探討周圍Th17細(xì)胞和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在兒童過敏性鼻炎與支氣管哮喘中的失衡及臨床意義

楊春梅，張念凱

青島大學(xué)附屬醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科，山東青島 266005

研究發(fā)現(xiàn)，支氣管哮喘、過敏性鼻炎相關(guān)發(fā)病機(jī)制全部為IgE介導(dǎo)產(chǎn)生的Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)，多表現(xiàn)為局部免疫應(yīng)答，且均存在氣道高反應(yīng)性[1]。而支氣管哮喘患者的氣道的重塑及炎性細(xì)胞的浸潤程度，均與周圍T細(xì)胞亞群的表達(dá)發(fā)生紊亂存在一定相關(guān)性，其中IL-17、Th17細(xì)胞因子的過量表達(dá)可促使調(diào)節(jié)性T細(xì)胞出現(xiàn)功能缺陷，或是顯示Treg細(xì)胞的表達(dá)水平下降，加快過敏性鼻炎進(jìn)展，但臨床醫(yī)學(xué)針對(duì)Th17、Treg細(xì)胞失衡于支氣管哮喘、過敏性鼻炎發(fā)生、發(fā)展中的意義缺乏研究報(bào)道[2-3]。基于此，該研究選取2016年8月—2017年12月青島大學(xué)附屬醫(yī)院收治的120例支氣管哮喘、過敏性鼻炎患兒作為觀察對(duì)象，探討周圍Th17細(xì)胞和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在兒童過敏性鼻炎與支氣管哮喘中的失衡及臨床意義進(jìn)行分析，為臨床防治提供參考，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇青島大學(xué)附屬醫(yī)院收治的120例支氣管哮喘、過敏性鼻炎患兒作為觀察對(duì)象，該研究病例均經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審核通過。其中支氣管哮喘組（BA組）40 例，男 23 例、女 17 例，年齡 5～10 歲，平均（8.0±0.5）歲；單純性過敏性鼻炎組（AR組）40例，男22例、女 18 例，年齡 4～12 歲，平均（7.9±0.4）歲；支氣管哮喘合并過敏性鼻炎組（BA+AR組）40例，男24例、女16例，年齡 5～11 歲，平均（7.8±0.6）歲。入選標(biāo)準(zhǔn)：所有入選患兒均經(jīng)臨床檢查確診為支氣管哮喘、過敏性鼻炎；無嚴(yán)重的心、腎、肝等臟器功能疾病；研究前7 d未接受支氣管藥物治療。3組患兒的基本臨床資料對(duì)比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），存在可比性。所有兒童及其家長對(duì)該研究均知情，并簽署相關(guān)同意書。

1.2 方法

所有兒童均于入院當(dāng)日早晨空腹?fàn)顟B(tài)下抽取4 mL肘靜脈血，應(yīng)用負(fù)壓真空EP管（經(jīng)肝素鈉抗凝）進(jìn)行血液標(biāo)本采集，標(biāo)本于4 h內(nèi)處理完，取全血放在流式細(xì)胞儀上實(shí)施分析；將剩余的全血經(jīng)300 G/min離心操作10 min，后對(duì)上層血漿進(jìn)行留取，開展血漿細(xì)胞因子測(cè)定；并對(duì)沉淀部位開展PBMC分離，后將獲取的所有標(biāo)本放在-80℃冰箱內(nèi)保存，待測(cè)。①外周血內(nèi)CD4+/Th17+細(xì)胞及CD4+/TFoxp3+細(xì)胞的表達(dá)水平用流式細(xì)胞技術(shù)測(cè)定，后用EXPRO32 ADC軟件分析檢測(cè)結(jié)果。②肺功能檢測(cè)：選擇肺功能檢測(cè)儀對(duì)第1秒用力呼吸容積比值（FEV1%）進(jìn)行檢測(cè)，正常值是≥83.0%。③血漿炎癥因子：選擇酶聯(lián)免疫吸附法對(duì)血漿 IL-6、免疫球蛋白 E（IgE）、IL-17、IL-10、轉(zhuǎn)化生長因子 β1（TGF-β1）、IL-23 表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)，并對(duì)450 nm處OD值進(jìn)行檢測(cè)，設(shè)置空白對(duì)照組。所有操作均嚴(yán)格參照說明書執(zhí)行。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察并對(duì)比兒童的外周血Th17細(xì)胞 （用CD4+/Th17+細(xì)胞代表）、Treg細(xì)胞（用CD4+/TFoxp3+細(xì)胞代表）、FEV1%、IgE、TGF-β1、IL-23 表達(dá)水平； 探討B(tài)A+AR 組患兒的 FEV1%、IgE 和 Th17、Treg、TGF-β1相關(guān)性；將r≥0.3視作存在相關(guān)性，且r值越大代表相關(guān)性越顯著。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料以百分?jǐn)?shù)和例數(shù)表示，采用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料采用（±s）表示，采用 t檢驗(yàn)；P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 外周血Th17細(xì)胞及Treg細(xì)胞表達(dá)水平

