4種常用水產(chǎn)藥物對(duì)大鱗鲃的急性毒性試驗(yàn)

于振海，朱永安，孟慶磊，朱樹人，王錫榮

( 山東省淡水漁業(yè)研究院，山東省淡水水產(chǎn)遺傳育種重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東 濟(jì)南 250013 )

大鱗鲃(Barbuscapito)屬鯉科、鲃亞科、鲃屬，體質(zhì)量可達(dá)5～10 kg，具有耐鹽堿、食性廣、生長(zhǎng)速度快、肉質(zhì)鮮美、抗逆性強(qiáng)等優(yōu)良特性[1-5]。大鱗鲃主要分布于西亞的里海和咸海水域，是當(dāng)?shù)孛F的大型經(jīng)濟(jì)魚類之一，為促進(jìn)鹽堿水域的開發(fā)和利用，2003年引入我國(guó)，旨在增加內(nèi)陸鹽堿地水域的養(yǎng)殖種類。

大鱗鲃為引進(jìn)種，在我國(guó)養(yǎng)殖的時(shí)間較短，關(guān)于大鱗鲃疾病的報(bào)道極少，僅有2016年天津天祥水產(chǎn)有限公司出現(xiàn)的不明原因極度貧血而大量死亡的個(gè)例[6]。大鱗鲃雖未出現(xiàn)大規(guī)模疾病爆發(fā)，但對(duì)于疾病應(yīng)防重于治。隨著大鱗鲃人工繁育技術(shù)成熟，養(yǎng)殖規(guī)模逐漸擴(kuò)大，苗種的抗病力低于成魚，更易染病。藥物防治病害是有效且經(jīng)濟(jì)的方法[7]。針對(duì)魚類常見的錨頭鳋(Lernaea)、中華鳋(Sinergasilus)、車輪蟲、指環(huán)蟲、線蟲幼體等寄生蟲性疾病和弧菌(Vibrio)、嗜水氣單胞菌(Aeromonashydrophila)、愛德華氏菌(Edwardsiella)等細(xì)菌引起出血、爛鰓、癤瘡、腐皮等細(xì)菌性疾病，筆者選用阿維菌素、敵百蟲作為抗寄生蟲藥物，選用聚維酮碘、三氯異氰尿酸作為殺菌藥物[8]，通過急性毒性試驗(yàn)確定藥物的安全用量和毒性等級(jí)，為大鱗鲃養(yǎng)殖中合理用藥、安全用藥提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗(yàn)用魚體長(zhǎng)(17.9±1.6) cm、體質(zhì)量(63.4±19.3) g，試驗(yàn)前在試驗(yàn)條件下暫養(yǎng)3 d，日投喂1次。試驗(yàn)開始前24 h停食，選游泳活潑，無病、無傷、無畸形的魚進(jìn)行試驗(yàn)。試驗(yàn)用藥分別為阿維菌素、聚維酮碘、三氯異氰尿酸和敵百蟲，藥品規(guī)格及生產(chǎn)廠家等見表1。

表1 4種試驗(yàn)藥物的規(guī)格與成分

1.2 方法

2017年6月，采用靜態(tài)試驗(yàn)法[9]，在80 cm×60 cm×45 cm、容水100 L的白色塑料箱內(nèi)放魚10尾，進(jìn)行試驗(yàn)。每個(gè)周期4 d。試驗(yàn)用水為池塘養(yǎng)殖用水，水質(zhì)符合漁業(yè)水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)(GB 11607—89)，水溫(24.1±1.5) ℃、pH 8.41±0.12、溶解氧(6.1±0.9) mg/L。每日測(cè)1次水溫、pH、溶解氧含量。試驗(yàn)期間不投餌。

先采用靜態(tài)方式進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)，每個(gè)預(yù)試驗(yàn)質(zhì)量濃度組放入5尾魚，不設(shè)平行組，持續(xù)48～96 h。每日至少記錄2次各容器內(nèi)的死亡魚數(shù)，并及時(shí)取出死亡個(gè)體。

