電針療法對缺血性腦卒中大鼠肢體肌張力增高抑制作用及對中樞系統GABA能中間神經元表達的影響

伍 芳 胡振平 謝遠見 唐昌敏 廖家權

（湖北省恩施土家族苗族自治州中心醫院，湖北 恩施 445000）

腦卒中是臨床較為常見疾病，是腦局部血液循環出現障礙造成神經功能受損的綜合征，其癥狀至少持續24 h以上。隨著科學技術和醫學水平不斷發展，臨床腦卒中患者生存率有了顯著提高，但約有70%左右患者會發生不同程度功能障礙，其中運動障礙是影響患者重返社會與獨立生活的主要功能障礙，這主要是由患者腦卒中后癱瘓肢體痙攣所引發的［1-2］。γ-氨基丁酸 （GABA）為中樞神經系統內主要抑制性的神經遞質，存在脊髓與腦等神經組織內。中樞神經系統受損所發生的肢體痙攣如腦卒中及兒童腦癱等都會致使其腦脊液內GABA含量降低，這說明抑制性遞質GABA含量異常與上運動神經元受損后肌張力升高有緊密聯系［3-4］。因此，本文通過分析電針療法對缺血性腦卒中大鼠肢體肌張力增高的抑制作用及對中樞系統GABA能中間神經元表達的影響，為臨床患者治療提供一些實驗室依據。

1 資料與方法

1.1 實驗動物 選取由本院實驗動物中心提供的健康雄性SD大鼠30只，6周齡，體質量180～220 g，平均（195.27±15.72） g，飼養大鼠室內溫度 23～26 ℃，濕度40%～60%，光照周期為 12 h∶12 h，適應性喂養 1周后開始實驗。

1.2 試藥及儀器 1）試劑及藥物：微白蛋白抗體（由北京博奧森生物技術公司生產，批號：bs-1375R）、水合氯醛（規格：250 mg/瓶，由天津科密歐化學試劑公司生產）、鈣結合蛋白D-28K抗體（由武漢博士德生物技術公司生產，批號：BM1527）、呋塞米注射液（規格：2 mL∶20 mg×10支，由太極集團西南藥業公司生產）、PBS磷酸鹽緩沖液（由北京中杉金橋生物公司生產，批號：20171015）、硼酸慶大霉素注射液（規格：2 mL∶8 萬U×10支，由天津藥業焦作公司生產）。2）儀器：四道生理記錄儀 （型號：BL-420E，由成都泰盟科技公司生產）、電子計重稱（型號：ACS-3-JZ，由山西太原航空工業部太行儀表廠生產）、病理組織漂烘儀（型號：PHYШ，由常州中威醫療儀器廠生產）、多通道電針儀（型號：G6805-2，由青島鑫升實業公司生產）。

1.3 造模與分組 按照隨機數字表法將30只大鼠分為觀察組與對照組各15只。兩組大鼠依據趙浩等［5］改良Zea longa等線栓法制備大鼠右側大腦動脈阻塞（MCAO）模型，手術前12 h禁食，腹腔注射10%水合氯醛（劑量3 mL/kg）麻醉，仰臥固定在手術臺上，常規消毒。沿頸部正中切口，剪開皮膚及淺筋膜，分離肩胛舌骨肌、二腹肌及胸鎖乳突肌間肌間隙，暴露、分離右側迷走神經與頸總動脈，再分別暴露頸內動脈、頸外動脈與頸總動脈分叉處，結扎頸總動脈和頸外動脈，距離頸總動脈分叉的膨大位置取5 mm切口，栓線插入到頸內動脈，在深度20 mm左右感覺有阻力時停止，而后把栓線和頸總動脈遠心端一起結扎，縫合切口。大鼠手術后連續3 d在腹腔內注入2萬U慶大霉素，手術后注入速尿（劑量為0.1 mg/kg），預防腦水腫。造模成功標準：大鼠蘇醒后，依據Zea Longa行神經功能評分，術后3 d使用改良Ashworth肌張力準則判別其肌張力有無異常，大鼠神經功能得分在1~3分，肌張力在1級以上為成功造模。

1.4 干預方法 依據李忠仁《實驗針灸學》［6］取穴，選取患側照海、申脈，后肢內踝下方1 mm為照海，直刺1.5 mm；后肢外踝正下方凹陷位置為申脈，直刺0.5 mm。使用G6805多通路電針儀，波寬為0.3 ms、頻率100 Hz行持續波刺激，輸入電流調整，強度為肢體肌肉發生有節律收縮。觀察組大鼠在造模后第3日開始行電針治療，每次30 min，每日1次，共進行6 d。對照組大鼠未進行任何干預。

1.5 觀察指標 1）兩組大鼠造模后1 d及治療后9 d采用神經受損程度評分（NSS）［7］，包含異常運動、運動功能、平衡與反射缺失、感覺功能4部分，共計18分，大鼠得分越高說明其損傷越嚴重。2）觀察治療前后大鼠電生理描記肌張力狀況。腹腔注射劑量為2.5 mL/kg的10%水合氯醛全身麻醉，BL-420E型四道生理記錄儀檢測間接肌張力，一端電極插入大鼠左后肢股四頭肌中，另一端插入大鼠尾部，在大鼠左后肢下端系一根低順應性棉線，棉線經過張力傳感器和BL-420E型四道生理記錄儀連接。給予0.5 g后負荷，定時對股四頭肌進行刺激（時間30 s，刺激量3 mA），經過記錄儀記錄電刺激左后肢股四頭肌所形成的電信號，間接反映大鼠肌張力的變化。3）治療6 d后將大鼠斷頸處死，選取腦干及脊髓腰、頸膨大部位，常規石蠟包埋，連續切片厚度為4 m，免疫組化檢測大鼠微白蛋白（PV）、鈣結合蛋白D-28K（CB），使用Motic Images Advanced分析軟件，檢測其積分光密度數值。

