氯沙坦聯合前列腺素E1與ACEI類藥物對糖尿病腎病大鼠的藥效學差異比較

陳璐　張鑫淼　李更曉

[摘要] 目的 構建大鼠糖尿病腎病模型，對比氯沙坦聯合前列腺素E1與ACEI類藥物對模型大鼠的藥效學差異。方法 大鼠靜脈注射鏈脲佐菌素聯合食物誘導糖尿病腎病大鼠模型，按其給藥方式分為空白組、模型對照組、卡托普利組、氯沙坦組、前列腺素E1組、氯沙坦聯合前列腺素E1組，造模成功后連續用藥4周，觀察其血糖（Glu）、糖化血紅蛋白（HbA1c）、血胰島素（FINS）、血尿素氮（BUN）、血肌酐（Scr）、血膽固醇（CH）、血甘油三酯（TG）、尿量（Vol）、尿肌酐（Cr）、尿蛋白（Pro）、腎指數（RI）、腎小球直徑和面積。 結果 與空白組相比，模型對照組Glu、HbA1c、BUN、Scr、CH、TG、Vol、Pro、FINS、RI明顯上升（P<0.01），Cr明顯降低（P<0.01）。各給藥組較模型對照組Glu、FINS、HbA1c、BUN、Scr、CH、TG、Vol、Pro、RI降低，Cr升高，腎小球直徑、面積、腎指數明顯改善（P<0.05）。 結論 氯沙坦與前列腺E1聯合應用較單獨使用ACEI類藥物藥效更突出，對糖尿病腎病的臨床治療有重要的指導作用。

[關鍵詞] 糖尿病腎病；聯合用藥；氯沙坦；前列腺素E1

[中圖分類號] R587.2；R692 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-9701（2018）12-0035-04

Comparison of pharmacodynamic differences between losartan combined with prostaglandin E1 and ACEI drugs in diabetic nephropathy rats

CHEN Lu ZHANG Xinmiao LI Gengxiao YU Hang WANG Kuo TONG Lei

Mudanjiang Medical College， Mudanjiang 157011， China

[Abstract] Objective To establish a rat model of diabetic nephropathy and compare the pharmacodynamic differences between ACEIs and losartan combined with prostaglandin E1 in model rats. Methods Rats with diabetic nephropathy were induced by intravenous injection of streptozotocin combined with food and were divided into blank group， model group， captopril group， losartan group， prostaglandin E1 group and combination group according to their administration methods. After the model was successfully administered for 4 weeks， blood glucose（Glu）， HbA1c， FINS， BUN， Scr， blood cholesterol， blood triglyceride（TG）， urine volume（Vol）， urine creatinine（Cr）， urine protein（Pro）， kidney index（RI）， glomerular diameter and area were observed. Results Compared with those of the blank group， the Glu， HbA1c， BUN， Scr， CH， TG， Vol， Pro， FINS and RI in the model group increased significantly（P<0.01）， and Cr decreased significantly（P<0.01）. Compared with those of the model group， the Glu， FINS， HbA1c， BUN， Scr， CH， TG， Vol， Pro and RI decreased， and Cr increased in the administration groups， and glomerular diameter， area， and kidney index in the administration groups improved significantly（P<0.05）. Conclusion The combination of losartan and prostate E1 is more effective than ACEI alone， and the former play an important guidance role in the clinical treatment of diabetic nephropathy.

[Key words] Diabetic nephropathy； Combination medication； Losartan； Prostaglandin E1

糖尿病腎病（diabetic nephropathy，DN）是糖尿病導致微血管病變的典型表現之一，不良飲食習慣、控制血糖不良、血壓血脂異常升高等因素會加劇腎臟損害，直至腎衰竭[1]。在現階段臨床上主要應用ACEI類藥物治療該疾病，在1981年卡托普利的應用得到批準后，藥物發展迅速，在治療DN上取得顯著的療效[2]。本實驗選取典型代表藥卡托普利進行實驗，該藥物可以改善微血管血流，擴張腎血管，達到治療目的，已被廣泛應用，但臨床證實該類藥物具有刺激性干咳的副作用，多數患者都無法承受。氯沙坦為AT1受體拮抗劑的代表藥，與ACEI比較具有作用專一的特點。PGE1是人體內存在的一種生物活性物質，具備能夠分布在受損血管的特性，改變其血液流變學，可以擴張血管，并且對血小板的聚集起到抑制。本實驗運用藥理學實驗方法，觀察聯合用藥與單獨用藥的藥效差異，并揭示其對糖尿病腎病腎臟功能的改善作用。現報道如下。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及試劑