BA+AR組高于BA組、AR組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；BA+AR 組低于 BA 組、AR 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 3組兒童的外周血Th17細(xì)胞及Treg細(xì)胞表達(dá)水平對(duì)比[（±s），%]

表1 3組兒童的外周血Th17細(xì)胞及Treg細(xì)胞表達(dá)水平對(duì)比[（±s），%]

注：與 BA+AR 組對(duì)比，bP＜0.05。

組別 Th17細(xì)胞 Treg細(xì)胞BA 組（n=40）AR 組（n=40）BA+AR 組（n=40）（7.9±1.3）b（7.7±1.2）b 15.6±2.0（2.1±1.2）b（2.1±1.4）b 1.0±0.2

2.2 FEV1%與血 IgE、TGF-β1表達(dá)水平

BA+AR組低于 BA組、AR組，BA組低于 AR組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；BA+AR 組高于 BA組、AR組，BA組高于AR組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。 見表2。

表2 3組兒童的FEV1%與血IgE、TGF-β1表達(dá)水平對(duì)比（±s）

表2 3組兒童的FEV1%與血IgE、TGF-β1表達(dá)水平對(duì)比（±s）

注：與 BA+AR 組對(duì)比，bP＜0.05；與 AR 組對(duì)比，cP＜0.05。

組別 FEV1%（%） IgE（IU/mL） TGF-β1（pg/mL）BA 組（n=40）AR 組（n=40）BA+AR 組（n=40）（88.5±1.4）bc（91.3±1.7）b 80.9±5.7（201.4±55.3）bc（137.4±53.9）b 271.4±43.3（368.4±57.2）bc（401.7±55.9）b 221.3±28.5

2.3 相關(guān)性分析

BA+AR組患兒的血漿IgE水平和Th17、IL-17的表達(dá)水平顯示為正性相關(guān)，和Treg、TGF-β1的表達(dá)水平顯示為負(fù)性相關(guān)；而FEV1%水平和Th17、IL-17的表達(dá)水平顯示為負(fù)性相關(guān)，和Treg、TGF-β1的表達(dá)水平顯示為正性相關(guān)。見表3。

表3 BA+AR 組患兒的血漿 IgE、FEV1%和Th17、Treg、IL-17、TGF-β1相關(guān)性分析

3 討論

研究發(fā)現(xiàn)，BA、AR的相關(guān)發(fā)病機(jī)制主要為IgE介導(dǎo)引起的Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)，有關(guān)病理變化表現(xiàn)為變應(yīng)原刺激機(jī)體后釋放的各種免疫活性細(xì)胞不斷參與疾病發(fā)生、發(fā)展過程，并在出現(xiàn)Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)條件下，血液內(nèi)IgE因子能發(fā)揮結(jié)合嗜酸性粒細(xì)胞及肥大細(xì)胞的免疫功能，且直接由免疫根源對(duì)過敏生物鏈進(jìn)行抑制，進(jìn)而對(duì)免疫T細(xì)胞造成直擊，讓免疫T細(xì)胞的相關(guān)調(diào)控功能不斷增強(qiáng)，故通過檢測(cè)外周血顯示IgE過高表達(dá)，說明機(jī)體可能伴有過敏性疾病[4-5]。

