烯丙孕素口服液在豬體內的殘留消除研究

王 雙，楊海峰，余 波，李士洋，鄭育基，卜仕金*

(1.揚州大學獸醫學院，揚州225009；2. 江蘇農牧科技職業學院，泰州225300；3.江蘇省動物重要疫病與人畜共患病防控協同創新中心，揚州225009)

烯丙孕素是一種應用廣泛的甾類孕激素，有明顯的孕激素和抗促性腺激素作用，可抑制排卵。在國外獸醫臨床實踐中，烯丙孕素主要用于母豬[1]、母馬[2]的同期發情；而在國內獸醫臨床實踐中，烯丙孕素主要用于促進母豬同期發情，還可用于促進乏情母豬的發情、延遲后備母豬的發情、延遲母豬的分娩時間[3]。但有關動物試驗表明，烯丙孕素可導致死胎率增加、產仔數下降、卵巢畸形[4]。若人類長期食用含有此激素的食品，不僅會干擾人體正常的激素平衡，還會有明顯的致癌效應，可導致女性及其后代生殖器官畸形和癌變，對于兒童則更明顯。歐美等國家已對該藥的使用和最高殘留限量(MRL)作了嚴格規定(皮下脂肪為4 μg·kg-1，肝為2 μg·kg-1)，國內尚未見有關規定。食品安全問題越來越受我國人民的重視，鑒于人們經常食用豬肉、豬腎、豬肝，本研究開展了烯丙孕素在豬肌肉、腎、肝、脂肪中的殘留檢測。

目前，國內外關于烯丙孕素的殘留檢測方法主要是液相色譜串聯質譜法，文獻報道了在河豚魚、鰻魚[5]、豬肉[6]中烯丙孕素的檢測，但是這些研究都是通過結合固相萃取小柱來完成的，前處理復雜，用時較長，不適合快速檢測，且運行成本較高。本研究對寧波第二激素廠自主研制的烯丙孕素口服液開展烯丙孕素在豬肌肉、腎、肝、脂肪中的殘留檢測，采用乙腈提取，飽和正己烷脫脂，10%碳酸鈉溶液凈化，高效液相色譜串聯質譜法測定了豬可食性組織(肉、脂肪、肝、腎)中的烯丙孕素殘留，探索其在豬體內的殘留規律，以期能填補國內對該激素的殘留消除規律的研究空缺，并為新獸藥在我國臨床上的合理應用和休藥期制訂提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 主要儀器

ACQUITY TM超高效液相色譜儀：美國Waters公司產品；Q-trap 5500 三重四級桿串聯質譜儀：美國AB公司產品；Eppendorf 5810R Centrifuge 高速冷凍離心機：德國Eppendorf公司產品；BS124S分析天平：德國賽多利斯天平公司產品；Pacific RO純水儀：北京五洲東方科技發展有限公司產品；SI可調速漩渦混合器 VORTEX-GENIE2：上海思伯明儀器設備有限公司產品；氮吹儀：美國Organomation公司。

1.2 標準品、主要試劑與配制

烯丙孕素(altrenogest)標準品(純度為99.2%)：寧波第二激素廠產品。乙腈、甲酸銨：色譜純，美國Tedia公司產品；碳酸鈉、乙酸鈉、正已烷、乙酸乙酯：分析純，國藥集團化學試劑有限公司；β-葡萄糖醛酸酶/芳基硫酸酯酶：德國默克公司；乙酸：HPLC級，美國Tedia公司產品。

烯丙孕素口服液：含量規格為1 mL:4 mg，包裝規格為450 mL·瓶-1，批號：160415；寧波第二激素廠產品。

烯丙孕素標準工作液的配制：準確稱取10 mg烯丙孕素標準品于10 mL棕色容量瓶中，用乙腈溶解并定容至刻度，即配成烯丙孕素標準儲備液(1 000 μg·mL-1)。準確吸取1 mL儲備液，用流動相(5 mmol·L-1甲酸銨溶液∶乙腈=6∶4)定容到1 L，即得1 μg·mL-1烯丙孕素標準工作液。

