膽道閉鎖患者術后血清尿激酶型纖溶酶原激活物受體與肝硬度值變化的關系研究

田時志，吳 瑕,周曉奇,董 劍

(重慶市大足區人民醫院 檢驗科,重慶 大足402360)

膽道閉鎖(BA)是一種發生于嬰兒期的肝內外膽道阻塞的疾病,發病機制尚不明確，可導致肝硬化并最終出現肝衰竭[1]。肝門空腸吻合術(Kasai)是目前臨床上治療BA的首選方案，但并不能完全治愈BA,術后仍有約70%患兒逐漸發生肝纖維化和肝硬化，進而需要肝移植治療[2]。尿激酶型纖溶酶原激活物受體(uPAR)廣泛分布于免疫細胞和內皮細胞表面，被激活時從細胞膜表面釋放[3]，進入血液循環，調控細胞增殖、分化、存活等[4]。血清uPAR在慢性肝炎、脂肪肝、肝癌等疾病中表達水平升高[5,6]，這些疾病的進程均伴隨有肝纖維化和肝硬化。BA患者術后的主要不良預后——肝纖維化進程與血清uPAR水平的關系尚不清楚。因此，本研究對膽道閉鎖術后患者血清uPAR水平、肝硬度值變化及肝功能指標進行測量和相關性評估。具體報告如下。

1 資料和方法

1.1資料來源

選取2014年1月-2016年12月于本院行 Kasai術治療的BA患兒 48例作為研究對象，其中男性26例，女性22例，年齡2個月-5歲。根據血清總膽紅素值(TB)，將BA組分成黃疸組(TB≥34.2 μmol/L,n=20)和無黃疸組(TB<34.2 μmol/L,n=28)。另外，選取本院同期健康體檢兒童40例作為對照組，其中男性22例，女性18例,年齡2個月-5歲。

1.2納入及排除標準

納入標準：BA患兒診斷經臨床及病理切片證實[7]。根據近端膽道梗阻水平,BA診斷分為3型:1型(5%)為膽總管閉鎖,閉鎖位置附近出現囊腫結構;2型(2%)為肝總管閉鎖，少數患者膽總管存在;3型(>90%)為肝外膽道全部閉鎖,肝門部纖維化嚴重[2]。排除標準：(1)患者合并有其它肝膽實質性疾病，肝腎功能不全、血液系統疾病等;(2)患者合并有其它先天畸形，包括脾臟畸形，胰腺畸形，內臟器官轉位等;(3)患者術后于本研究采樣前接受肝移植治療。本研究經醫院倫理委員會研究后批準，各組兒童家屬均知情同意，并簽署知情同意書。

1.3觀察指標

BA 組患兒在手術后2個月左右的清晨采取血液樣本，對照組兒童也于清晨采集血液樣本，離心后分離血清，-80℃凍存。用酶聯免疫吸附法(ELISA)(Quantikine,R and D Systems,Minneapolis,MN)檢測血漿uPAR水平。每個參與者的血清標本進行兩次測量并取均值作為最終結果。采用奧林巴斯AU2700型全自動生化分析儀檢測肝功能，包括白蛋白(ALB)，總膽紅素(TB)、谷丙轉氨酶(ALT)、谷草轉氨酶(AST)及堿性磷酸酶(ALP)。采用瞬時彈性成像(TE)對肝硬度值進行測量，彈性超聲檢測探頭置于身體右側腋中線，連續檢測，要求成功檢測10次，取中位數作為肝臟彈性值，要求四分位間距低于測量值中位數的1/3，成功率(捕獲回波數/發射總次數)≥60%[8]。

1.4統計分析

2 結果

2.1BA組與正常組肝功能、血清uPAR水平及肝硬度值比較

BA組與正常組的基本臨床資料對比，其中性別、年齡均無統計學差異(P>0.05)。BA組與正常組比較，肝功能指標TB、DB、ALT、AST、ALP顯著升高(P<0.001)，但ALB無明顯差異(P>0.05)；BA組血清uPAR水平和肝硬度值均顯著高于對照組(P<0.001)，見表1。

