對豬圓環病毒2型抗體水平的分析與研究

羅建平

近年來，由于國家政策的大力扶持，我國的養殖業生產得到了空前的穩步發展，豬的養殖業更是在大步躍近。但是，豬病的危害和影響不容忽視，尤其是仔豬斷奶后出現多系統衰竭綜合征等現象，該病癥與豬圓環病毒關系密切，是豬圓環病毒相關疾病（PCVAD）的重要病源，本文通過采用ELISA（酶聯免疫吸附試驗en-zymelinkedimmunosorbentassay， ELISA）試劑的免疫檢測技術，進行了檢測抗體水平分析與研究，以期有效評估和掌握的豬圓環病毒2型滅活疫苗對豬場的作用，減少仔豬高死亡率，有效控制該病蔓延。

1 關于豬圓環病毒與免疫檢測技術介紹

1.1 豬圓環病毒是世界公認的免疫抑制病之一，該病是由豬圓環病毒感染所引起的以免疫抑制為特征的一類病毒性傳染病，自1991年在加拿大豬群中首次暴發以后，已成為當今危害世界養豬業最嚴重的病毒之一，該病毒是引起仔豬斷奶后出現多系統衰竭綜合征、增生性壞死性間質性肺炎、豬皮炎與腎病綜合癥、新生仔豬先天性震顫、懷孕母豬繁殖障礙等多種疾病的統稱，抑制豬體免疫功能，仔豬會伴有咳嗽、呼吸困難、逐漸消瘦等癥狀，隨著病程的增長，容易繼發其他疾病，如：附紅細胞體病、弓形體病、喘氣病、豬瘟等，給養豬業造成了巨大的經濟損失。

1.2 豬圓環病毒免疫檢測。常用的方法有酶聯免疫吸附試驗和酶免疫組化法，前者測定可溶性抗原或抗體，后者檢測組織或細胞表面抗原。將抗原一抗體反應的特異性與酶催化作用的高效性相結合，通過酶作用于底物后的顯色反應判定結果。可用目測定性，也可用酶標測定儀測定光密度（OD）值反應抗原含量，靈敏度可達每毫升納克（ng）水平甚至皮克（pg）水平，它常用于標記的酶有辣根過氧化物酶（ horseradishperoxidase，HRP）、堿性磷酸酶（alkalinephosphatase，AP）等。

2 豬圓環病毒2型抗體水平免疫檢測分析

2.1 操作方法。嚴格按試劑盒說明書操作，取抗原包被板，加入已稀釋好的洗滌液200υL，倒掉，重復洗滌共計洗板2次，最后一次在吸水紙上拍干。將稀釋好的待測血清、陽性和陰性對照血清各取lOOυL加入到抗原包被板孔中，陽性對照和陰性對照各設2孔（輕輕搖勻孔中樣品，勿溢出），用封板膜覆蓋包被板，置37℃溫箱中溫浴30min。棄掉封板膜，甩掉板孔中的溶液，每孔加入稀釋好的洗滌液200υL，棄取洗滌液.重復洗滌共計洗滌5次，最后一次在吸水紙上拍干。每孔加酶標記物lOOυL，置37℃溫箱中溫浴30min。再次棄掉混合液并對抗原包被板進行洗滌拍干。將洗滌并拍干好的抗原包被板中每孔加入底物A50υL、底物B50υL混勻，室溫（20至25℃）溫室避光顯色lOmin，最后每孔加入終止液50υL。lOmin內用酶標儀測定并記錄各孔在630nm波長處的吸光度（OD）值（測定前輕輕搖勻，勿溢出）。根據OD值的大小，進行樣品抗體水平的判斷。

2.2 實驗分析

2.2.1 隨著豬年齡的增長，不同生長階段的豬感染情況是有差異的，在仔豬（6至8周齡，發病率為20%至60%）和育肥豬生長階段的豬感染機率高，豬體抗體水平較低，可引起仔豬淋巴系統疾病、漸進性體重下降、呼吸道癥狀及黃疸，造成患豬免疫機能下降、生產性能降低。此時，應及時加強免疫措施，積極做好疫病防控重點，有針對性地控制病情的流行。

2.2.2 基于豬圓環病毒2型免疫效果全年比較穩定，與季節性因素的影響不大，因此，養殖人員應做好日常管理工作，加強衛生消毒意識，提高飼養管理水平和豬群機體自身免疫抗體水平，防患于未然。

2.3 結果判定。陽性對照孔平均OD630nm≧1.O，陰性對照孔平均OD630nm≤0.3，于波長630nm處測酶標儀上各孔OD630nm的值，樣品OD630nm>0.42，判為陽性，則證明實驗成立。

3 注意事項

3.1 由于每個豬的健康情況不同，所以可能會導致試驗結果有一定的影響。本文提到的試驗方法雖常廣泛應用于各種抗原和抗體的測定實驗中。但除在檢測中，會受到標本因素、試劑因素、操作因素等的影響，而導致ELISA試驗測定出現結果錯誤。

3.2 血清標本在采集過程中應避免標本出現嚴重溶血現象：冰凍保存的血清樣本應防止反復凍融；樣本保存過程中若出現非細菌污染所致的渾濁或絮狀物質，應離心后取上清液進行檢測：樣本的采集及血清分離過程中應盡量避的免細菌污染。

4 結論

豬圓環病毒2型抗體為在控制豬群豬圓環病毒2型的疫情，以及制定合理的綜合防治措施奠定基礎。

參考文獻：

[1]孟憲梅，吳天鵬.豬圓環病毒2型和豬瘟病毒抗體檢測與分析[J].中國動物檢疫，2012，29（10）：39-40.

[2]張馨玉，徐立波.我國豬圓環病毒2型的流行情況和分析[J].中國豬業，2007（5）：37-40.

[3]趙芳，劉承澤.豬圓環病毒2型流行情況監測及分析[J]，云南畜牧獸醫.2011（6）：7-8.