首薈通便膠囊對(duì)慢傳輸型便秘模型大鼠腸道推進(jìn)率和結(jié)腸黏液分泌的影響

李冰冰 譚玉軍 姚景春 程國(guó)良 黃志艷 張貴民

(國(guó)家手性制藥工程技術(shù)研究中心，臨沂，276000)

便秘是臨床常見疾病，發(fā)病率高，各年齡段人群均會(huì)發(fā)生，其中女性多于男性，老年多于青壯年[1]。很多中老年人隨著腸道微循環(huán)障礙的逐步增加，胃腸道機(jī)能下降，便秘發(fā)生的可能性逐年增加。便秘能夠影響身體機(jī)能和胃腸功能，同時(shí)便秘又是一些心腦血管疾病危險(xiǎn)患者心肌梗死和腦卒中的重要誘發(fā)因素。因此注重便秘的及時(shí)治療，盡早解除便秘成為很多疾病預(yù)防和病情轉(zhuǎn)歸的關(guān)鍵環(huán)節(jié)[2]。

慢性便秘是一種常見疾病，我國(guó)流行病學(xué)調(diào)查表明，成人慢性便秘患病率為4%～6%，并隨年齡增長(zhǎng)而升高，60歲以上人群慢性便秘的患病率可高達(dá)22%[3]。骨科臥床患者的便秘發(fā)生率一般為50%～70%，精神類藥物使用時(shí)便秘發(fā)生率為30%～40%，而肛腸疾病患者圍手術(shù)期出現(xiàn)不同程度的便秘發(fā)生率達(dá)90%以上,明顯影響患者生命質(zhì)量和病情預(yù)后[4]。慢傳輸型便秘(Slow Transit Constipation，STC)涉及全胃腸道動(dòng)力和黏液分泌紊亂，致大便排出困難。其臨床癥狀主要為排便次數(shù)減少、糞便量減少、糞便干結(jié)、排便費(fèi)力等，中醫(yī)學(xué)認(rèn)為[5]，屬于“脾約”“便秘”“氣秘”“腹痛”等范疇。首薈通便膠囊依據(jù)便秘的中醫(yī)辨證論治，養(yǎng)陰益氣，補(bǔ)瀉兼施。為了驗(yàn)證首薈通便膠囊對(duì)慢傳輸型便秘的療效，以及探究其相關(guān)作用機(jī)制，本研究以大鼠為試驗(yàn)對(duì)象，通過(guò)建立復(fù)方地芬諾酯(DC)便秘模型[5]，觀察首薈通便膠囊對(duì)大鼠排便以及腸道黏膜功能的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物 SD大鼠，SPF級(jí)，體重180～220 g，120只，雌雄各半，購(gòu)自濟(jì)南朋悅實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育有限公司提供，動(dòng)物合格證號(hào):37009200006204。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分籠常規(guī)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境飼養(yǎng)。

1.1.2 藥物 首薈通便膠囊(魯南厚普制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字Z20150041)。芪蓉潤(rùn)腸口服液(北京北衛(wèi)藥業(yè)有限責(zé)任公司，生產(chǎn)批號(hào):160133)。復(fù)方地芬諾酯片(常州康普藥業(yè)有限公司，生產(chǎn)批號(hào)：20160912)。

1.1.3 試劑與儀器 AB-PAS染色液(廈門邁威生物科技有限公司，生產(chǎn)批號(hào)：161230)。倒置熒光顯微鏡(日本Olmyplus，型號(hào)CKX41)、像采集卡(佳能中國(guó)，CanonUtilities系統(tǒng))。

1.2 方法

1.2.1 分組與模型制備 將60只大鼠按體重隨機(jī)分成6組，分別為正常組、模型組、芪蓉潤(rùn)腸口服液組、首薈通便膠囊低、首薈通便膠囊中、首薈通便膠囊高劑量組，每組10只，雌雄各半。末次給藥結(jié)束，各實(shí)驗(yàn)組大鼠禁食不禁水16 h，陰性對(duì)照組給予蒸餾水和淀粉的混懸液10 mg/kg，其余每組給予復(fù)方地芬諾酯片10 mg/kg灌胃。30 min后造成便秘模型。

1.2.2 給藥方法 正常組給予10 mL/kg純水，模型組、芪蓉潤(rùn)腸口服液組給予芪蓉潤(rùn)腸口服液10 mL/kg，芪蓉潤(rùn)腸口服液按原液的1.67倍稀釋。連續(xù)給藥7 d，期間自由飲食。首薈通便膠囊低、首薈通便膠囊中、首薈通便膠囊高劑量組的給藥濃度分別為0.07 g/kg、0.21 g/kg和0.63 g/kg。

