非小細(xì)胞肺癌組織中EMA表達(dá)水平與疾病預(yù)后的關(guān)系

寧 宇

(解放軍第251醫(yī)院，河北 張家口 075000)

非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)是肺癌最常見(jiàn)的臨床類(lèi)型，癌細(xì)胞的侵襲能力較強(qiáng)，手術(shù)后極易復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移，導(dǎo)致預(yù)后差，因而目前肺癌研究的重點(diǎn)是了解NSCLC臨床侵襲及轉(zhuǎn)移的機(jī)制，探尋與NSCLC預(yù)后密切相關(guān)的標(biāo)志物，探索新的臨床治療靶向，以改善預(yù)后[1-2]。上皮膜抗原(EMA)是一種表達(dá)在人體正常上皮組織或者上皮組織腫瘤中的多態(tài)性跨膜糖蛋白(P-gp)，其形態(tài)分為胞內(nèi)區(qū)域、胞外區(qū)域以及跨膜區(qū)域，其中胞外區(qū)域?yàn)楦叨忍腔MA參與調(diào)節(jié)機(jī)體內(nèi)多種信號(hào)通路，高水平的EMA可能促進(jìn)癌細(xì)胞的發(fā)生發(fā)展、轉(zhuǎn)移以及耐藥等[3-5]。目前，EMA在國(guó)內(nèi)外上皮源性腫瘤的臨床鑒別診斷中發(fā)揮著重要作用，但是NSCLC組織中EMA水平與疾病預(yù)后的關(guān)聯(lián)性以及EMA在不同肺癌分期的表達(dá)意義還沒(méi)有明確。本研究擬通過(guò)檢測(cè)不同類(lèi)型NSCLC肺癌術(shù)后腫瘤組織中的EMA水平，分析EMA水平與肺癌的病理因素以及疾病預(yù)后的臨床關(guān)系，以探尋NSCLC預(yù)后評(píng)估的可靠指標(biāo)。

1 臨床資料

1.1一般資料 選擇2010年1月—2015年1月在解放軍第251醫(yī)院行腫瘤根治術(shù)的NSCLC患者84例(腫瘤組織標(biāo)本84個(gè))。患者均為本地區(qū)常住人口；根治手術(shù)之前均沒(méi)有進(jìn)行任何方式的抗腫瘤治療；術(shù)后均在院接受了規(guī)范化的輔助性治療；預(yù)估生存期超過(guò)3個(gè)月；臨床資料以及隨訪(fǎng)資料詳細(xì)、完整、可靠。排除合并其他類(lèi)型的惡性腫瘤患者，隨訪(fǎng)期間非因肺癌而死亡的患者。入組的84例患者中，男55例，女29例；年齡34～75(58.3±7.2)歲。通過(guò)病理檢查確診，其中肺腺癌40例，肺鱗癌44例。根據(jù)國(guó)際抗癌聯(lián)盟在2009年發(fā)布的TNM分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行臨床分期，其中Ⅰ～ⅡA期48例，ⅡB～Ⅲ期36例。

1.2方法 采用免疫組化法測(cè)定EMA在84個(gè)腫瘤組織中的表達(dá)情況。切除的肺癌組織樣本采用甲醛固定，并石蠟包埋，連續(xù)性切片，厚度2.5 μm；全部切片均置入62 ℃的烤箱中烘烤2 h后，將切片在二甲苯中進(jìn)行脫蠟以及在梯度乙醇中脫水，再用過(guò)氧化氫(濃度為3%)浸泡15 min，接著在檸檬酸緩沖液(pH 6.0)中修復(fù)30 min，再予血清封閉60 min，最后滴入上皮膜抗體，放置于4 ℃環(huán)境中8～12 h。在37 ℃中培育生物素標(biāo)記的二抗試劑30 min，二氨基聯(lián)苯胺顯色，蘇木素染色細(xì)胞核。細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞膜中觀察到棕褐色染色為EMA陽(yáng)性表達(dá)。

