HPLC-MS/MS法測定蒙藥珠蘇木丸中川楝素的含量

1.通遼市食品藥品檢驗所，內蒙古 通遼 028000；2.呼倫貝爾市人民醫(yī)院，內蒙古 呼倫貝爾 021000

珠蘇木丸是呼倫貝爾市人民醫(yī)院制劑，由川楝子、公丁香、建蓮子、紫檀香、水牛角濃縮粉、人工牛黃、麥冬、木香、訶子、川楝子、梔子、甘松十味藥組成的復方制劑。具有清肝熱，除“亞瑪”病，解毒的功效，用于肝熱胸膈，配毒癥，“亞瑪”病，腰腎損傷，尿頻，尿血，尤其對血熱引起的眼病有效。川楝子為該方中主要成份之一，對本方的臨床療效有重要作用，以川楝子中主要有效成分川楝素為定量監(jiān)控指標可有效地控制產品的質量。本研究采用HPLC-MS/MS法測定其中川楝素的含量，方法穩(wěn)定、準確性好，可作為質量控制的方法。

1 儀器與材料

1.1 儀器 LCMS-8030液相色譜質譜聯(lián)用儀(島津公司)。

1.2 材料 川楝素(批號：111842-201503，含量96.8%，中國食品藥品檢定研究院)，珠蘇木丸(批號:20171208、20170606、20170612，呼倫貝爾市人民醫(yī)院制劑室)。甲醇為色譜純，水為高純水，乙腈為分析純。

2 方法和結果

2.1 色譜條件 色譜柱：WatersXBridge C18柱(100 mm×2.1 mm,2.5 μm)；流動相：乙腈-0.01%甲酸溶液(31∶69)；進樣量：5 μL。

2.2 質譜條件 離子源：電噴霧電離源(ESI)；掃描方式：負離子模式；檢測方式：多反應檢測(MRM)掃描方式檢測；DL溫度：250℃；加熱塊溫度：400℃；載氣流速：3 L/min；碎裂電壓：-17.0 V；定性離子對為m/z 573/531和m/z 573/425。

2.3 溶液的制備

2.3.1 對照品溶液的制備 精密稱取川楝素對照品適量，加甲醇制成每1 mL含川楝素0.02019 mg/mL，精密量取5 mL對照品貯備液，置50 mL量瓶中,加甲醇稀釋至刻度。

2.3.2 供試品溶液 取珠蘇木丸，研細(過三號篩)，取粉末1.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱定重量，加熱回流1 h，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3.3 陰性對照溶液 按照珠蘇木丸的制備工藝制備不含川楝子的陰性對照樣品，并按“2.2.2”項下方法制成陰性對照溶液。

2.4 專屬性試驗 精密吸取對照品溶液、供試品溶液及陰性對照溶液各5μL進行測定，結果：陰性對照色譜在川楝素兩個峰保留時間處無干擾。結果如圖1所示。

2.5 線性關系考察 精密吸取配制好的對照品溶液1、3、5、7、10、15 μL分別進樣。以兩個峰面積之和為縱坐標，以對照品進樣量X(μg)為橫坐標，繪制標準曲線。得回歸方程為Y=55411545.7X-285.89，r=0.9998，川楝素進樣量在0.002019～0.030285 μg范圍內線性關系良好。

2.6 精密度試驗 取“2.2.1”項下的對照品溶液5 μL，重復進樣6次，測得川楝素兩個峰面積之和平均值為556976.5，RSD為0.5%，表明儀器的精密度良好。

2.7 重復性試驗 取供試品(20171208)珠蘇木丸供試品6份，按“2.2.2”項下方法操作，進行測定含量。結果川楝素含量的平均值(n=6)為57.6 μg/g，RSD為0.4%，表明實驗的重復性良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗 取同一批號(20171208)珠蘇木丸供試品溶液，室溫放置，分別于0，2，4，6，8，12，24 h按上述色譜條件測定，測得川楝素峰面積的RSD(n=6)0.8%。結果表明供試品溶液室溫放置24 h內穩(wěn)定。

2.9 加樣回收率試驗 精密稱取已知含量的樣品約0.8 g，共6份，分別精密加入一定量的川楝素對照品溶液，按“2.2.2”項下方法操作，測定含量，并計算回收率。結果見表1。川楝素平均回收率(n=6)為99.7%。

表1 珠蘇木丸中川楝素的回收率

2.10 樣品測定 取珠蘇木丸，按上述供試品溶液制備方法制備，并按上述色譜測定，結果見表2。

表2 珠蘇木丸中川楝素的含量測定結果

3 討論

參考《中國藥典》2015年版一部川楝子的含量測定方法中的樣品提取及色譜條件對珠蘇木丸中川楝素進行分析，運用HPLC-MS/MS尋找出定量離子進行含量測定，此方法樣品前處理簡單、回收率高、專性強，可作為珠蘇木丸的質量標準，能夠有效控制樣品的質量。