HPLC法測定氣血和膠囊中芍藥苷的含量

1.甘肅醫學院，甘肅 平涼 744000；2.平涼市婦幼保健院，甘肅 平涼 744000；3.寧夏美德醫療器械有限公司，寧夏 銀川 750000

氣血和膠囊是由當歸、赤芍、川芎、桃仁、紅花、桔梗、牛膝、枳殼等15味藥物組成，具有舒肝理氣、活血止痛的功效，用于婦女月經過少、經期后錯、行氣不暢、經色暗紅有血塊、小腹或少腹疼痛、乳房脹痛、或伴有面部色素沉著[1]。本方原為散劑，為了便于服用和生產，因此將其改為膠囊劑，同時建立了采用高效液相色譜法測定芍藥苷含量的方法，為后期新藥開發及質量標準的制訂提供依據。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Agilent1100型高效液相儀(美國Agilent公司)；ISO9001型電子分析天平(北京賽多利斯儀器系統有限公司)；TDL-40B臺式離心機(上海安亭科學儀器公司)，AS系列超聲儀(天津奧特賽恩斯儀器有限公司)。

1.2 材料 芍藥苷對照品(批號：110736-200630，中國藥品生物制品檢定所)；甲醇(色譜純，美國Fisher公司)；乙腈(色譜純，美國Fisher公司)；水為超純手(娃哈哈純凈水)；氣血和膠囊樣品及陰性供試品(均系實驗室自制)，其它試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 Knauer C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：乙腈-水(20∶80)；檢測波長230 nm；柱溫：30℃，流速1.0 mL/min，進樣量20 μL，理論塔板數按芍藥苷峰計算應不低于2000。

2.2 樣品的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱定經五氧化二磷干燥至恒重的芍藥苷對照品4.2850 mg置25 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，作為儲備液；精密吸取儲備液1 mL置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，配制成對照品(17.14 μg/mL)溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品內容物0.6 g精密稱量，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL密塞，稱定重量，超聲處理30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，離心，取上清液，精密吸取濾液5 mL，水浴蒸干，殘渣用5 mL流動相溶解，轉移至10 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，用0.45 μm微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液[2]。

2.2.3 陰性供試品溶液的制備 按處方中藥味比例配制不含赤芍的陰性供試品，按“2.2.2”項下供試品溶液制備方法操作，即可。

2.3 方法學考察

2.3.1 專屬性試驗 精密吸取上述照品溶液、供試品溶液和陰性供試品溶液各20 μL注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。在該系統條件下，供試品溶液與對照品溶液在相應的位置上有相同的色譜峰，主峰與其它組分的分離良好，陰性供試品在相應位置無干擾峰出現。如圖1所示。

2.3.2 線性關系考察 分別精密吸取“2.2.1”項下對照品溶液1、5、10、15、20 μL，按“2.1”項下色譜條件測定，記錄峰面積，以進樣量(X，μg)、峰面積積分值(Y)為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程Y=1546.59X-135.2377，r=0.9999(n=6)。結果表明，芍藥苷進樣量在0.01701～0.3428 μg范圍內與峰面積積分線值保持良好線性關系。

2.3.3 精密度試驗 精密吸取對照品溶液20 μL，按上述色譜條件注入液相色譜儀，連續進樣5次，結果測得峰面積RSD=0.97%。

2.3.4 穩定性試驗 精密吸取同一批供試品溶液各20 μL，分別于0、2、4、6、8 h按上述色譜條件進行測定，RSD=0.87%，結果表明供試品溶液在制備后8 h內基本穩定。

2.3.5 重復性試驗 精密稱取供試品(批號：150101)共5份，按“2.2.2”項下的方法制備供試品溶液，按上述色譜條件注入液相色譜儀，測定，計算，樣品中芍藥苷的平均含量為0.74 mg/g，RSD=1.61%，結果表明本法的重現性良好。

2.3.6 樣回收率試驗 精密稱取同一批已知含量的供試品(批號：150101)6份，每份約0.6 g，分別精密加入1、2、4 mL的芍藥苷對照品(17.14 μg/mL)儲備液各2份，按供試品制備與測定方法操作，結果見表1。

表1 芍藥苷加樣回收率實驗結果 (n=6)

2.3.7 樣品測定結果 取5批氣血和膠囊，依法制備和測定，記錄芍藥苷峰面積，按外標法計算含量，結果見表2。結果表明5批氣血和膠囊中芍藥苷的含量均大于0.20(mg/粒)。

表2 5批氣血和膠囊的含量測定結果

3 討論

赤芍為氣血和膠囊處方中主要藥物之一，而芍藥苷是其主要有效成分，因此選擇芍藥苷作為控制氣血和膠囊的質量的指標成分，用高效液相法測定芍藥苷含量。實驗發現關鍵在于根據具體情況有效的排除其它成分的干擾，因此本實驗采用先超聲，過濾，蒸干，然后用流動相溶解方法處理樣品，收得滿意效果[3]。同時，實驗經過方法學分析的過程中，參考了中國藥典中芍藥苷的測定方法[4]，反復試驗，最終得芍藥苷的測定方法為：乙腈-水(20∶80)作流動相，在流速為1.0 mL/min，柱溫35℃時進行測定，峰形分離度好，且陰性供試品在此處無干擾，這與中國藥典的測定方法不同，需要進一步的驗證和分析。本實驗方法簡便，準確，重現性、回收率均較好，可以用于對氣血和膠囊進行質量控制。同時，當歸也是氣血和膠囊中的藥物之一，在后續的實驗中，將進一步測定當歸中阿魏酸的含量，更好地完善氣血和膠囊的質量控制。