竹葉黃酮殼聚糖緩釋微球的制備及其性能研究

姚淪淪，潘燕帥，朱沖洲，華 娜，錢依楠，劉春冬

(湖州師范學院 求真學院，浙江 湖州 313000)

殼聚糖是具有安全無毒、良好的生物相容性、生物可降解性等優點[1-2]。基于殼聚糖構建的載藥系統表現出增加藥物穩定性、具有緩控釋或靶向效應以及提高藥物生物利用度的特殊功能，成為藥劑學研究的熱點[3-4]。竹葉黃酮是從竹葉中提取出來的具有生理活性的生物黃酮，包括黃酮類、內酯類和酚酸類化合物，是一種高效的生物抗氧化劑[5]。目前，對竹葉黃酮的研究較多的是竹葉黃酮提取、分離和純化工藝的優化，以及其毒理、藥理活性的評價，而關于竹葉黃酮的新劑型開發，尤其是制備成緩釋微球的報道較少[6-7]。本文以殼聚糖為載體材料，制備竹葉黃酮-殼聚糖緩釋微球，載藥微球具有釋藥均勻、藥物作用時間長等優點，為探索竹葉黃酮的藥物劑型開發提供了理論基礎。

1 儀器與試劑

紫外-可見分光光度計SP-752，上海光譜；超聲清洗器KQ-100B，昆山市超聲儀器有限公司；真空干燥箱D2G-6050，上海森信實驗儀器有限公司；臺式離心機LD4-2A，北京京立離心機有限公司；光學顯微鏡，上海炳宇光學廠；激光粒度儀，英國馬爾文公司；溶出度儀，上海凱來實驗設備有限公司。

竹葉黃酮購于武漢銀河化工有限公司，純度95%；戊二醛、殼聚糖、液體石蠟、Span-80、石油醚購于阿拉丁試劑公司，均為化學純試劑。

2 實驗部分

2.1 殼聚糖載藥微球的制備

采用乳化交聯法制備竹葉黃酮-殼聚糖載藥微球，具體操作如下：取適量殼聚糖，加入2%的醋酸，得到濃度為25g/L的殼聚糖溶液，加入設定量竹葉黃酮，控制載藥比(殼聚糖投入質量/竹葉黃酮投入質量)分別為21、4∶1和6∶1，制成均勻的水相溶液備用；取適量液體石蠟，將設定量表面活性劑(Span-80)加入到液體石蠟中，攪拌均勻制成油相備用。水相與油相分別放在50℃下靜置10min，然后攪拌條件下，將水相逐滴加入油相中，滴完后，繼續攪拌30min，整個過程溫度保持在50℃。在輕微攪拌條件下，將適量戊二醛加入上述溶液中，交聯3h。原料投料質量比設定為殼聚糖∶液體石蠟∶Span-80∶戊二醛=1∶20∶5∶4。交聯完畢后，靜置30min，待溶液完全分層后，倒出上層乳白色液體，下層物質用適量石油醚和無水乙醇分別洗滌3次，抽濾，真空干燥箱中干燥，得竹葉黃酮-殼聚糖載藥微球。

2.2 微球的形態與粒徑

取載藥比為4∶1微球少量，輕輕研磨分散，采用光學顯微鏡以1000倍觀察其形態；另取適量微球分散在蒸餾水中，采用激光粒度儀測定納米粒的粒徑。

2.3 標準曲線的制定

稱取蘆丁標準品20mg，用30%乙醇溶液溶解，并配制成系列梯度濃度溶液。取上述溶液10mL，分別加入0.7 mL 5%NaNO2、0.7mL 10%Al(NO3)3、5mL 1mol/L NaOH顯色。采用紫外-可見分光光度計測定上述顯色后溶液的吸光度，檢測波長510nm。

2.4 收率、包埋率與載藥量的測定

取25mg載藥微球，溶解在2%的醋酸溶液中，在70℃條件下超聲回流5h，使微球中的竹葉黃酮完全溶出。溶出液按照2.3的方法顯色后，采用紫外-可見分光光度計在510nm處測定吸光度，并計算出微球的包埋率、載藥量和收率。

2.5 殼聚糖載藥微球的體外釋放

取50mg載藥微球，置于溶出杯中，釋放介質為蒸餾水，溫度為37℃、轉速100r/min，在設定時間點取出5mL釋放介質 (同時補充等體積蒸餾水)，按照2.3的方法顯色后，測定其吸光度，并繪制釋藥曲線。

3 結果與討論

3.1 微球的形態與粒徑的分析

制得載藥微球形態呈規則球形，表面光滑，粒徑分布在10～50μm之間(表1)。

3.2 標準曲線的繪制

以吸光度(Y)對藥物濃度(x)作圖，得到回歸方程：Y=0.0107x-0.0124，R2=0.9997，式中Y為吸光度值；x為竹葉黃酮的質量濃度(μg/mL)。

3.3 載藥比對收率、包埋率與載藥量的影響

根據標準曲線方程，計算得到載藥微球中竹葉黃酮含量，微球中竹葉黃酮的收率，包埋率與載藥量計算公式如下：包埋率= M1/M2×100%，載藥量= M1/M3×100%，收率=M3/M4×100%，式中，M1為微球中藥物含量，M2為藥物的投入放量，M3為制備的微球質量，M4為投入的殼聚糖和竹葉黃酮總質量，結果如表2所示。

表2 不同藥載比微球的收率，包埋率和載藥量比較

由表2可以看出，隨著載藥比的增大，藥物收率、包埋率都相應的增大，而載藥量減小。當載藥比由4∶1增大到6∶1時，微球載藥量顯著下降，而收率和包埋率略微增加。因此，載藥比為4∶1是乳化交聯法制備竹葉黃酮-殼聚糖微球的最佳比例。

3.4 載藥比微球的體外釋放影響

不同載藥比竹葉黃酮-殼聚糖微球釋藥曲線見圖2，結果表明：未加載的竹葉黃酮釋放迅速(對照組)，而采用乳化交聯法制備的微球在水中有一定的緩釋性能；而且，隨著載藥比增大，微球中藥物緩釋更加均勻、緩慢，具有更好的緩釋性能。

圖2 不同載藥比微球的釋藥曲線

4 結論

本文采用乳化交聯法制備竹葉黃酮-殼聚糖載藥微球，微球呈規則球形，粒徑在10～50μm。最優載藥比為4∶1，該條件下制得的微球，其收率84.9%，包埋率72.6%，載藥量6.9%。采用殼聚糖微球加載竹葉黃酮，藥物釋放均勻、緩慢，持續釋藥時間長，具有良好的緩釋性能。