1.2.3 首薈通便膠囊對(duì)便秘大鼠排便的影響 末次造模30 min后，各實(shí)驗(yàn)組給予含相應(yīng)受試物的墨汁灌胃，模型組和陰性對(duì)照組給予相應(yīng)體積的墨汁灌胃，灌胃體積為20 mL/kg體重。給藥后立即將大鼠單獨(dú)放入干凈的鼠籠內(nèi)，并正常提供飼料和飲水，同時(shí)開始準(zhǔn)確計(jì)時(shí)。觀察記錄每只大鼠首次排出黑便的時(shí)間，并連續(xù)觀察12 h，記錄12 h內(nèi)大鼠排黑便粒數(shù)、干重及性狀。

1.2.4 首薈通便膠囊對(duì)便秘大鼠腸蠕動(dòng)的影響 末次給藥后，各實(shí)驗(yàn)組大鼠禁食不禁水16 h，除正常組給予10 mg/kg純水外，其余各實(shí)驗(yàn)組給予復(fù)方地芬諾酯片10 mg/kg。造模30 min后，各給藥組給予含相應(yīng)受試物的墨汁，模型組和正常組給予相應(yīng)體積墨汁，灌胃體積為20 mL/kg體重。給予墨汁25 min后，脫頸處死大鼠，打開腹腔分離腸系膜，立刻剪取上端自幽門、下端至回盲部的腸管，平鋪于玻璃板上，輕輕將小腸拉成直線進(jìn)行測(cè)量。腸管長(zhǎng)度為“小腸總長(zhǎng)度”，從幽門至墨汁前沿為“墨汁推進(jìn)長(zhǎng)度”。墨汁推進(jìn)率=[墨汁推進(jìn)長(zhǎng)度(cm)/小腸總長(zhǎng)度(cm)]×100%。

1.2.5 首薈通便膠囊對(duì)結(jié)腸黏膜上皮細(xì)胞中黏液細(xì)胞的影響 將60只大鼠按體重隨機(jī)分為正常組、模型組、芪蓉潤(rùn)腸口服液組、首薈通便膠囊低、首薈通便膠囊中、首薈通便膠囊高劑量組，每組10只，雌雄各半。每天上午9時(shí)，除正常對(duì)照組外各組均灌胃復(fù)方地芬諾酯10 mg/kg，正常組給予等體積純水。觀察組動(dòng)物在下午15:00灌胃給予相應(yīng)等體積藥物，首薈通便膠囊低、首薈通便膠囊中、首薈通便膠囊高劑量組的給藥濃度分別為0.09 g/kg、0.27 g/kg和0.71 g/kg。模型組灌純化水10 mL/kg，正常組自由飲水，其他組不給水，連續(xù)造模給藥7 d。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后麻醉下取盲、結(jié)腸段，隨即固定梯度乙醇脫水制作石蠟切片，AB-PAS染色，供組織學(xué)觀察。顯微鏡下觀察結(jié)腸黏膜上皮細(xì)胞中陽(yáng)性染色細(xì)胞即黏液細(xì)胞數(shù)目，隨機(jī)計(jì)數(shù)十個(gè)視野，取其平均值。計(jì)數(shù)以每100個(gè)上皮細(xì)胞中黏液細(xì)胞數(shù)表示[2]。

2 結(jié)果

2.1 首薈通便膠囊對(duì)復(fù)方地芬諾酯便秘模型大鼠排便及腸蠕動(dòng)的影響 與正常組比較，模型組首粒排便時(shí)間明顯延長(zhǎng)；與模型組比較，各給藥組首粒排便時(shí)間均明顯縮短，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)；與正常組比較，模型組糞便數(shù)量明顯減少；與模型組比較，各給藥組糞便數(shù)量均明顯增多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)；與正常組比較，模型組糞便重量明顯降低；與模型組比較，各給藥組糞便重量均明顯上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)。與正常組比較，模型組腸道推進(jìn)率明顯降低；與模型組比較，各給藥組有明顯促進(jìn)便秘模型大鼠小腸蠕動(dòng)的作用，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)。見表1。

表1 首薈通便膠囊對(duì)復(fù)方地芬諾酯便秘模型大鼠排便和腸道蠕動(dòng)的影響

注：與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01

圖1 首薈通便膠囊對(duì)復(fù)方地芬諾酯便秘模型大鼠 腸黏液影響的組織切片圖(AB-PAS,×100)