5 mmol·L-1甲酸銨溶液的配制：準確稱取0.315 g甲酸銨至1 000 mL容量瓶中，用超純水溶解并定容，即配成5 mmol·L-1甲酸銨溶液。0.45 μm無機濾膜負壓過濾,超聲波振蕩20 min?，F用現配。

0.2 mol·L-1乙酸鈉緩沖溶液：稱取16.4 g乙酸鈉溶解于800 mL水中，用乙酸調節pH至5.2，用水定容至1 L。

乙腈飽和正已烷：取500 mL正已烷，加入適量乙腈，充分振搖后，待兩相分層，上層即為乙腈飽和正已烷溶液。

1.3 試驗動物

選取22頭達到性成熟的商品后備母豬(平均體重為50 kg)，隨機分為兩組，分別為烯丙孕素推薦劑量組(簡稱試驗組，20頭)、空白對照組(簡稱對照組，2頭)。試驗豬均圈養，給藥前分別稱重、編號。試驗前試驗豬在新環境經過至少1周的適應期。給藥前禁食過夜12 h，2 h后恢復正常飲食。飼料為不含任何藥物的全價飼料。

1.4 給藥劑量、途徑及樣品采集

試驗組豬按0.4 mg·kg-1內服給藥(相當于每頭豬20 mg烯丙孕素)，每天定時給藥一次，連用18 d。給藥時烯丙孕素口服液按推薦劑量灑在受試動物的飼料表層，讓動物經口自由攝入。于停藥后6 h、1 d、5 d、10 d和18 d共5個時間點分別屠宰各試驗組豬4頭，分別取肌肉(背最長肌)、全肝、全腎、脂肪(皮下脂肪)。樣本采集后立即做好標記、包裝，于-20 ℃冰箱中保存待測。

1.5 色譜-質譜條件

1.5.1 色譜條件 色譜柱：Thermo C18(3×100 mm，1.7 μm)；流動相：A為5 mmol·L-1甲酸銨溶液，B為乙腈，梯度洗脫條件見表1；流速：0.4 mL·min-1；柱溫：30 ℃；進樣量：10 μL。

表1梯度洗脫條件

Table1Gradientelutionconditions

時間/mint流速/(mL·min-1)Flow rate流動相比例/%Mobile phase proportionA(甲酸銨)B(乙腈)00.4604010.4604040.4109080.410908.10.46040100.46040

1.5.2 質譜條件 離子源：電噴霧離子源；掃描方式：正離子掃描；檢測方式：多反應監測(MRM)；電噴霧電壓：5.5 kV；去簇電壓：126.8 U·V-1；離子化溫度：550 ℃；氣簾氣：20.0 Psi；碰撞氣：8 Psi。定性離子對、定量離子對、保留時間、錐孔電壓和碰撞能量參考值見表2。

表2烯丙孕素質譜檢測參數

Table2Altrenogestandtestosteronemassspectrometry

化合物Chemical compound定性離子對(m/z)Qualitative ion pair定量離子對(m/z)Quantitative ion pair錐孔電壓/VCone voltage碰撞能量/eVCollision energy烯丙孕素311.1>269.2311.1>227.1*2822,18

*.定量離子對

*. Represents the quantitative ion pair

1.6 樣品前處理

1.6.1 提取肝、腎樣品 ①稱取試樣2 g(精確至0.01 g)，置于50 mL離心管中，加入5 mL乙酸鈉溶液，再加入20 μL β-葡萄糖醛酸酶/芳基硫酸酯酶，然后蓋蓋渦旋混合1 min，在37 ℃±1 ℃振蕩酶解12 h ，取出冷卻至室溫，加入2 g氯化鈉，振搖30 s后加入8 mL 乙腈，渦旋提取1 min，5 000 r·min-1離心5 min，取乙腈層。②試樣中再加入8 mL乙腈，重復上述提取過程。合并2次提取液，加入8 mL乙腈飽和正已烷，渦旋提取1 min，5 000 r·min-1下離心2 min，棄去正已烷后取乙腈層 40 ℃下氮吹至近干。

