(fù)期T細(xì)胞亞群水平的比較 重癥肺炎患兒恢復(fù)期 CD3、CD4、CD8及 CD4/CD8比值均高于急性期，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或 0.01），見表 2。

3 討論

AdV為DNA病毒，在感染機(jī)體細(xì)胞內(nèi)復(fù)制的周期中，可引起細(xì)胞的溶解和死亡。在引起壞死的過程中，中性粒細(xì)胞、炎性介質(zhì)也起著重要作用[6]。當(dāng)AdV感染機(jī)體時，首先會激發(fā)炎癥反應(yīng)，這是人體進(jìn)行抵御的首要反應(yīng)，會引起細(xì)胞因子和淋巴細(xì)胞亞群發(fā)生紊亂，嚴(yán)重時可導(dǎo)致全身炎癥反應(yīng)綜合征[7]。

表2 重癥肺炎患兒急性期與恢復(fù)期T細(xì)胞亞群水平的比較

T淋巴細(xì)胞來源于骨髓，在胸腺內(nèi)分化發(fā)育成熟后，移行至外周淋巴組織的T細(xì)胞區(qū)，執(zhí)行特異性免疫應(yīng)答，參與機(jī)體中重要的細(xì)胞免疫功能。CD4是協(xié)助發(fā)揮免疫功能的細(xì)胞，CD3為成熟的T細(xì)胞，CD8則是免疫抑制細(xì)胞，而CD4/CD8的比值則是綜合反映了機(jī)體整體的免疫狀態(tài)。當(dāng)機(jī)體受感染時，淋巴細(xì)胞亞群的數(shù)量或功能發(fā)生改變，機(jī)體就會出現(xiàn)免疫功能紊亂，從而引起疾病的發(fā)生與發(fā)展。當(dāng)CD3、CD4 T淋巴細(xì)胞受刺激后，大量增值分化成Th1、Th2淋巴細(xì)胞，具有廣泛的免疫應(yīng)答正調(diào)節(jié)作用，反映機(jī)體免疫調(diào)控情況[8]。Th1介導(dǎo)細(xì)胞免疫過程，Th2參與體液免疫過程。CD3、CD8 T淋巴細(xì)胞為抑制/殺傷性T淋巴細(xì)胞，多表達(dá)在Ts淋巴細(xì)胞和細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞（Tc細(xì)胞）上，Ts淋巴細(xì)胞對免疫應(yīng)答起負(fù)調(diào)節(jié)作用，具有抑制機(jī)體免疫應(yīng)答或細(xì)胞毒的功能。正常情況下CD4 T淋巴細(xì)胞與CD8 T淋巴細(xì)胞相互制約，產(chǎn)生適度的免疫應(yīng)答，既能清除異物，又不損傷機(jī)體自身組織，使機(jī)體免疫功能處于動態(tài)平衡狀態(tài)[9]。

本研究發(fā)現(xiàn)，腺病毒肺炎重癥組患兒外周血CD3 T淋巴細(xì)胞、CD4輔助性T細(xì)胞和CD8 T淋巴細(xì)胞的比例較非重癥時降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示AdV感染患兒機(jī)體的細(xì)胞免疫功能下降，與既往相關(guān)研究結(jié)論相符[10-12]。CD4/CD8的比值是反應(yīng)輔助性T細(xì)胞與抑制性T細(xì)胞之間平衡的重要指標(biāo)，正常情況下，兩者互相制約達(dá)到平衡。本研究中AdV感染時重癥組較非重癥組患兒外周血CD4/CD8的比值均顯著降低，提示AdV感染后機(jī)體存在細(xì)胞免疫功能的紊亂。在恢復(fù)期外周血CD3 T淋巴細(xì)胞、CD4/CD8 T淋巴細(xì)胞的比例較急性期有明顯回升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示免疫紊亂重新達(dá)到平衡。

綜上所述，AdV所致重癥肺炎發(fā)生時，患兒外周血CD3 T淋巴細(xì)胞、CD4輔助性T細(xì)胞、CD8 T淋巴細(xì)胞的比例及CD4/CD8的比值均降低,提示AdV感染患兒機(jī)體的細(xì)胞免疫功能下降，經(jīng)治療后，恢復(fù)期這些指標(biāo)不同程度回升，提示檢測這些指標(biāo)，可能有利于重癥肺炎的治療效果判斷，為腺病毒肺炎的嚴(yán)重程度和療效判斷提供客觀監(jiān)測依據(jù)。