MALDI-TOF MS在臨床微生物檢驗中的應用

劉鴻麗

（泰興市人民醫(yī)院，江蘇 泰興 225400）

0 引言

微生物檢驗是臨床用于診斷感染類疾病的主要手段，對疾病治療有效率的提高，具有重要價值。臨床微生物檢驗方法，包括API法、RapID法，以及MALDI-TOF MS等多種。有研究指出，MALDI-TOF MS用于進行臨床微生物檢驗，速度快，且準確度高。本文選取感染類疾病住院患者的體液標本100例作為樣本，闡述了MALDI-TOF MS的應用方法，并觀察了應用效果。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院感染類疾病住院患者的體液標本100例作為樣本，采用MALDI-TOF MS進行微生物檢驗。標本來源：男54例、女46例。標本類型：痰液36例（呼吸系統(tǒng)感染）、血液38例（膿毒血癥）、尿液26例（泌尿系統(tǒng)感染）。

1.2 方法

①準備MALDI-TOF質譜儀及Vitek細菌鑒定儀。需應用的試劑，包括Taq酶及PCR反應試劑等。②取樣本中的3-5 g細菌單個菌落+300 μL超純水+900 μL無水乙醇，離心2 min。③棄上清液，加70%甲酸50 μL、乙腈50 μL，繼續(xù)離心2 min。④取1 μL上清液，干燥后，加1 μL基質液，覆蓋加樣區(qū)域。⑤設置質譜儀參數(shù)：PIE為300 ns-500 ns，IS1為20 kV，頻率為20-200 Hz，⑥觀察并記錄檢驗結果。

1.3 觀察指標

觀察100例樣本的檢驗結果。

1.4 統(tǒng)計學分析

采用SPSS 24.0軟件處理數(shù)據(jù)，計數(shù)采用χ2檢驗，以（%）表示。計量采用t檢驗，以（均數(shù)±標準差）表示。P＜0.05視為數(shù)據(jù)差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

100例患者中，呼吸系統(tǒng)感染檢出率100%、膿毒血癥檢出率100%、泌尿系統(tǒng)感染檢出率為96.15%，詳見表1。

表1 100例樣本的檢驗結果

3 討論

基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜（Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectrometry，MALDI-TOF MS），本質為軟電離生物質譜，屬于臨床新型的微生物檢驗技術[1-5]。近些年來，由真菌所導致的感染類疾病的發(fā)病率明顯提升。如患者免疫力低下，病死率將明顯增高。真菌感染的常規(guī)檢驗方法，以生化法為主[6]。雖可在一定程度上檢出病原菌，但效率較低。將MALDI-TOF MS法應用到真菌檢驗過程中，對不同的菌株進行鑒定，能夠有效明確真菌種類，進而達到提高疾病診斷準確率的目的。單獨采用MALDITOF MS法，對真菌進行檢驗，效率及準確率均值得肯定[7]。但如將其與Vitek MS System，以及DNA測序方法，與MALDI-TOF MS法聯(lián)合對真菌進行檢驗，效果將進一步改善。臨床選取1243株菌株作為樣本，采用MALDI-TOF MS法+Vitek MS System+DNA測序法，對真菌進行了檢驗[8]。檢驗結果顯示，96.7%的真菌，均可鑒定到種。真菌鑒定結果準確率，可達到99%。僅2.4%的菌株，無法被鑒別。通過重復性檢驗可以發(fā)現(xiàn)，采用MALDI-TOF MS對真菌感染進行檢驗，重復性為97.3%。上述研究結果表明，MALDI-TOF MS在臨床真菌檢驗中，應用價值較高[9]。因此，如患者存在真菌感染的可能，建議臨床采用ALDI-TOF MS法，對真菌進行鑒定。進而明確是否存在真菌感染，提高疾病檢出率。確診為感染后，需立即給予治療。并視患者的病情，考慮繼續(xù)采用MALDI-TOF MS法，對治療效果進行觀察[10]。一旦發(fā)生感染真菌類型有所變化，需對治療方案進行調整，提高治療的針對性。

膿毒血癥，為血液感染的常見疾病。進行血培養(yǎng)以及鑒定，為疾病病原菌檢驗的金標準。但該檢驗方法所需時間較長，檢驗結果獲取的及時性差。將MALDI-TOF MS應用到血液標本的檢驗中，可直接對標本中的細菌，進行培養(yǎng)與鑒定。鑒定結果準確度，可達到66%及以上。需注意的是，草綠色鏈球菌，與肺炎鏈球菌，均屬于不易識別的菌種。因此檢驗時，可能存在假陰性問題。為提高檢驗結果的準確度，建議將細菌濃度，控制在107/mL以上。尿培養(yǎng)，為臨床用于診斷泌尿系統(tǒng)疾病的金標準。但具有效率低、成本高的缺陷。采用MALDI-TOF MS直接檢驗尿液標本，可于2次離心后，將白細胞去除，并收集到病原菌。檢驗結果的準確度，以及檢驗效率，均能夠得到保證。上述研究成果，進一步證實了MALDI-TOF MS在臨床微生物檢驗中的應用價值。臨床可視感染類型，選擇不同標本，采用該技術進行檢驗，提高疾病檢出率。

綜上所述，將MALDI-TOF MS應用到臨床微生物檢驗中，有助于提高疾病檢出率，明確病原菌，提高治療有效率。