1.6.2 肌肉、脂肪樣品 稱取試樣2 g(精確至0.01 g)，置于50 mL離心管中，加入8 mL乙腈，振蕩提取30 min，5 000 r·min-1離心5 min，取乙腈層。此后同“1.6.1”步驟②操作。

1.6.3 凈化 將以上所得殘渣用10 mL乙酸乙酯復溶，渦旋30 s，然后加入10%碳酸鈉溶液2 mL，渦旋混合30 s后5 000 r·min-1離心5 min，取上清液40 ℃水浴中氮氣吹至近干后用樣品定容溶液(5 mmol·L-1甲酸銨水溶液∶乙腈=6∶4)1.0 mL 溶解，旋渦混勻后過0.22 μm濾膜。濾液供液相色譜串聯質譜測定。

1.7 基質匹配標準曲線的制備

精密量取適量烯丙孕素標準溶液，先用流動相配制質量濃度為1、5、10、50、100、200 ng·mL-1系列標準溶液，然后加1 mL標準溶液到經提取凈化吹干后的不同空白基質殘渣中，旋渦混勻后過0.22 μm 濾膜，供液相色譜串聯質譜測定，以定量離子對峰面積為縱坐標，標準溶液濃度為橫坐標，繪制基質校準標準曲線。

1.8 檢測限、定量限的測定

取空白的豬肝、皮下脂肪、肌肉、腎樣品，按照“1.6”所述方法處理，均設20個平行樣品，測得基線噪音值，取信噪比S/N≥3確定為檢測限，S/N≥10確定為定量限，并計算LOQ質量濃度點的回收率及相對標準偏差(RSD)，驗證其可靠性。

1.9 回收率、精密度的測定

準確稱取空白試驗樣品(豬肝、皮下脂肪、肌肉、腎)2.00 g±0.05 g，準確加入適量標準工作液，使樣品中藥物的添加濃度為1、100和200 μg·kg-1。同時進行空白樣品處理。每個濃度分別設6個平行。添加樣品經“1.6”所述方法提取凈化后進行LC-MS/MS測定；空白樣品經同樣步驟處理后按照“1.6.3”方法制備與2、200和400 μg·L-1基質匹配標準溶液，然后進行LC-MS/MS測定，根據添加樣品中烯丙孕素定量離子對峰面積和相應基質標準溶液(1、100和200 μg·kg-1添加濃度分別選擇2、200和400 μg·L-1基質匹配標準溶液進行單點定量)中定量離子對峰面積的比值計算回收率。每種樣品在一周內完成3個批次重復測定。據此求出各批內與批間變異系數。

1.10 穩定性試驗

對濃度水平為1、100、200 μg·L-1的5個平行穩定性樣品執行分析，從而評估烯丙孕素標準工作液中烯丙孕素的穩定性。采用流動相稀釋的方法分別制備上述3個濃度的標準工作液后立刻對樣品執行分析，以得到第0天數據；在室溫(約22 ℃)下放置2、6、8 h后執行樣品分析。將標準工作液中檢出的烯丙孕素濃度與理論加標濃度做比較(烯丙孕素標準工作液現配現用)。

將5 ng·mL-1烯丙孕素溶液(甲醇溶解)放置在太陽光下，室溫25 ℃，分別于45 min、2 h、4 h、6 h 后測定烯丙孕素濃度，檢驗其光照穩定性。

1.11 豬組織中烯丙孕素殘留量的測定

檢測“1.4”采集的背最長肌肉、皮下脂肪、肝、腎組織樣品中烯丙孕素的濃度。

2 結 果

2.1 基質匹配標準曲線

以烯丙孕素定量離子對的色譜峰面積(A)對烯丙孕素的質量濃度(C，μg·kg-1)作圖，得到其基質標準曲線。烯丙孕素在1～200 ng·mL-1的濃度范圍內，該藥物的定量離子峰面積與濃度呈良好線性關系，線性回歸方程：y=5.34e4X+6.87e4，相關系數0.999。

