高效液相色譜法檢測鹽酸左氧氟沙星的方法穩定性研究

陳宵娜 高錦國

（大同市食品藥品檢驗檢測中心 山西 大同 037300）

前言

左氧氟沙星（levofloxacin）屬于第三代喹諾酮類藥物，是氧氟沙星的左旋體，體外抗菌活性約為氧氟沙星的兩倍，是右旋體的8～128倍，且不良反應發生率低[1]。它的主要作用機理是通過抑制細菌DNA旋轉酶細菌拓撲異構酶ll的活性，阻礙細菌DNA的復制而達到抗菌作用。左氧氟沙星具有抗菌譜廣，抗菌作用強的特點，對大多數腸桿菌科細菌及革蘭陰性菌有較強的的抗菌活性。對部分革蘭陽性菌和軍團菌、支原體、衣原體也有良好的抗菌作用。臨床上主要用于敏感細菌引起的輕、中度感染。

關于它的分析方法研究報道的主要有高效液相色譜法、熒光光度法、紫外分光光度法。本文采用高效液相色譜法，考察了色譜條件和測定的線性范圍，對藥品進行含量測定，并分析了左氧氟沙星隨時間的變化，結果表明，此方法簡便，專屬性強。

1.儀器與試藥

儀器：BS124S德國賽多利斯電子天平、KQ-500DE數控超聲波清洗器、METTLER 320 pH計、島津LC-2010AHT高效液相色譜儀。

試藥：左氧氟沙星對照品批號為130455-201607（中國藥品生物制品檢定所，含量97.3%），萬通鹽酸左氧氟沙星膠囊，花園藥業股份有限公司，批號為20170602；豪克鹽酸左氧氟沙星膠囊，四川好醫生藥業集團有限公司，批號為171103；葵花古芳鹽酸左氧氟沙星膠囊，河南藍圖制藥有限公司，批號為17061701；仁和鹽酸左氧氟沙星膠囊，海南海神同洲制藥有限公司，批號為1705082；特一鹽酸左氧氟沙星膠囊，海南海力制藥有限公司，批號為170702。乙腈級別為色譜純，其他為分析純。

2.方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：InertSustainC18（250mm×4.6mm，5μm）；柱溫：30℃；流動相：0.05mol·L-1磷酸二氫鉀溶液（用磷酸調pH至4.0）-乙腈（83:17）；流速：1.0ml·min-1；檢測波長：295nm，進樣體積：10μL。

2.2 系統適應性驗證

對上述色譜條件進行試驗分析后發現：鹽酸左氧氟沙星色譜主峰與樣品中其他成分的色譜峰達到了有效分離[16]，試驗后的理論塔板數為4400，分離度為2.7，相對保留時間為8.1min。

2.3 重復性

精密藥品內容物適量，加0.05mol·L-1磷酸二氫鉀溶液（pH為4.0）溶解并定量稀釋制成每1ml中約含1.0mg的溶液，濾過，作為重復性測定試液。進行6次測定，左氧氟沙星峰面積RSD為0.012%，重復性良好。

2.4 重現性

取5個不同批號的樣品，在上述色譜條件下分別測定含量，RSD 分別為 0.058%、0.059%、0.058%、0.178%、0.212%。

2.5 線性范圍

精密稱取左氧氟沙星對照品適量，加流動相溶解并稀釋成0.01、0.05、0.1、0.5、1mg·mL-1，分別進樣10μl，記錄色譜峰，以左氧氟沙星濃度為縱坐標，以峰面積為橫坐標，進行線性回歸，得回歸方程為Y=2.104683×10-8X-1.009133×10-2r=0.9993，結果見圖1。

圖1 左氧氟沙星對照品標準曲線圖

2.6 加樣回收率

精密稱取鹽酸左氧氟沙星藥品適量，置50mL容量瓶中，加入0.05 mg·mL-1磷酸二氫鉀溶液溶解，定容，分別量取1mL溶液置于3個25mL容量瓶中。精密量取左氧氟沙星對照品儲備液2.0、2.5、3.0mL，分別置于上述25mL容量瓶中，用流動相定容，搖勻，在上述色譜條件下進行測定，計算回收率，平均回收率為98.91%，結果見下表1。

表1 加樣回收率試驗結果

2.7 穩定性

取樣品內容物適量，精密稱定，加0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液（pH為4.0）溶解并定量稀釋制成每1ml中約含0.1mg的溶液，濾過，取續濾液備用。與室溫下分別放置0，12，24，36，48，60，72h，在上述色譜條件下測定。計算每個樣品7次檢測的RSD值均小于0.5%，結果見下表2。

表2 樣品72h內穩定性檢測結果

2.8 檢測限與定量限

配制1.0×10-5，1.0×10-6，0.5×10-6mg/ml左氧氟沙星對照品溶液，進樣液相色譜，檢測限按信噪比3:1，最低檢測濃度為0.85ng/ml，定量限按信噪比10:1，最低定量濃度為2.5ng/ml[3]。

2.9 樣品測定

分別精密稱取研磨后的5批鹽酸左氧氟沙星藥劑適量，加流動相溶解并制成左氧氟沙星濃度為0.1mg/ml的溶液，濾過，取續濾液作為供試品溶液。與室溫下分別放置0，12，24，36，48，60，72h，在上述色譜條件下測定其含量，考察其藥品含量的穩定性，結果見下表3。

表3 樣品含量穩定性考察結果

3.討論

左氧氟沙星在臨床上應用廣泛，其分析涉及人類健康安全問題，它的國際標準檢測方法為高效液相色譜法，但是該方法檢測過程中要用到高氯酸鈉，高氯酸鈉不可與有機物或金屬粉末一起存放，易引起燃燒或爆炸，接觸濃硫酸也能引起爆炸，有毒，屬于高危易爆藥品，且對環境有污染。鹽酸左氧氟沙星為兩性氧化物，本實驗采用磷酸二氫鉀溶液與乙腈為流動相，出現拖尾現象，加入磷酸調節磷酸二氫鉀溶液的pH值，當pH為4時，鹽酸左氧氟沙星的峰型良好。試驗過程中通過多種不同流動相比例進行比較，最終確定流動相為0.05molL-1磷酸二氫鉀溶液（用磷酸調pH至4.0）-乙腈（83:17），色譜分離效果良好，理論塔板數為4400，鹽酸左氧氟沙星的相對保留時間為8.1min。