健康SD大鼠72只，雌雄各半，體型勻稱，雄性大鼠體重約（350±50）g，雌性大鼠體重約（230±40）g，約10周齡，購于長沙市天勤生物技術有限公司。飼養條件：由牡丹江醫學院動物實驗研究中心飼養，許可證編號為scxk（湘）2014-0010，實驗方案經本單位實驗動物倫理委員會批準，實驗動物飼養及實驗操作符合實驗動物倫理學要求。實驗顆粒鼠飼料由江蘇省協同醫藥生物工程有限責任公司提供，蘇飼證（2014）01008。高脂高糖飼料[3]選自北京博泰宏達生物技術有限公司；尿蛋白定量試劑盒由上海晶抗生物工程有限公司提供，批號JKSJ-1820；肌酐試劑盒由北京博邁斯科技有限公司提供，批號K625-100；葡萄糖液體試劑盒由北京普利萊基因技術有限公司提供，批號E1010；膽固醇試劑盒由上海市協和梅迪克斯醫療器械有限公司提供，批號58236；胰島素試劑盒由上海晨易生物科技有限公司提供。

1.2 實驗藥物

卡托普利片（卡托普利）由浙江南洋藥業有限公司提供；科素亞（氯沙坦）由美國默沙東制藥廠提供；前列地爾（前列腺素）由杭州志聚生物技術有限公司提供，鏈脲佐菌素（STZ）Sigma S-1290。

1.3 實驗設備

全自動生化儀采用廣州東唐電子科技有限公司DOTOP型；紫外分光光度計采用上海元析有限公司UV759S型；離心機采用北京時代北利離心機有限公司DT5-2型。

1.4 動物分組及病理模型的建立

健康SD大鼠72只隨機分為6組，每組12只，分別為空白組、模型對照組、卡托普利組、氯沙坦組、前列腺素E1組、氯沙坦聯合前列腺素E1組。空白組采用正常顆粒飼料，動物飲用純凈水喂養，模型對照組以高脂高糖飼料配12%果糖水飼喂6周后，經尾靜脈以60 mg/kg劑量注射STZ一次[4-7]，其他各給藥組采取相同方法誘導。通過檢測大鼠血糖變化、腎功能變化與腎組織病理學改變驗證糖尿病腎病模型是否構建成功，未成功者退出模型組。

1.5 實驗動物的給藥及指標檢測

空白組注射10 mL/kg的0.9%的NaCl qd，卡托普利組給予10 mg/（kg·d）的卡托普利 qd，氯沙坦組給予80 mg/（kg·d）qd，前列腺素E1組給予20 μg的前列地爾 qd，氯沙坦聯合前列腺素E1組給予氯沙坦80 mg/（kg·d）加前列地爾20 μg qd，上午9時給藥，連續靜脈注射4周，實驗結束前，收集24 h尿液進行稱量，用離心機2200 r/min，離心10 min，去沉淀，在-20℃保存待測，之后稱大鼠體重量。使用戊巴比妥鈉對大鼠進行腹腔麻醉，取腹主動脈血[8]，離心取血清檢測特征性生化指標。取左側腎臟測其質量，隨后剝離被膜，用17%的福爾馬林液固定，常規制片后使用光鏡測量腎小球的直徑和面積并計算腎臟指數RI（RI=左腎質量/大鼠體質量×100）。

1.6 統計學分析

所得數據均錄入SPSS19.0統計軟件進行單因素方差分析，組間比較采用LSD法，計量資料以均數±標準差（x±s）表示，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 氯沙坦聯合前列腺素E1對糖尿病腎病大鼠Glu、HbA1c、FINS影響

六組血糖之間比較差異具有統計學意義（F=4.380，P<0.01），六組糖化血紅蛋白之間比較差異具有統計學意義（F=12.195，P<0.01），六組血胰島素之間比較差異具有統計學意義（F=5.682，P<0.01）。