2.2 檢測限和定量限

向空白組織中添加一系列低濃度的烯丙孕素溶液，以信燥比(S/N)為3計算檢測限(LOD)，以信燥比為10計算定量限(LOQ)。結果顯示：該藥物的檢測限為0.5 μg·kg-1，定量限為1.0 μg·kg-1。

2.3 回收率和精密度

烯丙孕素在豬肌肉、皮下脂肪、肝、腎中回收率和相對標準偏差測定結果見表3。

由表3可知，本方法的平均添加回收率在68.9%～78.9%，日內相對標準偏差和日間相對標準偏差分別為3.92%～10.49%和4.92%～9.95%，相對標準偏差均小于11%。由此可見，在低濃度樣品加標下，LC-MS/MS法測定豬組織中烯丙孕素殘留具有良好的回收率和精密度，該方法適用于復雜基質中痕量化合物的定量和定性分析。

2.4 烯丙孕素標準工作液穩定性

對于烯丙孕素標準工作液中的烯丙孕素而言，于室溫條件(約22 ℃)下儲存時可保持穩定達6 h。

2.5 光照穩定性

結果顯示，6 h時烯丙孕素降解了35%。烯丙孕素和它的初級光解產物在Thermo C18反相色譜柱上的出峰時間分別為4.54、4.99 min，見圖1、圖2。在不嚴格避光的條件下，烯丙孕素在豬組織中部分會光解為其同分異構體，色譜圖中會有兩個藥物峰出現，計算含量時要對兩個峰同時定量，面積和即為烯丙孕素的真實含量。

2.6 豬組織中烯丙孕素殘留量的測定

以0.4 mg·kg-1(按體重給藥)劑量內服給藥18 d后，對背最長肌肉、皮下脂肪、肝、腎樣品中烯丙孕素濃度進行測定，對照組均未檢出烯丙孕素殘留，給藥組背最長肌肉、皮下脂肪、肝、腎中烯丙孕素濃度隨時間變化見圖3，各個組織中殘留量測定結果見表4。

烯丙孕素溶液按推薦給藥方案給藥，停藥后6 h各組織均達到最高藥物濃度，其中肝殘留最高，平均殘留量為259.25 μg·kg-1，其次依次是腎、皮下脂肪、肌肉，平均殘留量分別為52.33、49.22、25.85 μg·kg-1； 停藥至第1天后，肝、腎、皮下脂肪和肌肉中烯丙孕素的平均殘留量分別降至33.93、11.27、41.95和9.56 μg·kg-1。至停藥第5天時，4頭豬中僅1頭豬的肝中烯丙孕素的殘留量高于MRLs(2 μg·kg-1)，達到2.81 μg·kg-1；另3頭豬中，來自1頭豬的肝中烯丙孕素的殘留量高于定量限(1.0 μg·kg-1)，其他組織中烯丙孕素的殘留量均低于定量限；至停藥第10天時，豬所有組織中烯丙孕素的殘留量都低于檢測限。

表3烯丙孕素加標回收率與相對標準偏差(n=6)

Table 3 The recoveries and RSD of altrenogest(n=6) %

圖1 對照溶液中烯丙孕素特征離子質量色譜圖(5 μg·kg-1)Fig.1 Standard sample of altrenogest(5 μg·kg-1)

2.7 烯丙孕素在豬體內的休藥期

依據EMA發布的烯丙孕素在豬的肝組織中的殘留限量，將停藥后烯丙孕素在豬的肝組織中實測的殘留量數據采用WT1.4休藥期軟件擬合，如按雙單側95%置信區間計算休藥期為7.59 d，如按雙單側99%置信區間計算則休藥期為8.67 d，如圖4、5所示。因此寧波第二激素廠提供的烯丙孕素溶液按推薦給藥方案使用，建議休藥期定為9 d。