2.2BA患兒黃疸組與無黃疸組肝功能、血清uPAR水平及肝硬度值比較

BA 患兒黃疸組、無黃疸組基本臨床資料對比，其中性別、年齡均無統計學差異(P>0.05)，黃疸組肝功能指標TB、DB、ALT、AST、ALP顯著高于無黃疸組(P<0.001)，ALB顯著低于無黃疸組。黃疸組血清uPAR水平和肝硬度值均顯著高于無黃疸組(P<0.001)，見表2。

表2 BA患兒黃疸組與無黃疸一般情況、肝功能、uPAR水平及肝硬度值比較

2.3BA組血清uPAR水平與肝硬度值的相關性分析

在BA組中，肝硬度值與血清uPAR水平呈正相關(r=0.637，P<0.001)，見圖1。

圖1 BA患者血清uPAR與肝硬度值的相關性

2.4BA組血清uPAR水平與肝功能的相關性分析

在BA組中，血清uPAR與肝功能指標ALB(r=-0.665，P<0.001)呈負相關，與TB(r=0.610，P<0.001)、ALT(r=0.580，P<0.001)、AST(r=0.710，P<0.001)和ALP(r=0.578，P<0.001)呈正相關,見表3。

表3 血清uPAR水平和肝功能的相關性

3 討論

BA的發病機制尚不明確，可能的病因包括遺傳因素，免疫反應，感染因素，炎癥反應等[2]。 Kasai手術是目前臨床治療BA的首選方案，能夠及時改善患兒的臨床癥狀，但仍然存在進行性的肝損傷和肝纖維化，并不能完全治愈BA[9]。本研究結果顯示，BA組血清uPAR水平及肝硬度值均明顯高于正常組，BA組中黃疸患兒的uPAR水平和肝硬度值也明顯高于無黃疸患兒。BA組患兒術后肝功能指標TB、ALT、AST、ALP及肝硬度值均較正常對照組有明顯升高。BA患兒術后血清uPAR水平與肝硬度值變化及肝功能呈正相關，提示uPAR水平可作為術后肝纖維化及肝損傷的生化指標。

BA患兒血清uPAR水平升高，可能與下列因素相關：(1)受損的肝細胞在炎癥的作用下，肝細胞表面的uPAR被激活，從細胞表面脫落，釋放，進入血液循環[4]。(2)肝臟清除uPAR的能力下降，正常肝細胞可清除多余的uPAR，但受損的肝細胞不能有效清除致使其在血清水平增加。(3)免疫系統或者其它組織合成并釋放uPAR進入血液。血清uPAR水平升高可能是單方面的來源增加或者去路減少，也可能是多種因素共同導致，具體的分子機制有待進一步探索。

研究發現，血清uPAR對轉化生長因子(TGF-β1)的活化和釋放起重要作用[10]。TGF-β1是肝纖維化、肝硬化發生和發展過程中主要細胞因子[11]，可刺激肝星狀細胞(HSC)向肌成纖維細胞轉化，增加細胞外基質的合成并抑制其降解[12,13]。細胞外基質的平衡被破壞，最后導致肝纖維化和肝硬化[14]。BA患兒術后TGF-β1表達水平隨纖維化進程不斷升高[15]。BA患兒術后向肝纖維化和肝硬化發展，可能是通過uPAR調控TGF-β1實現的，具體的信號轉導途徑需要進一步研究。

本研究仍有一定的局限性，主要包括：(1)對肝硬度值的測量僅使用瞬時彈性成像一種方法，結果可能偏差。血清透明質酸(HA)是臨床上常用的檢測肝纖維化程度的生化指標[16]，可與瞬時彈性成像結合起來分析肝硬度值和肝纖維化程度，以增加實驗結果的準確性。(2)患者數目相對較小，樣本來源相對單一。因此，研究結果需要在更大的樣本中進行確認，并在不同區域和種族來源的樣本中進一步測試。