高比例代乳粉對成年黔北麻羊瘤胃內環境及血漿生化指標的影響

韓 娥， 吳文旋，2*， 吳佳海， 孫 倫， 楊 康， 莘海亮

（1.貴州大學動物科學學院，貴州貴陽 550025；2.貴州大學新農村發展研究院，貴州貴陽 550025；3.貴州省草業研究所，貴州貴陽 550006；4.黔東南民族職業技術學院，貴州凱里 556000）

代乳粉營養豐富、適口性好、易消化吸收，常作為母乳的替代品，廣泛應用于幼齡哺乳動物。對早期斷奶的羔羊飼喂營養合理的代乳粉，能夠促進羔羊的生長發育（單俊娟等，2017），提高飼料養分利用效率（王海超等，2015），降低養殖成本。此外，用代乳粉飼喂早期斷奶羔羊還有利于母羊身體狀況迅速恢復，促使生產母羊較早地進入下一個發情繁殖周期，提高經濟效益（單俊娟，2017）。瘤胃作為反芻動物重要的消化器官，飼料中70%～85%的可消化干物質和約50%的粗纖維均在瘤胃中經微生物作用合成機體所需營養 （張彩英等，2010）。因此，瘤胃的早期發育直接影響到反芻動物成年后的采食和消化吸收能力。有研究發現，羔羊在7日齡時瘤胃即有細菌、原蟲、總揮發性脂肪酸，且數量隨年齡的增長大幅上升，說明羔羊在7日齡瘤胃的消化發育就已開始 （李鳳鳴等，2017）。代乳粉豐富的養分可使瘤胃產生較多的揮發性脂肪酸，改善瘤胃發酵環境，刺激瘤胃發育，加快建立瘤胃消化代謝的動態平衡 （馬俊南等，2017；Gharehbash 等，2009）。

研究表明，代乳粉不僅對自然斷奶后的生長山羊有積極的作用（田興舟等，2015），對成年動物也有顯著的影響，表現在飼糧中添加5%的代乳粉能顯著提高成年黔北麻羊瘤胃揮發性脂肪酸含量，改善血漿葡萄糖和甘油三酯濃度 （韓娥等，2016）。由此推測，5%以上水平代乳粉對成年山羊的瘤胃及血液也有一定的改善作用，因此，本試驗在山羊飼糧中添加5%以上的代乳粉，研究高比例代乳粉對成年黔北麻羊瘤胃內環境及血漿生化指標的影響，進一步確定代乳粉在成年山羊中的適宜使用水平，為代乳粉在成年山羊中的科學使用提供數據參考和技術積累。

1 材料與方法

1.1 試驗設計 試驗采用單因素試驗設計，選擇體況良好，體重和年齡相接近[（33.05±2.18）kg]的成年黔北麻羊18只，隨機分為3組：對照組、處理1組、處理2組，每組6個重復，每個重復1只羊。其中對照組飼喂基礎日糧，處理1組和處理2組在基礎日糧中分別添加5%、10%的代乳粉。試羊采用單籠舍飼，統一飼養管理，每天定時定量飼喂，自由飲水。試驗期間定期對羊舍進行清潔消毒，每天清理食槽。試驗持續35 d，包括分組適應觀察期20 d，預飼期10 d，正式期5 d。

1.2 日糧組成 試羊日糧組成參照《中國肉用山羊飼養標準（2004）》配制，由羊草干草、玉米、豆粕、麩皮、菜籽餅、預混料等組合而成（表1），精粗比為50∶50。代乳粉由中國農業科學院飼料研究所提供，其營養成分包括：干物質94.0%、粗蛋白質23.0%、粗脂肪12.0%、鈣0.6% ～1.5%、磷 0.5% ～1.2%、賴氨酸2.2%、蛋氨酸1.0%、蘇氨酸1.0%、食鹽0.1%～1.2%、維生素A 13000～50000 IU/kg、維生素D33000～10000 IU/kg、維生素E 70 IU/kg。

表1 山羊基礎日糧組成及營養水平（干物質基礎）

1.3 檢測指標

1.3.1 日糧養分 自試驗觀察期開始，每周采集一次飼糧樣品，待試驗結束后，將其混勻、烘干、粉碎、過篩，制成分析樣品，測定飼糧中能量、干物質、粗蛋白質、中性洗滌纖維、酸性洗滌纖維、粗脂肪、粗灰分的含量。

1.3.2 瘤胃內環境參數 在正式期倒數第2天晨飼前對黔北麻羊的瘤胃液進行采集。使用胃管式瘤胃液采樣器經黔北麻羊口腔插入瘤胃，抽取50 mL瘤胃液，并利用便攜式pH計立即測定pH。剩余瘤胃液由4層紗布過濾，裝入10 mL離心管，置-20℃冰箱中冷凍保存，用于測定瘤胃發酵參數。其中，氨態氮（NH3-N）濃度的測定采用比色法（馮宗慈等，1993）、瘤胃纖維素酶活性（木聚糖酶、纖維二糖酶與羧甲基纖維素酶）則參照王加啟（2011）的方法測定。