1.3觀察項(xiàng)目 ①讀片。組織切片的染色結(jié)果經(jīng)2位病理科醫(yī)生以雙盲方式進(jìn)行判定。每一個(gè)組織切片須隨機(jī)選擇5個(gè)使用高倍鏡進(jìn)行細(xì)胞染色觀察。根據(jù)細(xì)胞染色的程度進(jìn)行評(píng)分：沒(méi)有染色，為0分；呈弱陽(yáng)性，為1分；呈陽(yáng)性，為2分；呈強(qiáng)陽(yáng)性，為3分。根據(jù)細(xì)胞染色的范圍進(jìn)行評(píng)分：染色范圍≤5%，計(jì)0分；>5%～25%計(jì)1分；>25%～50%，計(jì)2分；>50%～75%，計(jì)3分；>75%，計(jì)4分。以綜合分(染色的強(qiáng)度與范圍之積)來(lái)判定EMA表達(dá)[6]：綜合分0分為陰性(-)，1～4分為弱陽(yáng)性(+)，5～8分為中強(qiáng)度陽(yáng)性()，9～12分為強(qiáng)陽(yáng)性()。綜合分超過(guò)1.5分為EMA表達(dá)陽(yáng)性，其是4分及以下為EMA低表達(dá)，4分以上為EMA高表達(dá)[7]。②隨訪(fǎng)。84例患者均以電話(huà)、上門(mén)或者門(mén)診方式進(jìn)行隨訪(fǎng)，患者總體生存隨訪(fǎng)的終止是死亡或者隨訪(fǎng)的截止日期(2017年1月31日)。無(wú)復(fù)發(fā)生存時(shí)間為從術(shù)后至有明確的臨床證據(jù)表明發(fā)生肺癌復(fù)發(fā)或者轉(zhuǎn)移。若直至隨訪(fǎng)的截止日期，患者仍然沒(méi)有出現(xiàn)復(fù)發(fā)或者轉(zhuǎn)移，隨訪(fǎng)的終點(diǎn)就是隨訪(fǎng)的截止時(shí)期。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理所得數(shù)據(jù)。計(jì)數(shù)資料比較用2檢驗(yàn)；EMA與甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子(TTF-1)表達(dá)之間關(guān)聯(lián)性運(yùn)用肯德?tīng)柕燃?jí)相關(guān)系數(shù)(Kendall)進(jìn)行分析；患者生存狀況運(yùn)用非參數(shù)的Kaplan-meier法進(jìn)行分析，以L(fǎng)og-rank方法檢驗(yàn)生存的差異性。檢驗(yàn)水準(zhǔn)均為α=0.05。

2 結(jié) 果

2.1NSCLC組織中EMA的表達(dá)水平 84例NSCLC組織中，EMA陽(yáng)性表達(dá)66例(78.6%)，陰性表達(dá)18例(21.4%)；EMA高表達(dá)44例(52.4%)，低表達(dá)40例(47.6%)。40例肺腺癌患者中EMA高表達(dá)28例(70.0%)，44例肺鱗癌患者中EMA高表達(dá)15例(34.1%)，肺腺癌EMA高表達(dá)比率明顯高于肺鱗癌(P<0.05)。

2.284例NSCLC組織中EMA的表達(dá)水平與臨床參數(shù)間的關(guān)系 腫瘤組織中EMA表達(dá)水平與肺癌的臨床分型、周?chē)馨图?xì)胞浸潤(rùn)程度、分化程度以及2年內(nèi)復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，EMA在肺腺癌、中大量周?chē)馨图?xì)胞浸潤(rùn)、腫瘤細(xì)胞中低分化以及2年內(nèi)復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移患者中高表達(dá)比率顯著高于肺鱗癌、少量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)、高分化及2年內(nèi)無(wú)復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移者(P均<0.05)。見(jiàn)表1。

2.3EMA表達(dá)水平與疾病預(yù)后的關(guān)聯(lián) 在84例NSCLC組織中，檢測(cè)TTF-1的有51例，將這51例NSCLC組織中所測(cè)得的TTF-1水平與EMA表達(dá)水平運(yùn)用Kendall系數(shù)進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，EMA高表達(dá)30例，低表達(dá)21例，其中TTF-1陰性18例，陽(yáng)性33例。EMA低表達(dá)同時(shí)TTF-1陰性13例，EMA高表達(dá)同時(shí)TTF-1陽(yáng)性24例。EMA表達(dá)水平與TTF-1表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.439，P<0.05)。

表1 84例NSCLC組織EMA表達(dá)水平與臨床參數(shù)關(guān)系 例(%)

84例患者均成功隨訪(fǎng)，中位隨訪(fǎng)時(shí)間為50個(gè)月，共死亡34例，均由肺癌導(dǎo)致。84例患者根治切除術(shù)后，50例出現(xiàn)復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移，其中肺腺癌34例，肺鱗癌16例。肺腺癌患者中EMA高表達(dá)與低表達(dá)者總體生存期分別為46個(gè)月(95%CI[0.498，2.591])、61個(gè)月(95%CI[0.388，2.004])；肺鱗癌中EMA高表達(dá)與低表達(dá)者總體生存期分別為50個(gè)月(95%CI[0.460，3.081])、58個(gè)月(95%CI[0.355，2.116])。運(yùn)用非參數(shù)的Kaplan-meier法分析顯示，ⅡB～Ⅲ期肺鱗癌、肺腺癌組織中EMA表達(dá)水平與疾病預(yù)后沒(méi)有明顯的相關(guān)性；而Ⅰ～ⅡA期肺鱗癌組織中EMA高表達(dá)，預(yù)后相對(duì)于中晚期明顯較差(P=0.025)，預(yù)示著早期的肺鱗癌預(yù)后與腫瘤組織中EMA表達(dá)水平可能存在關(guān)聯(lián)。

