華支睪吸蟲感染患者的膽汁成分及各成分相關(guān)性分析

羅小兵,夏厚才,蔡洪英,馬瑞紅,喬 鐵

(1.廣東省廣州市南沙區(qū)第六人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 511470；2.廣東省廣州市南沙區(qū)第六人民

醫(yī)院病理科 511470；3.廣東省廣州市中德內(nèi)鏡研究所 511430)

華支睪吸蟲病俗稱肝吸蟲病，是由華支睪吸蟲寄生在人體肝內(nèi)膽管所引起的以肝膽病變?yōu)橹鞯囊环N食源性寄生蟲病。據(jù)報(bào)道，全球約有3 500萬人感染此病，中國感染人數(shù)約為1 249萬人[1-3]。目前，華支睪吸蟲感染與膽結(jié)石的關(guān)系已有報(bào)道證實(shí)，但相應(yīng)的致病機(jī)制仍不清楚[4-6]。多數(shù)研究認(rèn)為，各種原因引起的膽汁成分改變是結(jié)石發(fā)生、發(fā)展的可能致病因素。當(dāng)前，有關(guān)華支睪吸蟲感染相關(guān)膽囊結(jié)石的膽汁成分研究報(bào)道較少，本研究初探了華支睪吸蟲感染的膽囊結(jié)石患者的多種膽汁成分及其相互關(guān)系，以期為相關(guān)研究提供借鑒和參考。

1 資料與方法

1.1一般資料 連續(xù)選取2016年4-12月廣州市南沙區(qū)第六人民醫(yī)院135例膽囊結(jié)石患者，所有患者均為本地(華支睪吸蟲流行區(qū))戶籍居民，并在本院普外科成功實(shí)施硬鏡取石保膽手術(shù)。其中男64例，女71例，年齡18～80歲，中位年齡46.30歲。

1.2儀器與試劑 微量清蛋白(MALB)、β2微球蛋白(β2-MG)、總膽紅素(TBIL)、膽固醇(CHO)和總鈣(Ca)測定用商品試劑盒購自北京中生生物技術(shù)公司，免疫球蛋白(IgA、IgG和IgM)和補(bǔ)體(C3和C4)測定試劑購自深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司，碳酸氫根(HCO3-)商品試劑盒購自四川邁克生物技術(shù)公司，總膽汁酸(TBA)試劑盒購自日本積水醫(yī)療株式會社。上述膽汁成分測定儀器為日本東芝公司TBA-120FR全自動(dòng)生化分析儀；pH測定儀為美國Thermo Fisher Scientific公司產(chǎn)品。

1.3方法

1.3.1標(biāo)本獲取 患者的膽囊膽汁于術(shù)中以無菌方式獲得：取膽汁5～10 mL，置于肝素抗凝管內(nèi)送檢。所獲標(biāo)本于1 h內(nèi)送檢，不能及時(shí)送檢的置于4 ℃保存不超過4 h。所有標(biāo)本的獲取均征得患者本人及其家屬同意，并經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審核通過。

1.3.2檢測方法 取送檢膽囊膽汁5 mL于無菌刻度離心管內(nèi)，380×g離心10 min，吸取上層膽汁用于化學(xué)成分測定，留取離心沉淀物約300 μL檢查華支睪吸蟲卵。膽汁化學(xué)成分測定按照參考文獻(xiàn)[7]的方法，測定MALB、β2-MG、IgA、IgG、IgM、C3、C4、pH值、TBIL、TBA、CHO、Ca2+和HCO3-共13項(xiàng)指標(biāo)。膽汁及結(jié)石中的華支睪吸蟲卵檢測采用顯微鏡檢法[8]。臨床上稱為“白膽汁”(即外觀無顏色、總膽紅素測不出的膽汁)排除于本研究。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析。計(jì)量資料先用描述性分析檢驗(yàn)兩組數(shù)據(jù)資料是否正態(tài)分布和方差齊性，本研究數(shù)據(jù)資料為非正態(tài)分布且方差不齊，故用中位數(shù)(M)和四分位數(shù)間距(P75，P25)表示，組間比較使用兩獨(dú)立樣本的非參數(shù)檢驗(yàn)；膽汁各成分間的相關(guān)分析采用Kendall′s tau-b相關(guān)系數(shù)表示，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1華支睪吸蟲感染陽性和陰性患者的膽汁成分對比 根據(jù)膽汁離心沉淀鏡檢結(jié)果，將135例膽囊結(jié)石患者分為感染陽性和感染陰性兩組，陽性組68例，陰性組67例，然后比較兩組患者的膽汁各成分水平。與華支睪吸蟲感染陰性組相比，陽性組膽汁中MALB(429.0 mg/Lvs.198.0 mg/L)、pH(7.64vs.7.47)和HCO3-(20.8 mmol/Lvs.17.3 mmol/L)的水平較高，而CHO水平較低(3.45 mmol/Lvs.5.40 mmol/L)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；其他成分比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表1。

表1 華支睪吸蟲感染陽性與陰性患者之間的膽汁成分對比[M(P75，P25)]

注：與陰性組相比，*P<0.05

2.2陽性組膽汁中各成分的相關(guān)關(guān)系 陽性組膽汁中，MALB與TBIL和Ca2+呈正相關(guān)(r=0.174、0.263，P<0.05)；pH與HCO3-呈正相關(guān)(r=0.522，P<0.05)，但與IgA、TBIL、TBA、CHO和Ca2+呈負(fù)相關(guān)(r=-0.315、-0.250、-0.294、-0.214和-0.168，P<0.05)；此外，CHO與HCO3-呈負(fù)相關(guān)(r=-0.232，P<0.05)，與TBIL、TBA和Ca2+呈正相關(guān)(r=0.497、0.430和0.218，P<0.05)；其他各成分間無相關(guān)性(P>0.05)，見表2。