注：A:正常組；B:模型組；C:首薈通便膠囊低劑量組；D:首薈通便膠囊中劑量組；E:首薈通便膠囊高劑量組；F:芪蓉潤(rùn)腸口服液組

2.2 首薈通便膠囊對(duì)復(fù)方地芬諾酯便秘模型大鼠腸黏液的影響 正常組大鼠腸道腺上皮細(xì)胞產(chǎn)生豐富含硫黏蛋白的酸性黏液素，末梢黏膜表面履蓋酸性黏液素層；便秘模型組大鼠腸道腺上皮細(xì)胞形態(tài)瘦小，含酸性黏液素很少，黏膜表面酸性黏液素層薄，與正常組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，給予芪蓉潤(rùn)腸口服液組黏膜表面黏液層較模型組增加，杯狀細(xì)胞數(shù)量及黏液含量有所增加；首薈通便膠囊低劑量組黏液少量增加，杯狀細(xì)胞數(shù)量及黏液含量有所增加；首薈通便膠囊中劑量組黏液層厚度明顯增加，黏膜層杯狀細(xì)胞排列較為整齊，數(shù)量明顯增多，黏液含量明顯增加，與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；首薈通便膠囊高劑量組黏液層厚度明顯增加，黏膜層杯狀細(xì)胞排列較為整齊，數(shù)量明顯增多，黏液含量明顯增加，與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見圖1、表2。

120只動(dòng)物，分2次實(shí)驗(yàn)(每次60只)，一次是觀察排便和腸蠕動(dòng)，另一次是觀察黏液厚度和黏液含量。

表2 首薈通便膠囊對(duì)便秘模型大鼠腸道黏液層厚度 及結(jié)腸黏液含量的影響

注：與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01

3 討論

慢性便秘通常屬中醫(yī)“虛秘”的范疇,一般病程較長(zhǎng)，反復(fù)發(fā)作，遷延不愈，給患者的工作生活帶來(lái)了較大的困擾。西藥治療便秘遠(yuǎn)期療效差，復(fù)發(fā)率高，作用環(huán)節(jié)單一，具有不良反應(yīng)，因此中醫(yī)中藥治療便秘受到重視[6]。

多數(shù)中醫(yī)學(xué)家在治療慢性便秘時(shí)贊同“因虛致秘”的病因病機(jī)理論，認(rèn)為本病癥多責(zé)之于臟腑氣血陰陽(yáng)之不足，證屬本虛標(biāo)實(shí)。首薈通便膠囊養(yǎng)陰益氣，補(bǔ)瀉兼施，標(biāo)本兼治。處方中何首烏和蘆薈為君藥，以益精養(yǎng)血，清肝瀉熱，潤(rùn)腸通便；決明子、枸杞子及阿膠為臣藥，以清肝明目，滋補(bǔ)肝腎，補(bǔ)血止血，滋陰潤(rùn)燥通便；佐以人參和白術(shù)補(bǔ)氣健脾，使瀉不傷正；以枳實(shí)破氣消積，引經(jīng)入藥。首薈通便膠囊配伍嚴(yán)謹(jǐn)，標(biāo)本兼顧，切中病機(jī)。君臣佐使俱全，藥物之間七情相合，共奏潤(rùn)腸通便、瀉濁排毒、養(yǎng)陰益氣之功。同時(shí)現(xiàn)代藥理研究表明，蘆薈提取物可以通過(guò)影響鈉離子的主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)來(lái)干擾腸道內(nèi)的水分分泌與吸收平衡，從而達(dá)到潤(rùn)腸通便的效果[7-8]；同時(shí)組方中其他中藥對(duì)便秘也有不同的藥理作用[9-12]。

復(fù)方地芬諾酯片致大鼠便秘結(jié)果顯示，大鼠排便數(shù)量減少，糞便重量降低，腸道推進(jìn)率下降，結(jié)腸黏液量明顯減少，杯狀細(xì)胞萎縮，分泌黏液能力下降甚至喪失，結(jié)果表明此模型與臨床上便秘患者的腸道病理改變吻合度較高，是研究便秘藥物的較好模型。杯狀細(xì)胞是腸道的正常細(xì)胞，具有分泌黏液、潤(rùn)滑和保護(hù)腸道黏膜的作用，其分泌功能下降可能是慢傳輸型便秘的根本原因，而腸道的微循環(huán)供養(yǎng)能力決定了杯狀細(xì)胞的活力。本研究發(fā)現(xiàn)，首薈通便膠囊中、高劑量組可明顯縮短大鼠首次排便時(shí)間(P<0.05)，增加12 h排便顆粒數(shù)(P<0.05)，并且能增加小腸碳墨推進(jìn)率(P<0.05)。首薈通便膠囊中、高劑量組大鼠結(jié)腸黏膜黏液細(xì)胞數(shù)明顯增多，與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。做為臨床常用的首薈通便膠囊中劑量，總體效果優(yōu)于高劑量和低劑量，表明首薈通便膠囊中劑量在治療便秘時(shí)達(dá)到了補(bǔ)瀉平衡，劑量最佳。

綜上所述，首薈通便膠囊能夠有效地改善便秘癥狀，提高患者的生命質(zhì)量，其作用機(jī)制可能與提高腸道動(dòng)力，增加結(jié)腸黏液的分泌有關(guān)，更深層次的機(jī)理還需要進(jìn)一步研究。