結腸癌FOLFOX輔助化療方案對組織中TS、P53表達的影響

李宗山，李忠輝，張晉冀

(1.遷西縣人民醫院 外二科，河北 遷西064300；2.華北理工大學附屬醫院 腫瘤外科)

結腸癌作為胃腸道常見惡性腫瘤之一，發病率占胃腸道腫瘤的第3位。由于結腸癌早期癥狀并不明顯，確診時大部分患者已進入結腸癌中晚期，嚴重威脅生命健康和生活質量[1,2]。結腸癌發病機制涉及多種因素，所以在目前治療方案也在不斷完善并呈現個體化現象。FOLFOX方案是目前治療結腸癌術后化療的常用方案，其他還有XELOX、CapOX、生物靶向治療以及單藥輔助化療等方案。本研究在對選取的64例結腸癌患者進行化療前后體內的TS及P53表達的檢測、研究，進一步探討化療期間體內腫瘤相關表達物的變化意義。

1 材料與方法

1.1一般資料

選取2015年1月至2017年3月間在我院行結腸癌根治術患者64例,其中男性38例，女性26例，年齡33-69歲，中位年齡45歲，術前均常規檢查，均無其他病癥，手術統一采用結腸癌根治術，術后待切口基本愈合，進食普食，無相關并發癥，患者基本情況良好后化療。術后病理診斷為Ⅱ、Ⅲ期結腸癌?；颊呋厩闆r見表1。

1.2方法

檢測64名患者在輔助化療前體內TS及P53表達情況，選用S-P免疫組化試劑盒，采購自福建邁新公司，TS、P53抗體(稀釋比例：1∶100)采購自Santa Cruz生物公司。按照使用說明檢測TS及P53表達情況并記錄數值。對患者同意進行FOLFOX4輔助化療方案(奧沙利鉑130 mg/m2，靜脈滴注，d1；亞葉酸鈣200 mg/m2，靜脈滴注，d1-d2；5-氟尿嘧啶，靜脈推注，d1-d2；5-氟尿嘧啶600 mg/m2，靜脈持續滴注，d1-d2)。每2周為1個療程。在進行到第3療程后，再次以同樣方式檢測患者體內TS、P53表達變化情況并同樣記錄相關數據。

1.3免疫組織化學染色的判定

由于TS及P53免疫組化染色著色部位位于細胞核及細胞質，其陽性染色呈現的棕黃色沉著顆粒。

表1 實驗對象臨床構成情況

故在光鏡(400倍視野)下計算1000個腫瘤細胞陽性細胞數。規定為不表達或陽性細胞數<10%為陰性；視野中陽性細胞數≥10%為染色陽性。細胞染色計算及判定均由2名未參加本研究的病理科專業醫師進行獨立操作，結果不一致時由2人協商決定。

1.4統計學方法

應用統計學軟件SPSS 19.0對本研究實驗數據進行統計學分析，對輔助化療前后腫瘤分子標記物TS、P53在表達水平上的變化情況，應用卡方檢驗進行評價。規定檢驗水準α=0.05。

2 結果

輔助化療前患者TS表達陰性24例，陽性40例，而經3周期化療后表達陰性36例，陽性28例，比較輔助化療前后TS表達變化數據，差異具有統計學意義(P<0.05)。P53的表達在化療前陰性27例，陽性37例，而經3周期化療后表達陰性41例，陽性23例，比較輔助化療前后P53表達變化數據，差異具有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 NAC前后P53表達變化情況

注：該組數據表明：TS和P53表達水平在NAC前后發生變化，表明NAC對TS和P53表達水平具有影響。

3 討論

在歷經多年對于結腸癌輔助化療的研究和探索后，目前相關報道輔助化療可顯著改善臨床Ⅱ、Ⅲ期患者預后，結腸癌患者的3年無病生存率由從前單純手術治療的44%-52%提高至接受輔助化療后的70%-75%。其中1990年Moertel等人[3]首次提出氟尿嘧啶/左旋咪唑應用1年能夠顯著提高Ⅲ期結腸癌患者無病生存期(DFS)和總生存期(OS)。但對不同病情患者使用相同化療方案是否正確目前仍存在異議。ASCO認為對于那些出現腸梗阻、腸穿孔、腫瘤分化程度低、浸潤程度較嚴重以及出現某器官血管癌栓的患者可以考慮進行輔助化療，采用FOLFOX方案，但這種情況下患者長期無病生存獲益低于5%，并且輔助化療會帶來一系列毒副反應，反而降低了患者的生活質量[4]。

TS是胸苷酸合成的限速酶， TS在DNA合成與修復、細胞增殖與分化中有十分重要的作用,也是腫瘤化療藥5-氟尿嘧啶和甲氨蝶呤等重要靶酶。5-氟尿嘧啶進入體內后被活化成氟尿嘧啶脫氧核苷酸(FdUMP)，FdUMP替代dUMP與TS及CH2FH4形成不易解離的三聯復合物從而抑制TS不能合成dTMP，也就不能合成腫瘤細胞DNA，從而發揮抗腫瘤的藥理生物學效果。Temmink等人[5]挑選了對5-氟尿嘧啶繼發性耐藥的人類結腸癌細胞株H630-RI、H630-R10和H630-R與其父系H630細胞株進行比對試驗后發現各耐藥細胞株對5-氟尿嘧啶耐藥性明顯增加，說明TS表達水平的增加導致腫瘤組織對5-氟尿嘧啶敏感性降低，TS的過度陽性表達增加機體對5-氟尿嘧啶的耐藥風險。

P53是一種腫瘤抑制基因。在所有惡性腫瘤中，50%以上會出現該基因的突變。Muller等人研究發現[6]若P53基因突變后，由于其空間構象發生改變，失去了對細胞生長、凋亡和DNA 修復的調控作用，P53基因由抑癌基因轉變為癌基因，并引起蛋白水平過度表達。P53與腫瘤相關性的研究一直是醫學界熱點，對于P53表達水平與結腸癌輔助化療效果的研究目前較為一致，日本學者Yamaguchi等人研究發現[7]在100例結腸癌患者中，P53表達陽性患者的復發率明顯高于其陰性表達者(23.8% vs 5.9%，P<0.05)，并且2年生存率明顯低于陰性表達者(61.8% vs 96.7%，P<0.05)。而Zaanan等人[8]對診斷為Ⅲ期的結腸癌患者接受FOLFOX化療方案的試驗中發現P53表達能預測奧沙利鉑在該類患者治療中的療效。

綜上所述，本研究對于在結腸癌患者輔助化療前后檢測體內TS、P53的表達情況，經統計計算后發現TS、P53表達水平發生明顯變化，其前后表達變化數值均具有統計學意義。在輔助化療后患者體內TS、P53發生變化，而其陽性表達水平的增高不單單會導致腫瘤細胞對化療藥物的耐藥產生，影響近期治療效果，更重要的是此類改變會導致腫瘤的復發率升高，嚴重影響患者生活質量和生存時間。所以，在化療中期檢測患者體內TS、P53的表達情況，適時、適當的調整化療方案。