硫酸慶大霉素C組分HPLC測定方法研究

汪柳芹 昌智華 黃瓊姑

（海南亞洲制藥股份有限公司 海南 海口 570216）

引言

對于慶大霉素組分的分析檢測一直是藥品檢驗人員和科研人員努力想解決的難題之一，主要有以下兩點原因：一是慶大霉素是強極性、難揮發性的化合物，在反相色譜中難以保留和分離；二是分子中缺少發色基團或熒光物質，因而難以采用常規的UV檢測器來對其進行檢測。

本研究采用低溫分流法檢測硫酸慶大霉素C組分，擬從優化ELSD低溫分流法儀器色譜條件，建立一個操作簡單、質量可控，重現性好的硫酸慶大霉素C組分測定方法。

1.材料與方法

1.1 儀器

Agilent 1260 Infinity Ⅱ型高效液相色譜儀（包括：泵、自動進樣器、柱溫箱）；Agilent Openlab CDS 2.2工作站；SEDEX 75型蒸發光散射檢測器（迪馬公司）；十萬分之一電子天平（梅特勒-托利多）；KQ2200型超聲波清洗器（昆山超聲儀器有限公司）；微孔濾膜抽濾裝置；色譜柱:Ultimate LPC18（4.6×250mm，5μm；月旭科技公司）。

1.2 試劑

甲醇（HPLC級），Thermofisher公司；三氟乙酸（HPLC級），Anaour公司；二次蒸餾水；慶大霉素標準物質（C1a：15.2%；C2：16.9%；C2a：10.3%；C1：15.9%），中國食品藥品檢定研究院，批號：130326-201716；小諾霉素標準物質（含量：51.8%），中國食品藥品檢定研究院，批號：130342-201404；西索米星標準物質（含量：56.0%），中國食品藥品檢定研究院，批號：130635-201301。

表2 硫酸慶大霉素供試品-1和供試品-2測試結果

1.3 色譜條件

流動相：0.2mol/L三氟乙酸水溶液-甲醇（96:4），pH：0.76，單流路；流速：1.2ml/min；色譜柱：Ultimate LPC18，色譜柱規格：4.6×250mm，5μm；檢測條件：漂移管溫度50℃，載氣種類：空氣，載氣壓力：3.5bar；維持電壓穩定（ELSD檢測器最好連接穩壓器）。

1.4 標準溶液的配制

精密慶大霉素標準物質172.52mg置于20ml容量瓶，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為慶大霉素標準溶液（3）；精密量取慶大霉素標準溶液（3）5ml,置10ml容量瓶，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為慶大霉素標準溶液（2）；精密量取慶大霉素標準溶液（3）2ml，置10ml容量瓶，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為慶大霉素標準溶液（1）。慶大霉素標準溶液系列濃度見表1。

表1 慶大霉素標準溶液系列濃度

2.結果

測試硫酸慶大霉素樣品溶液，測試結果見表2。

3.結論

本實驗通過對藥典2015版硫酸慶大霉素C組分測試方法—蒸發光低溫分流法實驗條件進行摸索，對流路、色譜柱、流速、電壓穩定等多種影響因素進行了優化，提高了分析的準確性。