糖尿病腎病模型對照組Glu、HbA1c、FINS值與空白組相比明顯升高（P<0.01），氯沙坦聯合前列腺素E1組與模型對照組Glu、HbA1c、FINS值相比明顯降低（P<0.05或P<0.01），卡托普利組、氯沙坦組、前列腺素E1組Glu、HbA1c、FINS與模型對照組相比亦均有降低，差異有統計學意義（P<0.05或P<0.01），但對于Glu、HbA1c、FINS的降低氯沙坦聯合前列腺素E1組與卡托普利組比較更為明顯，其差異有統計學意義（P<0.05），見表1。

2.2 氯沙坦聯合前列腺素E1對糖尿病腎病大鼠腎功能的影響

六組之間血清尿素氮比較差異具有統計學意義（F=7.696，P<0.01），六組血清肌酐之間比較差異具有統計學意義（F=3.585，P<0.01），六組血清膽固醇之間比較差異具有統計學意義（F=14.850，P<0.01），六組甘油三酯之間比較差異具有統計學意義（F=15.516，P<0.01）。

糖尿病腎病模型對照組BUN、Scr、CH、TG與空白組相比明顯升高（P<0.01），表明大鼠腎功能受損，各給藥組血清中BUN含量相對于模型對照組降低，有統計學意義（P<0.01或P<0.05），各給藥組血清中Scr、TG含量相對于模型對照組降低有統計學意義（P<0.01或P<0.05），而氯沙坦聯合前列腺素E1組相對于卡托普利組對于Scr、CH的降低亦有統計學意義（P<0.05），除氯沙坦聯合前列腺素E1組外其他各給藥組血清中CH含量相對于模型對照組無統計學意義（P>0.05），提示通過聯合給藥相對于單獨應用卡托普利對于降低血清中CH及Scr含量有明顯效果。見表2。

2.3 氯沙坦聯合前列腺素E1對糖尿病腎病大鼠腎臟濾過功能的影響

六組尿量之間比較差異具有統計學意義（F=20.826，P<0.01），六組尿肌酐之間比較差異具有統計學意義（F=11.428，P<0.01），六組尿蛋白之間比較差異具有統計學意義（F=5.461，P<0.01）。

糖尿病腎病模型對照組與空白組相比尿量（Vol）、尿蛋白（Pro）水平增加有統計學意義（P<0.01），尿肌酐（Cr）水平降低有統計學意義（P<0.01），表明腎濾過功能受損，肌酐清除功能下降。各給藥組與模型對照組相比尿量的減少及尿肌酐含量的升高有統計學意義（P<0.01或P<0.05），各給藥組尿蛋白含量相對于模型對照組降低有統計學意義（P<0.01或P<0.05）；其中氯沙坦聯合前列腺素E1組相對于卡托普利組對于尿肌酐含量的升高有統計學意義（P<0.01），而氯沙坦聯合前列腺素E1組相對于卡托普利組對于尿蛋白含量的降低有統計學意義（P<0.01），提示通過聯合用藥對于DN大鼠腎濾過功能指標的改善較單獨應用卡托普利效果顯著，見表3。

2.4 氯沙坦聯合前列腺素E1對糖尿病腎病大鼠腎臟組織形態的影響

六組腎指數之間比較差異具有統計學意義（F=11.593，P<0.05），六組腎小球面積之間比較差異具有統計學意義（F=13.192，P<0.05），六組腎小球直徑之間比較差異具有統計學意義（F=8.439，P<0.05）。

糖尿病腎病模型對照組與空白組相比，腎小球直徑、腎小球面積及腎指數均有增大（P<0.01），可見腎臟出現改變，多數腎小球直徑顯著增大，并伴有基底膜增厚、系膜細胞增生等表現，各給藥組與模型對照組相比，腎臟病變及指標均有一定改善，而氯沙坦聯合前列腺素E1組較卡托普利組對腎臟形態各項指標改善作用較為顯著（P<0.05）。見表4。

3 討論

在本研究中，大鼠在實驗前均經嚴格挑選，為健康大鼠，避免血壓血脂等干擾因素對實驗結果的影響。經造模后，對實驗指標進行測定，結果顯示尿素氮和血肌酐升高，尿蛋白濾過率明顯升高，說明大鼠糖尿病腎病模型的構建是成功的，該模型可用于比較ACEI類藥物與氯沙坦聯合前列腺素E1的藥效差異[9-13]。