圖2 光照2 h后對照溶液中烯丙孕素特征離子質量色譜圖(5 μg·kg-1)Fig.2 Standard sample of altrenogest after the sun shined for two hours(5 μg·kg-1)

圖3 豬組織中烯丙孕素殘留消除曲線Fig.3 Residues eliminate curve of altrenogest in swine tissues

3 討 論

3.1 烯丙孕素的光照穩定性

烯丙孕素結構中有1,2環戊烷并多氫菲基本母核，甾核由A、B、C和D環稠合而成，A、B、C為六元環，D為五元環，D環C-17有烯丙基側鏈，環中有雙鍵，這使得它在紫外-可見光照射下吸收一定波長的光，從而發生直接光解。Wammer等[7]報道，在太陽輻射能為250 w·m-2，室溫30 ℃，pH=6的條件下，10 μmol·L-1烯丙孕素溶液(10%甲醇水溶解)迅速降解為1.6 nmol·L-1，光解半衰期為27 s(kobs=2.58±0.04×10-2)；光解速率隨著烯丙孕素濃度的升高而升高，隨氧氣濃度的升高而降低，不隨pH和溫度的變化而變化。此外，光解速率還與烯丙孕素溶液的組成有關，有機物濃度越高光解速率越慢，在上述相同條件下，40和80 mg·L-1腐殖酸中烯丙孕素光解半衰期分別為6和10 min。為避免失去藥理學活性，烯丙孕素溶液應避光保存。

表4給藥后豬可食性組織中烯丙孕素殘留量

Table 4 Residues of altrenogest in swine tissuesμg·kg-1

(轉下頁 Carried forward)

超出標準曲線的濃度是十倍稀釋后測定的

The concentration beyond the standard curve was measured after ten times dilution

圖4 按雙單側95%置信區間擬合的休藥期擬合曲線Fig.4 Plot of withdrawal time calculation for swine liver at the time when the one-sided 95% upper tolerance limit was below the EU MRL

圖5 按雙單側99%置信區間擬合的休藥期擬合曲線Fig.5 Plot of withdrawal time calculation for swine liver at the time when the one-sided 99% upper tolerance limit was below the EU MRL

烯丙孕素的初級光解產物是烯丙孕素通過環內加成反應得到的，它是烯丙孕素的同分異構體[8]。烯丙孕素和它的初級光解產物性質差異很大，據國外文獻報道，在C18反相色譜柱上，烯丙孕素和它的同分異構體出峰時間分別為4.3、7 min。本試驗中發現，烯丙孕素和它的初級光解產物在Thermo C18反相色譜柱上的出峰時間分別為4.54、4.99 min，這與國外報道的結果一致。在不嚴格避光的條件下，烯丙孕素在豬組織中部分會光解為其同分異構體，色譜圖中會有兩個藥物峰出現，計算含量時要對兩個峰同時定量，面積和即為烯丙孕素的真實含量。

3.2 酶解條件的優化

有研究者用β-葡糖苷酸/芳基硫酸酯酶對動物肌肉、內臟等樣品進行酶解，使藥物與組織解離，以提高藥物萃取效率[9]。但有學者認為孕激素類藥物主要以游離態的形式存在，不需要酶解。EMEA[10]報道了給藥后30 d內樣品(豬和馬肝、腎)中烯丙孕素/總殘留物。在豬和馬的肝樣品中，總殘留物的80%不可逆地結合在組織大分子上因而失去藥理學活性；其余殘留物在肝中游離并且具有藥理學活性，烯丙孕素/總殘留物最大(為25%)；在第15天，烯丙孕素/總殘留物最小(0.5%)。在豬和馬的腎樣品中，總殘留物的20%與組織大分子結合，總殘留物的80%游離出來并且具有藥理學活性。在肌肉和皮下脂肪樣品中因總殘留量太低無法計算出烯丙孕素/總殘留物，因此將肌肉和皮下脂肪組織中所有的殘留物都認為是烯丙孕素。報道中顯示，烯丙孕素在肝、腎中代謝物主要是烯丙孕素的谷胱甘肽和葡萄糖苷酸結合物，故本試驗用β-葡萄糖醛酸/芳基硫酸酯酶酶解的方法處理肝、腎樣品，直接提取處理肌肉、脂肪樣品。