1.6 統計學處理 應用SPSS19.0統計軟件。計量資料以（±s）表示，獨立樣本t檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 兩組治療前后大鼠NSS評分及電生理描記肌張力比較 見表1。治療后觀察組大鼠NSS評分較對照組顯著降低，電生理描記肌張力較對照組顯著升高，差異有統計學意義（P＜0.05）。

2.2 兩組大鼠不同部位CB表達積分光密度值比較見表2。治療后觀察組大鼠腦干、頸膨大及腰膨大部位CB表達積分密度值均高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。

表1 兩組治療前后大鼠NSS評分及電生理描記肌張力比較（±s）

表1 兩組治療前后大鼠NSS評分及電生理描記肌張力比較（±s）

與本組治療前比較，*P＜0.05；與對照組治療后比較，△P＜0.05。

組 別 時 間 NSS評分 電生理描記肌張力觀察組 治療前 10.03±1.25 4.08±0.57（n＝15） 治療后 5.20±1.05* 7.16±0.68*△對照組 治療前 9.92±1.17 4.02±0.52（n＝15） 治療后 7.38±1.09* 4.13±0.63

表2 兩組治療后大鼠不同部位CB表達積分光密度值比較（±s）

表2 兩組治療后大鼠不同部位CB表達積分光密度值比較（±s）

與對照組比較，△P＜0.05

組 別 頸膨大部位 腰膨大部位觀察組 9.87±1.40△ 4.73±1.33△對照組 4.79±1.37 2.41±1.29 n 腦干部位15 8.27±1.25△15 4.57±1.24

2.3 兩組大鼠不同部位PV表達積分光密度值比較

見表3。治療后觀察組大鼠腦干、頸膨大及腰膨大部位PV表達積分密度值均高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。

表3 兩組大鼠不同部位PV表達積分光密度值比較（±s）

表3 兩組大鼠不同部位PV表達積分光密度值比較（±s）

組 別 頸膨大部位 腰膨大部位觀察組 4.95±0.23△ 7.02±0.53△對照組 1.24±0.25 2.48±0.52 n 腦干部位15 5.81±0.42△15 1.10±0.39

3 討 論

現代醫學對腦卒中肢體痙攣相關機制有3種，即神經遞質論、中樞興奮與抑制作用論和上下運動神經元論。神經遞質論認為腦卒中后痙攣遲緩情況和GABA、乙酰膽堿有緊密聯系，GABA和乙酰膽堿為抑制性和興奮性神經介質［8-10］。腦卒中后其興奮性遞質增大，抑制性遞質變少，機體高級中樞神經系統內抑制與興奮性遞質平衡被破壞，上位中樞失去了控制下位中樞的隨意運功能力，進而出現低位中樞控制痙攣等異常運動模式［11-12］。中醫理論下，患者中風后肢體痙攣機制包含兩個方面，一是痙攣發病位置在經筋，患者經脈不通，體內氣血的運行失調，造成經筋失去養護，經筋攣縮為痙攣主要因素；二是由于機體左右陰陽失調，也是造成腦卒中后肢體痙攣的因素［13］。

中醫認為機體陰陽失去平衡，蹺脈能力不正常是造成腦卒中肢體痙攣的因素。陰陽蹺脈病就是陰陽緩急的失調，中風以后下肢陽蹺之病，會出現肢體內側拘急，外側拘攣為蹺脈，即導致中風后肢體出現痙攣［14］。《針灸大成-八脈圖并治癥穴》內記載了選取申脈，再取各穴來治療四肢麻痹不仁、中風偏枯及半身癱瘓等疾病，申脈是八脈的交會穴，能夠治療陽蹺脈之病癥［15］。在電針治療參數選擇上學者們有不同觀點，部分專家主張低頻刺激，可對肌張力升高抑制，進而緩解患者痙攣狀況；但多數學者認為要以高頻率刺激為主，較高電刺激能夠對脊髓前角細胞興奮性產生抑制，進而起到緩解痙攣影響［16］。本文研究顯示，治療后觀察組大鼠NSS評分較治療前、對照組顯著降低，電生理描記肌張力較治療前、對照組顯著升高，差異有統計學意義（P＜0.05），說明電針治療可加速病癥周邊水腫的消退，建立側支循環，使其癥狀得以改善。GABA能神經元由含3種鈣結合蛋白亞群構成，主要為CB、PV和鈣視網膜蛋白（CR）中間神經元，其動態改變表示GABA能中間神經元改變情況。本文研究顯示，治療后觀察組大鼠腦干、頸膨大及腰膨大部位CB、PV表達積分密度值均高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05），說明電針通過對GABA能中間神經元亞群表達進行調節來恢復腦卒中肢體痙攣狀況。

綜上所述，電針治療可提升缺血性腦卒中大鼠鈣結合蛋白PV、CD表達，緩解其肢體痙攣狀況。