表2 華支睪吸蟲感染者膽汁各成分間的相關(guān)系數(shù)(n=68)

注：相關(guān)系數(shù)比較，*P<0.05

3 討 論

人體感染華支睪吸蟲后，可引起一系列的肝膽系統(tǒng)損傷，引起膽囊炎、膽結(jié)石甚至膽管癌發(fā)生[9-11]。其中，華支睪吸蟲感染引起膽囊結(jié)石已有報(bào)道證實(shí)，但其具體機(jī)制仍不清楚[4-6]。大多數(shù)研究認(rèn)為人體內(nèi)膽結(jié)石的產(chǎn)生和結(jié)石類型與膽汁的成分改變密不可分，但是在華支睪吸蟲病流行區(qū)，膽囊結(jié)石患者的人群分布和結(jié)石類型與其他地區(qū)明顯不同[12-14]。因此本文作者推測，與普通膽結(jié)石患者相比，華支睪吸蟲感染的膽結(jié)石患者體內(nèi)的膽汁成分可能也有不同。基于此，作者測定對比了華支睪吸蟲感染膽結(jié)石患者與非感染患者的13種膽汁成分，并分析了感染患者各種成分之間的相關(guān)性，得到了一些有意義的結(jié)果和發(fā)現(xiàn)。

本研究發(fā)現(xiàn)，與普通膽囊結(jié)石患者相比，華支睪吸蟲感染患者的膽汁中pH和HCO3-的水平較高(二者呈正相關(guān)，r=0.522)，而CHO水平較低(P<0.05)。從結(jié)果可以看出，由于感染患者膽汁成分的不同，比如較高的HCO3-，可能會導(dǎo)致膽囊內(nèi)產(chǎn)生較多的CO2，過多的CO2在一定條件下與Ca2+結(jié)合產(chǎn)生碳酸鈣結(jié)晶或沉淀，進(jìn)而逐步形成以碳酸鈣為主要成分的結(jié)石；同時(shí)，感染患者膽汁中的膽固醇水平較低，因此由于膽固醇過飽和而導(dǎo)致膽固醇結(jié)石發(fā)生的可能性變小。上述兩種膽汁成分改變情況同時(shí)存在，最終引起華支睪吸蟲感染患者的膽結(jié)石類型與普通患者明顯不同：即感染者的膽結(jié)石類型以碳酸鈣類結(jié)石為主，膽固醇類結(jié)石最少，而普通患者絕大多數(shù)為膽固醇結(jié)石。本研究還發(fā)現(xiàn)，感染患者膽汁中的MALB水平高于非感染患者，推測可能與華支睪吸蟲感染所致肝內(nèi)膽管局部機(jī)械損傷及炎癥引起的膽管通透性增加有關(guān)，但由于研究的局限，還需要進(jìn)一步研究證實(shí)。

為了進(jìn)一步了解華支睪吸蟲感染與膽汁成分改變的關(guān)系，筆者還分析了膽汁中各種成分間的相關(guān)性。結(jié)果顯示，陽性組膽汁中的MALB與TBIL和Ca2+水平，pH與HCO3-之間呈正相關(guān)(r=0.522，P<0.05)，提示華支睪吸蟲感染引起肝內(nèi)膽管通透性及膽管內(nèi)外離子交換改變，進(jìn)而導(dǎo)致膽汁的整體化學(xué)性質(zhì)和相應(yīng)功能改變的可能性。同時(shí)，由于HCO3-和(或)pH 與TBIL、TBA、CHO和Ca2+之間呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)，因此在膽汁中高HCO3-(與之對應(yīng)較高的pH)和高M(jìn)ALB水平共同作用下，陽性組的膽汁中CHO水平相對較低、CO2相對過多、但TBIL、TBA和Ca2+水平改變不顯著，進(jìn)而造成膽固醇結(jié)石的可能性降低，碳酸鈣類和膽紅素類結(jié)石更易形成的結(jié)局[15]。此外，感染者膽汁中pH與IgA、IgG與補(bǔ)體C3之間呈負(fù)相關(guān)，提示華支睪吸蟲感染者尤其是膽汁高pH者可能發(fā)生分泌型抗體IgA減少及膽道的免疫防御改變，這可能是華支睪吸蟲持續(xù)感染或抵抗機(jī)體膽管系統(tǒng)局部免疫功能的機(jī)制之一。需要注意的是，由于本研究的樣本只限于膽囊結(jié)石患者，是否全部華支睪吸蟲感染人群都存在上述膽汁成分的改變，還需要更多的研究來證實(shí)。

綜上所述，華支睪吸蟲感染的膽結(jié)石患者膽汁成分發(fā)生改變，主要表現(xiàn)為HCO3-及其相關(guān)的pH、MALB增高，以及相關(guān)的膽固醇減低及潛在的膽道局部免疫功能改變，這種改變的長期存在，可能最終導(dǎo)致膽囊結(jié)石的發(fā)生及結(jié)石主要成分的不同。膽汁成分的研究，有助于從另一個(gè)方面了解華支睪吸蟲感染所致膽道系統(tǒng)損傷的機(jī)制、發(fā)展和結(jié)局，為臨床治療和相關(guān)研究提供重要參考。