根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，參照《水和廢水監(jiān)測(cè)分析方法》[10]，每種藥物設(shè)5個(gè)梯度組(表2)和一個(gè)空白對(duì)照組，每個(gè)梯度組設(shè)2個(gè)平行。溶液調(diào)節(jié)至相應(yīng)質(zhì)量濃度后，從馴養(yǎng)魚群中隨機(jī)取出試驗(yàn)魚迅速放入各試驗(yàn)容器中。試驗(yàn)魚在20 min內(nèi)分組完畢。

24、48、72、96 h后檢查試驗(yàn)魚狀況，以試驗(yàn)對(duì)象失去活力、對(duì)外界刺激無反應(yīng)為死亡標(biāo)準(zhǔn)[11]。試驗(yàn)開始后8 h連續(xù)觀察各處理組魚的狀況，記錄24、48、72 h和96 h的死亡數(shù)，記錄異常行為，及時(shí)清除死魚。

1.3 數(shù)據(jù)處理

半致死質(zhì)量濃度(LC50，mg/L)、安全質(zhì)量濃度(SC，mg/L)[12]按下式計(jì)算:

logLC50=xm-d(∑ωB-0.5)

SC=ρ1×0.3/(ρ2/ρ1)2

式中，xm為死亡組最大劑量的對(duì)數(shù)，d為相鄰質(zhì)量濃度的對(duì)數(shù)差，ωB為各組的死亡率(%)，∑ωB為各組死亡率之和(%)；ρ1為48 h半致死質(zhì)量濃度(mg/L)；ρ2為24 h半致死質(zhì)量濃度(mg/L)。

2 結(jié) 果

整個(gè)試驗(yàn)過程中，對(duì)照組大鱗鲃無死亡。阿維菌素、聚維酮碘、三氯異氰尿酸和敵百蟲藥物組大鱗鲃的毒性結(jié)果見表2。

2.1 阿維菌素試驗(yàn)結(jié)果

阿維菌素急性中毒的大鱗鲃，少動(dòng)，對(duì)外界刺激反應(yīng)遲鈍，游動(dòng)時(shí)身體會(huì)失去平衡。阿維菌素質(zhì)量濃度為1.496～5.000 mg/L的試驗(yàn)組，隨著質(zhì)量濃度的增加，大鱗鲃的死亡率也逐漸增大。對(duì)照組和質(zhì)量濃度為1.000 mg/L試驗(yàn)組未見非正常現(xiàn)象，二者96 h死亡率均為0；當(dāng)質(zhì)量濃度為5.000 mg/L時(shí)，約6 h出現(xiàn)死亡，24 h死亡率為100%。阿維菌素對(duì)大鱗鲃的24、48 h和96 h的半致死質(zhì)量濃度分別為3.340、2.840 mg/L和2.621 mg/L，安全質(zhì)量濃度為0.616 mg/L(表3)。

表2 4種藥物對(duì)大鱗鲃的致死率

2.2 聚維酮碘

在聚維酮碘質(zhì)量濃度為17.800～100.000 mg/L組中大鱗鲃反應(yīng)遲鈍，游泳能力和呼吸能力減弱，最后死亡，而且隨聚維酮碘質(zhì)量濃度的升高，死亡率也逐漸升高，而對(duì)照組和質(zhì)量濃度為10.000 mg/L試驗(yàn)組未出現(xiàn)不正常現(xiàn)象。100.000 mg/L試驗(yàn)組的24 h死亡率為100%。聚維酮碘對(duì)大鱗鲃的24、48 h和96 h半致死質(zhì)量濃度分別為74.967、63.077 mg/L和50.106 mg/L，安全質(zhì)量濃度為13.397 mg/L(表3)。

