大鼠矽肺模型腸道菌群初級分離培養及鑒定

林高杰 陳賀佳 何松 王瑾

【摘要】矽肺是塵肺中最為常見的一種類型，是由于長期吸入大量游離二氧化硅粉塵所引起，以肺部廣泛的結節性纖維化為主的疾病。矽肺病發病隱匿，潛伏期長，發病機制較為復雜[1]。近年來，研究發現腸道菌群與多種疾病存在關系，其中哮喘、肺炎和肺結核等呼吸道疾病的發生過程中也發現腸道菌群存在著重要的作用[2]。矽肺病作為肺部疾病的一種，伴有咳嗽和呼吸不暢等呼吸道疾病的癥狀。因此，研究腸道菌群中的關鍵菌和矽肺的關系，可以為了解砂肺病的致病機制以及治療肺部疾病提供新的思路。

【關鍵詞】矽肺；腸道菌群；沙門菌；金黃色葡萄球菌

1 材料與方法

1.1實 驗材料與儀器

SS瓊脂平板蓋、血瓊脂平板、營養瓊脂平板、五糖發酵管、載玻片、酒精燈、試管、接種環、鑷子；HPOE-MED8050動式染塵機、恒溫搖床、高壓滅菌鍋、超凈工作臺；

1.2 實驗方法

1.2.1 矽肺模型的建立

采用HPOE-MED8050動式染塵控制系統構建Wistar大鼠矽肺模型。在溫度20℃～25℃、濕度70%～75%、柜內壓力-50Pa～+50Pa、氧含量20%、SiO2流動速3.0～3.5ml/min，SiO2濃度2000mg/m3條件下染塵，每天染塵2h，共8w。

1.2.2 細菌的分離與培養

用無菌接種環截取矽肺組和對照組小鼠糞便樣品中段里部在SS瓊脂和血瓊脂平板上分區劃線分離細菌，于37℃恒溫培養箱中培養18-24h培養觀察。

1.2.3 細菌生化實驗

將平板上的細菌接種到液體營養肉湯中于37℃，180rmp恒溫搖床中培養18-24h培養，取菌液做相關的生化實驗。

1.2.4 藥敏實驗

抗菌藥物藥敏試驗采用紙片擴散法[3]。分別取菌均勻密布圖在兩只瓊脂平板表面。在每一種細菌的瓊脂平板上，分別放置頭抱霉素、用抗菌藥物為青霉素、慶大霉素、氯霉素、羅紅霉素和左氧氟沙星的干燥藥物濾紙圓片，各片間距要相當。

2 結果與分析

2.1 培養特性

SS瓊脂中有的膽酸鹽可抑制革蘭氏陽性菌，構櫞酸鹽和煌綠能抑制大腸埃希菌，因此觀察SS瓊脂平板上形成有可能是沙門菌或志賀菌。有些細菌可以產生溶血素，溶解血瓊脂平板上的紅細胞會出現溶血環，觀察血瓊脂平板上出現β完全溶血環可能是葡萄球菌或鏈球菌。

2.2 生化實驗

分別取SS瓊脂平板無色透明的菌落的和血瓊脂平板和有溶血環的菌落隨機挑選上10個菌落接種到、半固體和固體培養基中過夜培養，取OD值0.6-0.8之間菌液做生化實驗，進一步鑒定細菌，如表1。生化實驗鑒定結果可以得出SS瓊脂平板上的是沙門菌，而血8瓊脂平板上的是金黃色葡萄球菌。

2.3 藥敏實驗

隨機選取的金黃色葡萄球菌對5種抗生素的藥敏實驗中，金黃色葡萄球菌對于青霉素、氯霉素等耐藥；對慶大霉素的耐藥是中介；對左氧氟沙星和羅紅霉素敏感度。而沙門菌對于羅紅霉素以及青霉素的耐藥；而氯霉素的耐藥中介；對慶大霉素和左氧氟沙星敏感。

3 討論

腸道菌群是寄居在人體腸道內微生物群落的總稱，對于人類機體是有益的。但在病理因下，紊亂的腸道菌和毒素可直接損傷腸黏膜，而且全身炎性反應綜合癥也與細菌或毒素移位是有關系的[4]。我們所分離鑒定出來的沙門菌和金黃色葡萄球菌都與腸炎有著密切。而且金黃色葡萄球菌引起的肺炎，占成人肺炎的2～3%，沙門菌也能夠引起局部的肺部感染。因此，矽肺的發生過程中可能也與這兩種細菌存在著關系。多因原發疾病是由長期用抗生素引起腸道菌群失調所致，抗生素敏感菌株受到抑制，耐藥的菌株趁機繁殖[5]。因此藥敏實驗為臨床指導用藥提供一定的指導性作用。想要具體探究腸道菌群以及其代謝物與矽肺的關系，我們下一步將進行16SrDNA測序梳理清兩者之間的聯系。

（通訊作者：王瑾）

參考文獻

[1]中華人民共和國國家衛生和計劃生育委員會.關于2016年職業病防治工作情況的通報[EB/OL].http：//www.nhfpc.gov.cn/jkj/s5899t/201712/c46227a95f054f5fa75a40c4db05bb37.shtml.

[2]于洪志，吳琦.腸道菌群與肺部疾病關系的研究緊張[J].天津醫藥，2017，25（18）：1380-1382.

[3]譚瑤，趙清.K-B紙片擴散法藥敏試驗[J]，檢驗醫學與臨床，2010，20：2290-2291.

[4]Suliburk J，Helmm K，Mooreet al.The gut in systemicinflammatory response syndronlcand sepsis.Enzyme systems fightingnmhiple organ failure[J J Eur SurgRes，2008，40（02）：184-189.

[5]Hooper LV，Littman DR，MacphersonAJ.Interactions betweenthe microbiota and theimmune system[J].Science，2012，336（6086）：1268-1273.doi：10.1126/science.1223490.