探討周圍Th17細胞和調節性T細胞在兒童過敏性鼻炎與支氣管哮喘中的失衡及臨床意義

楊春梅，張念凱

青島大學附屬醫院耳鼻咽喉頭頸外科，山東青島 266005

研究發現，支氣管哮喘、過敏性鼻炎相關發病機制全部為IgE介導產生的Ⅰ型變態反應，多表現為局部免疫應答，且均存在氣道高反應性[1]。而支氣管哮喘患者的氣道的重塑及炎性細胞的浸潤程度，均與周圍T細胞亞群的表達發生紊亂存在一定相關性，其中IL-17、Th17細胞因子的過量表達可促使調節性T細胞出現功能缺陷，或是顯示Treg細胞的表達水平下降，加快過敏性鼻炎進展，但臨床醫學針對Th17、Treg細胞失衡于支氣管哮喘、過敏性鼻炎發生、發展中的意義缺乏研究報道[2-3]。基于此，該研究選取2016年8月—2017年12月青島大學附屬醫院收治的120例支氣管哮喘、過敏性鼻炎患兒作為觀察對象，探討周圍Th17細胞和調節性T細胞在兒童過敏性鼻炎與支氣管哮喘中的失衡及臨床意義進行分析，為臨床防治提供參考，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇青島大學附屬醫院收治的120例支氣管哮喘、過敏性鼻炎患兒作為觀察對象，該研究病例均經醫院倫理委員會審核通過。其中支氣管哮喘組（BA組）40 例，男 23 例、女 17 例，年齡 5～10 歲，平均（8.0±0.5）歲；單純性過敏性鼻炎組（AR組）40例，男22例、女 18 例，年齡 4～12 歲，平均（7.9±0.4）歲；支氣管哮喘合并過敏性鼻炎組（BA+AR組）40例，男24例、女16例，年齡 5～11 歲，平均（7.8±0.6）歲。入選標準：所有入選患兒均經臨床檢查確診為支氣管哮喘、過敏性鼻炎；無嚴重的心、腎、肝等臟器功能疾病；研究前7 d未接受支氣管藥物治療。3組患兒的基本臨床資料對比，差異無統計學意義（P＞0.05），存在可比性。所有兒童及其家長對該研究均知情，并簽署相關同意書。

1.2 方法

所有兒童均于入院當日早晨空腹狀態下抽取4 mL肘靜脈血，應用負壓真空EP管（經肝素鈉抗凝）進行血液標本采集，標本于4 h內處理完，取全血放在流式細胞儀上實施分析；將剩余的全血經300 G/min離心操作10 min，后對上層血漿進行留取，開展血漿細胞因子測定；并對沉淀部位開展PBMC分離，后將獲取的所有標本放在-80℃冰箱內保存，待測。①外周血內CD4+/Th17+細胞及CD4+/TFoxp3+細胞的表達水平用流式細胞技術測定，后用EXPRO32 ADC軟件分析檢測結果。②肺功能檢測：選擇肺功能檢測儀對第1秒用力呼吸容積比值（FEV1%）進行檢測，正常值是≥83.0%。③血漿炎癥因子：選擇酶聯免疫吸附法對血漿 IL-6、免疫球蛋白 E（IgE）、IL-17、IL-10、轉化生長因子 β1（TGF-β1）、IL-23 表達水平進行檢測，并對450 nm處OD值進行檢測，設置空白對照組。所有操作均嚴格參照說明書執行。

1.3 觀察指標

觀察并對比兒童的外周血Th17細胞 （用CD4+/Th17+細胞代表）、Treg細胞（用CD4+/TFoxp3+細胞代表）、FEV1%、IgE、TGF-β1、IL-23 表達水平； 探討BA+AR 組患兒的 FEV1%、IgE 和 Th17、Treg、TGF-β1相關性；將r≥0.3視作存在相關性，且r值越大代表相關性越顯著。

1.4 統計方法

采用SPSS 20.0統計學軟件進行數據分析，計數資料以百分數和例數表示，采用χ2檢驗；計量資料采用（±s）表示，采用 t檢驗；P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 外周血Th17細胞及Treg細胞表達水平

BA+AR組高于BA組、AR組，差異有統計學意義（P＜0.05）；BA+AR 組低于 BA 組、AR 組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 3組兒童的外周血Th17細胞及Treg細胞表達水平對比[（±s），%]

表1 3組兒童的外周血Th17細胞及Treg細胞表達水平對比[（±s），%]

注：與 BA+AR 組對比，bP＜0.05。

組別 Th17細胞 Treg細胞BA 組（n=40）AR 組（n=40）BA+AR 組（n=40）（7.9±1.3）b（7.7±1.2）b 15.6±2.0（2.1±1.2）b（2.1±1.4）b 1.0±0.2

2.2 FEV1%與血 IgE、TGF-β1表達水平

BA+AR組低于 BA組、AR組，BA組低于 AR組，差異有統計學意義（P＜0.05）；BA+AR 組高于 BA組、AR組，BA組高于AR組，差異有統計學意義（P＜0.05）。 見表2。