對于糖尿病腎病的患者使用ACEI藥物是國內外都比較常用的方法之一，但經臨床用藥的實踐證明，ACEI存在起效慢、血管神經水腫、刺激性干咳、高血鉀等一系列不可避免的副作用[14]。

氯沙坦對腎臟疾病具有很好的治療效果，對血壓有很好的降低作用，對蛋白尿的降低也具有顯著的改善作用，前列地爾可以阻止血管收縮，改善并增加其病變的腎血液流量，進而改善腎小球的微環境，改善腎小球的濾過率，降低尿中排泄的蛋白含量[15，16]。

在本實驗中，通過實驗數據的分析和總結發現，氯沙坦與前列腺素E1二者聯合應用對DN大鼠Glu、Scr、CH、Cr、Pro等多個指標改善作用優于單獨應用卡托普利，此實驗結果為氯沙坦聯合前列腺素E1對于糖尿病腎病的臨床治療提供了一定的實驗依據。

[參考文獻]

[1] 馬興杰，楊麗霞. 糖尿病腎病蛋白尿形成機制[J].重慶醫學，2011，40（20）：2064-2067.

[2] Breyer A，Hunsicker LG，Bain RP，et al. Angiotensim converting emgrme inhibitor in disbetienephrapathy[J].Kidney Int，1994，45（suppl）：S156.

[3] 郭嘯華，劉志紅，李恒，等.高糖高脂飲食誘導的2型糖尿病大鼠模型及其腎病特點[J].中國糖尿病雜志，2002，10（5）：290-294.

[4] 丁鶴林，徐明彤，陳黎紅. 洛沙坦降低糖尿病大鼠腎組織膜3型基質金屬蛋白酶mRNA的表達[J]. 中華內分泌雜志，2002，18（4）：264-267.

[5] 楊亦彬，張翥，蘇克亮. 鏈脲佐菌素誘導大鼠糖尿病腎病模型方法學討論[J]. 華西醫學，2005，20（2）：299-300.

[6] 李偉，張紅，股松樓. 不同劑量鏈脲佐菌素誘導SD大鼠糖尿病腎病模型的研究[J].徐州醫學院學報，2006， 26（1）：52-55.

[7] Wang Y，Li Q，Sun SZ，et al.Effect of benazcpril on renal function and kidney espression of matrix metalloproteinasc 2 and tissue inhibitor of metalloproteinasc 2 in diabetic rats[J]. ChinMed J，2006，119（10）：814-821.

[8] 宋清斌，車兆義，鄒悅.實驗大鼠采血方法的選擇[J].中國組織工程研究與臨床康復，2008，12（50）：9990-9991.

[9] 梁琳瑯，劉國良. 糖尿病性蛋白尿電荷選擇性研究[J].中國內分泌代謝雜志，1996，12（3）：138-139.

[10] 陸婭梅. 尿微量蛋白測定對2型糖尿病的臨床價值探討[J].當代醫學，2010，16（1）：73.

[11] 劉健，王琴，車霞靜，等.2型糖尿病患者非糖尿病腎臟疾病的患病率分析[J].中華內分泌代謝雜志，2010，26（6）：460-464.

[12] 陳宇，周永華，韓曉駿，等.2型糖尿病患者血清膽紅素水平與糖尿病腎病關系的研究[J].臨床薈萃，2011，26（4）：292-295.

[13] Junod A，Lambert AE，Orci L，et al.Studies on diabetogenic action of streptozotocin[J].Proc Soc Exp Biol Med，1967，126（1）：201-205.

[14] 周進. ACEI治療糖尿病腎病的研究進展[J]. 深圳中西醫結合雜志，2014，24（10）：179-180.

[15] 鄧思平，梁一江，黃漢光. 纈沙坦和前列地爾聯合治療糖尿病腎病的療效觀察[J].國際醫藥衛生導報，2011， 17（7）：22-25.

[16] 張國艷，張浩，牛效清. 前列地爾聯合貝那普利治療糖尿病腎病蛋白尿的療效[J]. 當代醫學，2012，18（4）：145-146.

（收稿日期：2017-12-19）