3.3 動物試驗方案

本研究中的給藥周期、給藥劑量、給藥途徑是根據歐洲原研廠家提供的給藥方案(英特威烯丙孕素產品概要[11])和二期臨床試驗結果制定的。給藥周期與母豬發情周期有關，我國母豬發情周期一般為18 d，為了實現同一批母豬同步發情，給藥周期必須與母豬發情周期保持一致；給藥劑量0.4 mg·kg-1為臨床推薦劑量，也與歐洲原研廠家提供的劑量相一致；EMEA與FDA批準的給藥途徑為口服，經口灌服操作繁瑣，容易引起動物的應激反應，不利于飼養員的操作，因此本研究采用將藥灑在飼料表面的方式給藥。實際給藥時一頭動物與其他動物的飼料槽是分開的，并且每次給藥后飼料基本上被吃光，這樣確保了烯丙孕素全部被利用。

3.4 提取條件的優化

烯丙孕素屬于脂溶性化合物，烯丙孕素為弱極性化合物，難溶于水，易溶于乙醇、乙腈、丙酮、叔丁基甲醚等有機溶劑。常用于提取烯丙孕素的溶劑有叔丁基甲醚、甲醇[12]、乙腈[13]和乙酸乙酯。本試驗比較了不同提取劑對回收率的影響，結果表明：用叔丁基甲醚提取時，烯丙孕素回收率高，為70%左右，但共提的脂肪較多，且藥物易與脂肪結合，影響提取效果；用乙酸乙酯提取時，烯丙孕素回收率63%，對烯丙孕素提取效果較差；甲醇乙腈提取效率較好，回收率都在80%左右，但是乙腈的除蛋白能力強于甲醇，而且用乙腈提取，共提雜質較少，因此本研究選用乙腈作為前處理的提取試劑?？疾炝颂崛┑捏w積(分別采用8、10、15 mL乙腈進行提取)和提取次數對提取效率的影響，試驗結果表明，提取劑量為8 mL 提取兩次和提取劑量為15 mL提取兩次，兩者回收率相同，為了減少溶劑用量最終確定用8 mL乙腈提取兩次。

3.5 凈化條件的優化

由于豬組織中含有大量的脂肪，因此有必要進行脫脂。試驗考察了8 mL乙腈飽和正己烷除脂與-20 ℃冷凍除脂這兩種方法的脫脂效果。結果表明：乙腈飽和正己烷能有效除去豬肌肉、皮下脂肪、肝、腎提取液中脂類和非極性雜質的干擾，但會造成烯丙孕素在前處理過程中的損失，導致回收率偏低；冷凍除脂藥物回收率較高，但除脂量較少。乙腈飽和正己烷除脂之后，回收率達70%，可選用乙腈飽和正己烷作為除脂溶劑。

為了達到理想的凈化效果，脫脂后的溶液須進一步凈化。試驗比較了HLB、C18這2種甾類孕激素常用的柱子對提取液的凈化效果。研究發現，Oasis HLB是最符合本試驗的SPE柱。將Oasis HLB 柱依次用3 mL甲醇、3 mL水活化平衡，將提取液氮吹復溶后過柱，用3 mL 20%乙腈水、3 mL水淋洗，真空抽10 s后，用3 mL乙腈洗脫，收集洗脫液于10 mL離心管中。由于固相萃取耗時，過程繁瑣，且費用較高。據報道，萃取前用pH 9～10碳酸鹽溶液堿化樣品液可除去堿性雜質，且凈化效果較好[14]。試驗又繼續考察了10%、15%、20%碳酸鈉溶液的凈化效果，結果顯示，10%碳酸鈉溶液凈化效果較好，回收率較高。通過比較固相萃取和碳酸鈉溶液凈化的目標藥物的峰面積發現差異不顯著，本研究采用10%碳酸鈉溶液凈化。