2.3 三氯異氰尿酸試驗(yàn)結(jié)果

在三氯異氰尿酸質(zhì)量濃度為10 mg/L組中，約10 min大鱗鲃浮在上層，吞食空氣，類似浮頭現(xiàn)象，游泳動(dòng)作緩慢，約20 min失去平衡，腹部朝上，對(duì)外界刺激反應(yīng)遲鈍，約30 min開始死亡。質(zhì)量濃度5.623 mg/L組大鱗鲃24 h死亡率達(dá)到90%，48 h和96 h的死亡率均為100%。三氯異氰尿酸對(duì)大鱗鲃的24、48 h和96 h的半致死質(zhì)量濃度分別為4.466、3.758 mg/L和3.548 mg/L，安全質(zhì)量濃度為0.798 mg/L(表3)。

2.4 敵百蟲試驗(yàn)結(jié)果

在敵百蟲質(zhì)量濃度為0.356～2.000 mg/L試驗(yàn)組中，大鱗鲃不安地亂竄，時(shí)而箱底時(shí)而浮上水面，后期扭曲翻滾，抖動(dòng)，最后死亡。試驗(yàn)組的藥品質(zhì)量濃度與大鱗鲃的死亡率呈正相關(guān)，對(duì)照組和質(zhì)量濃度為0.200 mg/L組未出現(xiàn)非正常現(xiàn)象，96 h死亡率為0，質(zhì)量濃度2.000 mg/L試驗(yàn)組24 h死亡率為100%。敵百蟲對(duì)大鱗鲃的24、48 h和96 h的半致死質(zhì)量濃度分別為1.191、1.061 mg/L和0.709 mg/L，安全質(zhì)量濃度為0.253 mg/L(表3)。

表3 4種藥物的的半致死質(zhì)量濃度及安全質(zhì)量濃度

3 討 論

3.1 4種藥物毒性評(píng)價(jià)

半致死質(zhì)量濃度是衡量藥物對(duì)試驗(yàn)對(duì)象毒性的指標(biāo)，其值越小，藥物毒性越大；其值越大，毒性越低[13-14]。以96 h半致死質(zhì)量濃度為魚類急性毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，分為極高毒(<1 mg/L)、高毒(1～10 mg/L)、中毒(10～100 mg/L)和低毒(>100 mg/L)4個(gè)等級(jí)[10]。本試驗(yàn)中4種藥物對(duì)大鱗鲃的96 h半致死質(zhì)量濃度為聚維酮碘>三氯異氰尿酸>阿維菌素>敵百蟲，按照藥物對(duì)其毒性依次為敵百蟲>阿維菌素>三氯異氰尿酸>聚維酮碘。本試驗(yàn)結(jié)果表明，敵百蟲對(duì)大鱗鲃是極高毒藥物，三氯異氰尿酸和阿維菌素是高毒藥物，聚維酮碘是中毒藥物。4種藥物對(duì)大鱗鲃的半致死質(zhì)量濃度呈24 h半致死質(zhì)量濃度>48 h半致死質(zhì)量濃度>96 h半致死質(zhì)量濃度(表3)，說明隨時(shí)間的延長(zhǎng)，4種藥物對(duì)試驗(yàn)魚的毒性效應(yīng)相應(yīng)增加。

3.2 4種藥物用藥安全性

阿維菌素對(duì)錨頭鳋、中華鳋、纖毛蟲、指環(huán)蟲和線蟲等寄生蟲均有極強(qiáng)的驅(qū)殺作用，廣泛應(yīng)用于水產(chǎn)動(dòng)物體內(nèi)外寄生蟲病的防治[15]。周帥等[16]評(píng)價(jià)了阿維菌素水乳劑對(duì)鰱魚(Hypophthalmichthysmolitrix)、異育銀鯽(Carassiusauratusgibelio)、草魚(Ctenopharyngodonidellu)的安全性和藥效，表明該制劑可有效防治錨頭鳋、中華鳋等寄生蟲病。阿維菌素常用量為0.037～0.045 mg/L，本試驗(yàn)中阿維菌素的安全質(zhì)量濃度為0.616 mg/L，高于常用量，說明阿維菌素能夠用于大鱗鲃寄生蟲疾病的防治。