3 討 論

EMA屬于黏蛋白家族，其在基因轉(zhuǎn)錄之后會(huì)產(chǎn)生不同的互補(bǔ)脫氧核糖核酸產(chǎn)物，而其編碼可形成相應(yīng)同種型的蛋白產(chǎn)物，包括分泌型以及膜結(jié)合型等。目前臨床已經(jīng)證實(shí)，EMA水平表達(dá)與多種類(lèi)人體惡性腫瘤的預(yù)后密切相關(guān)，其也成為免疫學(xué)治療以及靶向治療研究的新方向[8]。但EMA在NSCLC組織中的表達(dá)以及EMA與臨床病理類(lèi)型、腫瘤分期、復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移以及疾病預(yù)后之間的關(guān)系研究較少。本研究結(jié)果提示，無(wú)論是肺鱗癌還是肺腺癌，EMA表達(dá)水平與腫瘤細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移有著密切關(guān)系，且對(duì)不同腫瘤細(xì)胞分化、不同腫瘤分期的肺鱗癌預(yù)后很有意義。

核轉(zhuǎn)錄因子TTF-1可以參與及調(diào)解人體內(nèi)多種基因的表達(dá)，并且對(duì)機(jī)體的甲狀腺功能發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用，同時(shí)TTF-1在肺組織上皮的形成、發(fā)育以及分化等過(guò)程中也發(fā)揮著主要作用。甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子陽(yáng)性表達(dá)主要表現(xiàn)在腺癌以及小細(xì)胞癌等，其與NSCLC的預(yù)后也相關(guān)，Anagnostou等[9]研究提示，TTF-1在Ⅰ期NSCLC中低表達(dá)預(yù)示著疾病可能有更佳的預(yù)后。本研究結(jié)果顯示，NSCLC組織中的EMA表達(dá)水平與TTF-1表達(dá)水平呈正相關(guān)。通過(guò)綜合性分析，可能是EMA通過(guò)對(duì)肺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)分化、黏附及遷移產(chǎn)生一定的影響，從而促使NSCLC特別是肺鱗癌2年內(nèi)的復(fù)發(fā)或者轉(zhuǎn)移，最終影響疾病的預(yù)后，這其中也離不開(kāi)TTF-1的作用。

EMA表達(dá)水平與臨床多種癌癥預(yù)后有相關(guān)，EMA呈陽(yáng)性表達(dá)的惡性腫瘤患者，其預(yù)后也相對(duì)較差。Nagai等[10]研究顯示，Ⅰ期NSCLC組織中EMA低表達(dá)，相對(duì)于高表達(dá)者預(yù)后要差。但Situ等[11]認(rèn)為ⅠB期NSCLC組織中EMA高表達(dá)提示具有較差的預(yù)后。這兩項(xiàng)研究結(jié)果明確EMA在臨床NSCLC中的預(yù)后判斷。本研究結(jié)果顯示，ⅡB～ⅢA期肺鱗癌、不同分期的肺腺癌組織中EMA表達(dá)水平與疾病預(yù)后無(wú)明顯相關(guān)，但是EMA在Ⅰ～ⅡA期肺鱗癌組織中的高表達(dá)提示患者具有較差的預(yù)后，可以認(rèn)為在早期肺鱗癌中，EMA有可能對(duì)腫瘤進(jìn)展起著一定的促進(jìn)作用，EMA表達(dá)水平在早期肺鱗癌預(yù)后評(píng)價(jià)中具有重要的指導(dǎo)作用。但是由于本研究選擇的Ⅰ～ⅡA期肺鱗癌僅有21例，樣本數(shù)量較小，還需要今后大樣本、多因素研究進(jìn)行探討。

總之，EMA表達(dá)水平與肺癌的臨床分型、腫瘤細(xì)胞侵襲、分化以及2年復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，尤其是EMA表達(dá)水平對(duì)Ⅰ～ⅡA肺鱗癌預(yù)后有著較高的預(yù)示作用，可能是以后臨床研究早期肺鱗癌疾病預(yù)后的新焦點(diǎn)。