1.3.3 血液生化指標 在正式期最后1天晨飼前使用一次性肝素鈉抗凝血真空采血管于頸靜脈采血10 mL，微搖混勻并常溫靜置10 min后以1006 g離心15 min，分離血漿，將收集到的上層血漿分裝于1.5 mL指形管，置于-20℃冰箱中保存。測定指標有：葡萄糖（Glu）、尿素氮（UN）、總蛋白（TP）、白蛋白（Alb）、過氧化氫酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）。利用檢測試劑盒進行各項血漿生化指標的測定，檢測試劑盒由南京建成生物工程研究所提供。

1.4 數據處理與統計分析 試驗數據運用Excel 2010進行整理，利用SAS 9.1統計處理軟件進行方差分析，各處理組平均數多重比較采用Duncan’s法進行。試驗結果用 “平均值±標準差”表示。各組間差異顯著水平為P＜0.05。

2 結果與分析

2.1 瘤胃內環境及纖維素酶活性 由表2可知，試驗各組間pH差異不顯著（P＞0.05），且均在正常范圍內。各組間NH3-N、羧甲基纖維素酶與纖維二糖酶水平均無顯著差異（P＞0.05）。處理2組木聚糖酶活顯著高于對照組41.51%（P＜0.05）；處理1組與對照組、處理2組均差異不顯著（P＞0.05），但處理1組較對照組高20.67%。

2.2 血漿生化指標 由表3可知，代乳粉對血漿Glu、UN、TP、Alb、CAT 的影響較小，各組間差異均不顯著（P＞0.05）。對于SOD，處理1組、處理2組均顯著高于對照組（P＜0.05），分別較對照組高17.84%、26.38%；2個處理組間無顯著差異 （P＞0.05）。對于GSH-Px，處理1組顯著高于對照組19.09%（P＜0.05）；處理2組和處理1組、對照組均無顯著差異（P＞0.05）。

表2 代乳粉對成年山羊瘤胃內環境及纖維素酶活性的影響

表3 代乳粉對成年山羊血漿生化指標的影響

3 討論

3.1 瘤胃pH、氨態氮濃度 瘤胃pH的變動反映了瘤胃內有機酸數量和唾液進入量的變化情況。主要與日糧類型、采食和反芻時間有關。保持pH在一個正常的范圍是保證瘤胃正常發酵的前提。本試驗中，瘤胃pH為7.01～7.03，數值差異很小，處于正常范圍。這說明添加代乳粉不會影響黔北麻羊瘤胃發酵。

反芻動物瘤胃NH3-N是飼料粗蛋白質、內源性蛋白質和非蛋白氮在瘤胃內降解的產物，同時也是許多瘤胃細菌合成微生物蛋白的氮源之一（劉潔等，2012）。其濃度可間接反映特定飼糧組成下的蛋白質降解速率及微生物合成速率之間的平衡狀態（姜旭明等，2009）。NH3-N濃度過高或過低都會對瘤胃產生不利影響。濃度過高，說明瘤胃微生物降解氮源釋放NH3的速率超過了微生物利用NH3合成自身蛋白質的速率，這會增加瘤胃氮循環中氮素的損失，反之則會限制MCP合成和分解纖維素的效率（黃開武等，2015）。研究報道，瘤胃液中的氨態氮濃度處于2 mg/100 mL以上便可滿足瘤胃微生物合成蛋白質的需要，適宜的氨態氮濃度為 6.3～27.5 mg/100 mL （Bürger等，20 00；Clark等，1992）。本課題組前期試驗結果發現，各組瘤胃NH3-N濃度為10.53～11.58 mg/100 mL，且添加5%代乳粉處理組與對照組NH3-N濃度相比無顯著差異（韓娥等，2016）。本試驗中，增加代乳粉的比例，各組瘤胃NH3-N濃度為10.75～13.37 mg/100 mL，與前期試驗相比較高，這可能與試驗所使用的飼糧有關，但各組間NH3-N濃度差異均不顯著。由此說明即使增加代乳粉在飼糧中的添加比例也不會對成年山羊瘤胃發酵產生顯著影響。用含中等質量粗蛋白質的代乳粉以不同濃度（4～8 L/d）飼喂斷奶犢牛，結果發現代乳粉對瘤胃pH及NH3-N濃度影響均不顯著（Paula等，2017）。Silper等（2014）也得出相似的結論。