研究顯示，于BA、AR患兒發(fā)病情況下，患兒的肺功能存在顯著受損，通過肺功能檢測(cè)儀實(shí)施檢測(cè)能顯示FEV1%水平降低；相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)對(duì)TGF-β1水平進(jìn)行動(dòng)態(tài)檢測(cè)能幫助臨床醫(yī)學(xué)早期診斷、治療支氣管哮喘，因TGF-β1對(duì)間質(zhì)細(xì)胞增殖及轉(zhuǎn)化、分化具有促進(jìn)作用，使血管生成加快，引起細(xì)胞外相關(guān)基質(zhì)合成，并于肺纖維化的不斷變性過程中激活TGF-β1，為病程進(jìn)展的重要標(biāo)志點(diǎn)[6-7]。隨著臨床醫(yī)學(xué)的深入研究：Th1/Th2細(xì)胞的水平失衡難以對(duì)哮喘具體病因進(jìn)行完整解釋，而Th17、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞作為Th1、Th2細(xì)胞的2個(gè)亞群，其中Th17細(xì)胞和其相關(guān)效應(yīng)性細(xì)胞因子IL-17，于慢性炎癥及自身免疫性疾病的發(fā)展中過程中發(fā)揮促炎作用，同時(shí)Th17細(xì)胞釋放的炎性細(xì)胞因子，如 IL-6、IL-10、IL-17及 IL-23等，于集體動(dòng)員及募集、活化中性粒細(xì)胞等有關(guān)方面發(fā)揮重要作用；而調(diào)節(jié)性T細(xì)胞能發(fā)揮重要的維持機(jī)體免疫穩(wěn)態(tài)、抑制炎癥作用，和哮喘呼吸道炎癥存在密切相關(guān)性[8-9]。目前，越來越多研究顯示支氣管哮喘發(fā)病發(fā)與Th17/Treg細(xì)胞的失衡存在相關(guān)性，其能對(duì)存在哮喘性疾病患兒的氣道炎癥反應(yīng)造成影響，但針對(duì)BA合并AR患兒發(fā)病中有無Th17/Treg細(xì)胞失衡存在缺乏報(bào)道。該研究結(jié)果顯示，BA+AR組周圍血Th17細(xì)胞水平（15.6±2.0）%，高于 BA 組（7.9±1.）%、AR 組（7.7±1.2）%，Treg細(xì)胞水平為（1.0±0.2）%，低于 BA 組（2.1±1.2）%、AR 組（2.1±1.4）%；提示 BA 合并 AR 患兒伴有Th17/Treg細(xì)胞失衡，Th17、Treg細(xì)胞參與疾病的發(fā)展，能作為治療的新靶點(diǎn)。這與相關(guān)學(xué)者[10]研究結(jié)果中AR+BA組Th17水平 （15.56±1.98）%， 高于BA組（7.89±1.44）%、AR 組（7.68±1.40）%具有相似性。 該研究發(fā)現(xiàn)，BA+AR組的 TGF-β1、FEV1%水平低于BA組、AR組；故BA+AR組患兒的外周血 IgE、FEV1%、TGF-β1表達(dá)水平和BA組、AR組存在明顯差異；分析可能和Th17/Treg細(xì)胞失衡存在相關(guān)性。同時(shí)，BA+AR組患兒的血漿IgE水平和Th17的水平顯示為正性相關(guān)，和Treg、TGF-β1的水平顯示為負(fù)性相關(guān)；而FEV1%水平和Th17水平顯示為負(fù)性相關(guān)，和Treg、TGF-β1的水平顯示為正性相關(guān)；說明BA合并AR患兒伴有Th17/Treg細(xì)胞失衡，表達(dá)水平和FEV1%、IgE存在相關(guān)性，能為臨床診治提供參考。

綜上所述，兒童過敏性鼻炎與支氣管哮喘的周圍Th17細(xì)胞和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞存在失衡情況，其表達(dá)水平和IgE、FEV1%具有一定相關(guān)性，及時(shí)檢測(cè)IgE、FEV1%及Th17/Treg細(xì)胞水平，能為臨床診治提供信息。