表2 3組兒童的FEV1%與血IgE、TGF-β1表達水平對比（±s）

表2 3組兒童的FEV1%與血IgE、TGF-β1表達水平對比（±s）

注：與 BA+AR 組對比，bP＜0.05；與 AR 組對比，cP＜0.05。

組別 FEV1%（%） IgE（IU/mL） TGF-β1（pg/mL）BA 組（n=40）AR 組（n=40）BA+AR 組（n=40）（88.5±1.4）bc（91.3±1.7）b 80.9±5.7（201.4±55.3）bc（137.4±53.9）b 271.4±43.3（368.4±57.2）bc（401.7±55.9）b 221.3±28.5

2.3 相關性分析

BA+AR組患兒的血漿IgE水平和Th17、IL-17的表達水平顯示為正性相關，和Treg、TGF-β1的表達水平顯示為負性相關；而FEV1%水平和Th17、IL-17的表達水平顯示為負性相關，和Treg、TGF-β1的表達水平顯示為正性相關。見表3。

表3 BA+AR 組患兒的血漿 IgE、FEV1%和Th17、Treg、IL-17、TGF-β1相關性分析

3 討論

研究發現，BA、AR的相關發病機制主要為IgE介導引起的Ⅰ型變態反應，有關病理變化表現為變應原刺激機體后釋放的各種免疫活性細胞不斷參與疾病發生、發展過程，并在出現Ⅰ型變態反應條件下，血液內IgE因子能發揮結合嗜酸性粒細胞及肥大細胞的免疫功能，且直接由免疫根源對過敏生物鏈進行抑制，進而對免疫T細胞造成直擊，讓免疫T細胞的相關調控功能不斷增強，故通過檢測外周血顯示IgE過高表達，說明機體可能伴有過敏性疾病[4-5]。

研究顯示，于BA、AR患兒發病情況下，患兒的肺功能存在顯著受損，通過肺功能檢測儀實施檢測能顯示FEV1%水平降低；相關研究發現對TGF-β1水平進行動態檢測能幫助臨床醫學早期診斷、治療支氣管哮喘，因TGF-β1對間質細胞增殖及轉化、分化具有促進作用，使血管生成加快，引起細胞外相關基質合成，并于肺纖維化的不斷變性過程中激活TGF-β1，為病程進展的重要標志點[6-7]。隨著臨床醫學的深入研究：Th1/Th2細胞的水平失衡難以對哮喘具體病因進行完整解釋，而Th17、調節性T細胞作為Th1、Th2細胞的2個亞群，其中Th17細胞和其相關效應性細胞因子IL-17，于慢性炎癥及自身免疫性疾病的發展中過程中發揮促炎作用，同時Th17細胞釋放的炎性細胞因子，如 IL-6、IL-10、IL-17及 IL-23等，于集體動員及募集、活化中性粒細胞等有關方面發揮重要作用；而調節性T細胞能發揮重要的維持機體免疫穩態、抑制炎癥作用，和哮喘呼吸道炎癥存在密切相關性[8-9]。目前，越來越多研究顯示支氣管哮喘發病發與Th17/Treg細胞的失衡存在相關性，其能對存在哮喘性疾病患兒的氣道炎癥反應造成影響，但針對BA合并AR患兒發病中有無Th17/Treg細胞失衡存在缺乏報道。該研究結果顯示，BA+AR組周圍血Th17細胞水平（15.6±2.0）%，高于 BA 組（7.9±1.）%、AR 組（7.7±1.2）%，Treg細胞水平為（1.0±0.2）%，低于 BA 組（2.1±1.2）%、AR 組（2.1±1.4）%；提示 BA 合并 AR 患兒伴有Th17/Treg細胞失衡，Th17、Treg細胞參與疾病的發展，能作為治療的新靶點。這與相關學者[10]研究結果中AR+BA組Th17水平 （15.56±1.98）%， 高于BA組（7.89±1.44）%、AR 組（7.68±1.40）%具有相似性。 該研究發現，BA+AR組的 TGF-β1、FEV1%水平低于BA組、AR組；故BA+AR組患兒的外周血 IgE、FEV1%、TGF-β1表達水平和BA組、AR組存在明顯差異；分析可能和Th17/Treg細胞失衡存在相關性。同時，BA+AR組患兒的血漿IgE水平和Th17的水平顯示為正性相關，和Treg、TGF-β1的水平顯示為負性相關；而FEV1%水平和Th17水平顯示為負性相關，和Treg、TGF-β1的水平顯示為正性相關；說明BA合并AR患兒伴有Th17/Treg細胞失衡，表達水平和FEV1%、IgE存在相關性，能為臨床診治提供參考。

綜上所述，兒童過敏性鼻炎與支氣管哮喘的周圍Th17細胞和調節性T細胞存在失衡情況，其表達水平和IgE、FEV1%具有一定相關性，及時檢測IgE、FEV1%及Th17/Treg細胞水平，能為臨床診治提供信息。