3.2 瘤胃纖維素酶活性 成年反芻動物對飼糧養分的消化大部分都在瘤胃中酶的作用下完成，這些酶由瘤胃微生物所分泌，其活性能反映出瘤胃微生物對飼糧中纖維物質的分解利用能力以及合成微生物蛋白的效率（楊璐玲等，2013）。其中，羧甲基纖維素酶與纖維二糖酶的活性可以反映瘤胃微生物分解消化纖維素的能力，而木聚糖酶代表的是一組能夠水解木聚糖底物生成木糖的酶類，可以反映瘤胃微生物分解消化半纖維素的能力（劉彩娟等，2011；王蕾等，2009）。

研究表明，添加2.5%和5%代乳粉均能顯著提高羧甲基纖維素酶活性（韓娥等，2016）。在本試驗中，處理1組和處理2組羧甲基纖維素酶雖均高于對照組，未表現出差異顯著性，這與前期試驗存在差異，原因可能是試驗所使用的飼糧不同，其中的營養組成及含量存有差異，從而產生不同的試驗結果。本試驗處理1組（5%代乳粉）木聚糖酶活性與對照組無顯著差異，但隨著代乳粉水平的增加，木聚糖酶活性表現出顯著差異，即處理2組（10%代乳粉）木聚糖酶活性顯著高于對照組。這顯示，添加10%代乳粉能增加某些纖維分解菌的數量和活力，提高纖維分解菌分解飼糧中纖維物質的能力。

3.3 血漿生化指標 血漿生化指標是判定機體組織正常生理功能的參數，能夠有效的反映機體的物質代謝變化及相關器官的健康狀況，為預防和治療動物疾病起指導作用。血糖是動物機體內能量平衡的重要指標，反映了機體內糖的生成和組織消耗之間的動態平衡，血糖的相對恒定對維持機體的正常生理功能具有重要意義（曹少奇等，2016）。本試驗結果顯示，各組間血糖含量無顯著差異，說明添加代乳粉對成年山羊血糖含量影響較小，機體血糖處于較為穩定的狀態。王波等（2016）在羔羊中也得到了類似的結果。血漿TP、Alb和UN的含量變化能準確反映機體蛋白質代謝和飼料蛋白質的利用效率。研究表明，在成年山羊飼糧中添加5%代乳粉對血漿生化指標（UN、TP、Alb）無顯著影響（韓娥等，2016）。 在本試驗中將代乳粉添加量增加到10%，對成年山羊血漿生化指標仍無顯著影響。說明在飼糧中添加代乳粉不影響山羊體內蛋白質的代謝及利用，這可能是因為飼糧中蛋白質的含量已經能夠滿足山羊機體對蛋白質的需要，此時再增加蛋白質對機體的影響不大；另外，本試驗選用成年山羊作為試驗動物，與羔羊處于不同的生理階段，雖然在成年山羊飼糧中添加代乳粉有改善瘤胃纖維素酶活性的作用，但與羔羊相比，代乳粉的營養學作用被削弱。

自由基是機體發生氧化還原反應過程中產生的，機體內存在完善的抗氧化系統，此系統可以清除自由基，使機體免受氧化損傷。SOD、GSH-Px和CAT是機體內清除自由基的主要酶類，當機體中有過量的過氧化物存在時這些酶類便會發揮作用，將對這些過氧化物進行捕捉和清除。Soberson等（2012）等報道，代乳粉具有較強的抗氧化能力，哺喂適宜水平代乳粉，可有效減少氧化損傷，提高動物抗氧化能力，增強機體的免疫防御。費水英（2009）認為，以適宜的植物蛋白質（70%）代乳粉飼喂犢牛，可有利于刺激機體抗氧化體系的建立。以黔北麻羊羔羊作為試驗動物研究發現，抗氧化能力并非隨代乳粉添加水平的增加而持續提高，存在一個閾值（即4%），在飼糧中添加4%代乳粉能顯著提高羔羊血漿中SOD水平，但對GSH-Px影響不大（田興舟等，2015）。本試驗中，處理1組SOD與GSH-Px含量顯著高于對照組，說明添加代乳粉能夠顯著提高血漿SOD和GSH-Px的含量，各組SOD含量隨著代乳粉的增加而增加，但對于GSH-Px卻存在一個閾值，代乳粉的添加量高出5%時GSH-Px將不再提高。由此說明，在黔北麻羊不同的生理時期使用代乳粉，其作用的效果不盡相同，代乳粉添加量并非越多越好。生產中不宜添加過多的代乳粉。綜合來看，以5%代乳粉添加量為宜。

4 結論

在本試驗條件下，在飼糧中添加5%和10%代乳粉均能改善成年黔北麻羊瘤胃內環境、提高血漿抗氧化應激能力；10%組未能進一步表現出有益作用。總體來看，生產中建議添加比例為5%。