3.6 基質效應

利用ESI離子源對目標物進行分析時會產生較強的基質效應，試驗中采用提取后添加法評估基質效應。計算陰性基質匹配標準溶液與流動相標準溶液響應值的比值，當比值接近1時說明不存在基質效應的影響；當比值大于或小于1時，說明基質對待測組分的響應有增強或抑制效應。本試驗測定了質量濃度為1、2、5 ng·mL-1的基質匹配標準工作液和流動相標準溶液。結果顯示，肝、腎中兩個響應值之比為0.50～0.54，肌肉、皮下脂肪中兩個響應值之比為0.65～0.69，說明肝、腎中的基質抑制效應強于肌肉、皮下脂肪。為消除基質效應的干擾，本試驗采用空白基質匹配標液定量校正。

3.7 烯丙孕素在豬組織中的殘留消除規律及休藥期的確定

對肌肉、皮下脂肪、肝、腎中的烯丙孕素殘留量進行分析比較，結果顯示，在同一采樣時間點，豬組織中烯丙孕素的殘留量規律為肝>腎>皮下脂肪>肌肉，這與EMEA[15]報道的國外同類產品在豬可食性組織中的殘留量檢測結果一致。藥物在肝中代謝，而且藥物在豬體內主要經膽汁、糞便、尿液排泄，在腎中不會造成蓄積，因此，在同一采樣時間點，烯丙孕素殘留量，肝>腎；脂肪中烯丙孕素殘留量遠遠高于肌肉中的殘留量，這是脂肪為親脂性化合物的緣故。由豬組織中烯丙孕素殘留消除曲線可以看出，除肝外其他組織在5 d后藥物濃度低于MRL，肝在10 d后藥物濃度低于MRL，表明烯丙孕素在豬體內代謝較快，且在各組織無蓄積。肝中的藥物殘留量最高，消除時間最長，故肝是烯丙孕素在豬可食性組織中的殘留靶組織。

根據烯丙孕素在豬組織中的殘留檢測值，采用WT1.4軟件按99%置信區間計算烯丙孕素在豬肝中的休藥期，結果顯示，休藥期為9 d，這一結果與歐洲原研廠家生產的烯丙孕素在豬體內休藥期相同[11]，而美國等國家報道同類產品在豬體內休藥期為21 d[16]， 這可能與不同產品的生產工藝、豬的種類不同有關。參照歐盟和美國規定的烯丙孕素在豬組織中的最高殘留限量標準，當母豬按0.4 mg·kg-1(按體重給藥)內服給藥18 d后其休藥期為9 d。

4 結 論

采用乙腈提取，乙腈飽和正己烷溶液除脂，10%碳酸鈉溶液凈化，建立高效液相色譜串聯質譜法測定豬可食性組織(肉、脂肪、肝、腎)中的烯丙孕素殘留情況，該方法的檢測限為0.5 μg·kg-1，定量限為1.0 μg·kg-1，相對標準偏差均小于11%。豬按0.4 mg·kg-1劑量經口給藥，每天1次，連續給藥18 d。各組織烯丙孕素殘留量在休藥6 h后最高，休藥后第5天脂肪中的殘留量低于最大殘留限量，肌肉、腎中殘留量低于定量限，休藥第10天所有組織中烯丙孕素殘留量均低于定量限。組織殘留量由高到低依次為肝>腎>脂肪>肌肉，肝中烯丙孕素消除緩慢且消除時間最長。建議此種給藥方式休藥期為9 d。