聚維酮碘又名聚乙烯吡咯烷酮碘，對(duì)魚體無刺激性，體表存留時(shí)間較長(zhǎng)，可保持長(zhǎng)久的抑菌殺菌能力，促進(jìn)魚類皮膚機(jī)械損傷愈合，為廣譜、高效消毒殺菌劑，防治水產(chǎn)動(dòng)物爛鰓、癤瘡、腐皮等細(xì)菌性疾病的效果很好，是水產(chǎn)養(yǎng)殖中廣泛使用的消毒殺菌劑[17]。聚維酮碘常用量為0.03～0.04 mg/L，本試驗(yàn)中聚維酮碘的安全質(zhì)量濃度為13.394 mg/L，高于同為鲃亞科的光倒刺鲃(Spinibarbushollandi)的10.3 mg/L[18]，也遠(yuǎn)高于常用量，在大鱗鲃養(yǎng)殖過程中可作為消毒殺菌劑使用，也可作為浸泡藥物治療細(xì)菌性疾病。

三氯異氰尿酸水解生成次氯酸,具有穩(wěn)定殺菌作用，是生產(chǎn)上用以防治細(xì)菌性疾病的常用藥物，常用量為0.4～0.5 mg/L[19]。孫翰昌等[19]研究發(fā)現(xiàn)，三氯異氰尿酸對(duì)中華倒刺鲃(S.sinensis)的安全質(zhì)量濃度為0.53 mg/L，雖易刺激魚體，但可用于魚病防治。本試驗(yàn)中，三氯異氰尿酸的安全質(zhì)量濃度為0.798 mg/L，藥品的有效成分為50%(有效氯計(jì))，因此三氯異氰尿酸的安全質(zhì)量濃度為0.399 mg/L，略低于常用量，高于光倒刺鲃的0.05 mg/L[18]。大鱗鲃和光倒刺鲃異氰尿酸反應(yīng)強(qiáng)烈，建議生產(chǎn)中謹(jǐn)慎使用三氯異氰尿酸。

敵百蟲為膽堿酯酶抑制劑，能將膽堿酯酶的活性點(diǎn)磷酸化而抑制其活性。敵百蟲在魚體內(nèi)殘留量少、殘留時(shí)間短而被廣泛用于防治體外寄生甲殼類、單殖吸蟲及部分腸內(nèi)寄生蠕蟲，常用量為0.2～0.5 mg/L[20]。敵百蟲對(duì)光倒刺鲃的安全質(zhì)量濃度為1.1 mg/L[18]，對(duì)中華倒刺鲃安全質(zhì)量濃度為0.164 mg/L[20]，對(duì)黑脊倒刺鲃(S.caldwelli)安全質(zhì)量濃度為50 mg/L[21]。試驗(yàn)中敵百蟲的安全質(zhì)量濃度為0.253 mg/L，介于常用量之間，因此敵百蟲可以作為大鱗鲃的疾病防治藥物。水產(chǎn)藥物對(duì)魚類的急性毒性因魚的種類、規(guī)格而異，對(duì)藥物的安全質(zhì)量濃度也不同[22]。

生產(chǎn)中，藥物的毒性往往受水溫、水質(zhì)、pH、各種水生生物和有機(jī)物等諸多因子影響。例如，敵百蟲是極高毒農(nóng)藥，在堿性條件下可水解成毒性增加10余倍的敵敵畏[23]。除了從藥物的半致死質(zhì)量濃度和安全質(zhì)量濃度上考慮，在生產(chǎn)中選用藥物還需結(jié)合藥物的常用量、用藥時(shí)間及用藥環(huán)境綜合考慮，同時(shí)密切觀察魚的活動(dòng)情況，防止魚類中毒。